全 文 ：研究报告
Research Report
中国水仙 NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤
郑清波 赵明明 郑鑫 刘绪明 樊金萍 *
东北农业大学园艺学院,哈尔滨, 150030
*通讯作者, fan_xuer2000@aliyun.com
摘 要 本研究以中国水仙花瓣总 RNA为模板进行反转录 PCR，扩增得到与预期大小相同的 PCR产物
带，回收反转录 PCR产物，将其与 pEASY-T1克隆载体连接并导入大肠杆菌 DH5α进行克隆，经菌落 PCR
和双酶切鉴定，筛选带有目的基因的重组质粒并进行测序。测序结果表明中国水仙花香基因 SAMT cDNA
的 ORF片段 1 131 bp编码 376个氨基酸残基，与已报导的中国水仙 SAMT (JX273470)的同源性为 99.2%。
将目的基因片段与 PBI121 表达载体连接，并利用农杆菌介导法将 NtSAMT 基因转化到金鱼藤(Asarina
procumbens)中，以金鱼藤无菌苗茎段为遗传转化外植体，通过抗性筛选获得 12株转化植株，对获得的 12株
疑似转基因植株进行 PCR检测，其中有 8株呈阳性；通过 RT-PCR检测得到的阳性植株，其中有 5株呈阳
性。检测结果表明，该研究成功克隆水仙花 NtSAMT基因并在金鱼藤植物中得到表达。
关键词 NtSAMT,基因克隆,金鱼藤,表达载体构建,转化
Clone of the NtSAMT Gene in Narcissus tazetta L. Var. chinensis Roem and
Transformation of Asarina procumbens
Zheng Qingbo Zhao Mingming Zheng Xin Liu Xuming Fan Jinping *
College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Harbin, 150030
* Corresponding author, fan_xuer2000@aliyun.com
DOI: 10.13417/j.gab.035.000420
Abstract A novel cDNA was cloned by PT-PCR using the total RNA as template, and amplified to the desirable
size. The RT-PCR products were reclaimed and transformed into E. coli DH5α together with the pEASY-T1
vector. Identified by colony PCR and digestion of BamHⅠand EcoRⅤ, the recombinant plasmid with target gene
was screened out and conducted the sequence analysis. Results of the sequence analysis showed that the ORF
fragment of the SAMT cDNA was successfully cloned form Narcissus tazetta L. var. chinensis roem gene, with the
length of 1 131 bp and encoded 376 amino acids fragment which shared 99.2% homology to that of previously
reported SAMT cDNA from Narcissus tazetta L. var. chinensis roem (JX273470). Connecting the purpose gene fra-
gments and PBI121 expression vector, and using the method of agrobacterium mediated NtSAMT genes into
Asarina procumbens, with sections of stems for genetic transformation receptor, twelve putative transgenic plants
were obtained, and 8 were identified as positive transgenic plants by PCR assay; and 5 positive plants were
obtained by RT-PCR test. This study successfully cloned the SAMT gene of Narcissus tazetta L. var. chinensis
roem and expressed in Asarina procumbens.
Keywords NtSAMT, Gene cloning, Asarina procumbens, Expression vector construction, Transformation
基金项目：本研究由中国黑龙江省省教育厅项目(12531014)资助
基因组学与应用生物学，2016年，第 35卷，第 2期，第 420-428页
Genomics and Applied Biology, 2016, Vol.35, No.2, 420-428
花香在植物生长发育过程中起着重要的作用，
同时它还可以提高植物的观赏价值，近几年随着分
子生物学的发展，花香分子水平的研究已成为一大
热点。中国水仙(Narcissus tazetta L. var. chinensis roem)
为石蒜科水仙属植物，多年生草本，是我国传统十大
名花之一，冬季开放，香味浓郁，观赏价值很高(周翔
等, 2013)。有研究报道不同光照强度对‘金盏银台’
水仙花香释放的影响，研究表明漳州‘金盏银台’水
仙释放出 8大类共 58种化合物，萜烯类、酯类及烷
烃类化合物种类数明显高于其他类化合物(窦雅君
等, 2014)。李科等(2015)利用气相色谱质谱联用仪
GC-MS分别对‘云香’水仙花蕾期、初花期、盛花期、
衰败期的花朵样品进行花香成分分析，结果表明‘云
香’水仙的香气成分主要为萜烯类化合物和苯丙酸
类化合。其中苯丙酸类化合物的合成取决于苯丙氨
酸代谢途径，而水杨酸羧基甲基转移酶 SAMT是苯
丙氨酸代谢途径中重要的催化酶，它催化水杨酸和
S-腺苷甲硫氨酸形成水杨酸甲酯(methyl salicylate,
MeSA) (Koo et al., 2007)，MeSA是植物花香成分中广
泛存在的挥发酯，是花香成分中主要研究的对象。目
前从茉莉秋兰(Stephanotis floribunda)、金鱼草(Antir-
rhinum majus)、花烟草 (Nicotiana alata)、水稻 (Oryza
sativa)、西红柿(Solanum lycopersicum)等三十多种不
同植物中都已成功克隆分离出 SAMT基因的全长，
并且分析了这些基因的功能(黄铭坤等, 2011)。近来
的研究表明，SAMT基因在花香产物代谢调控方面起
着重要作用，Ma等(2012)通过同源克隆从腊梅花中
得到 SAMT 基因并在大肠杆菌中表达。庞宏东等
(2014)通过农杆菌介导法将腊梅 SAMT基因转化到
烟草中，然而转化成功后，在转基因烟草花香中没能
检出目标成分水杨酸甲酯的存在。林江波等(2013)利
用 RACE技术从中国水仙花朵中克隆了水杨酸甲酯
合成酶基因，通过半定量分析，SAMT基因在花蕾期
就有表达，第 1天完全开放时各部位均有表达，以雄
蕊与雌蕊的表达量最高，从第 8天开始检测不到表
达，说明随着水仙花花朵的衰老 SAMT基因的表达
量也逐渐降低。
金鱼藤(Asarina procumbens)是玄参科金鱼藤属
多年生匍匐型草本植物，其叶片繁茂花色淡雅，在园
林中常用于墙体的垂直绿化和垂吊栽培，是良好的
园林观赏植物，但是缺少花香(张美恒等, 2012)。本实
验利用已知基因克隆得到中国水仙花香基因 NtSAMT
cDNA的 ORF片段，其长度为 1 131 bp编码 376个
氨基酸。并采用农杆菌介导法将 NtSAMT基因转入
金鱼草中，并用分子检测方法鉴定转化效果，为探究
金鱼藤花香提供基因资源，对提高金鱼藤的园林绿
化价值和改良观赏植物花香基因有着重要的意义。
1结果与分析
1.1中国水仙 NtSAMT基因的克隆
用 TRIzol法提取中国水仙花瓣的总 RNA凝胶
电泳有 28S、18S和 5S 3条条带，其中 28S亮度约是
18S的 2倍(图 1A)，说明提取的总 RNA完整可以进
行 cDNA第一链的合成。以反转录得到的 cDNA为
模板进行 PCR扩增，扩增后，将获得的 NtSAMT基因
片段插入到 pEASY-T1载体 BamHⅠ和 EcoRⅤ酶切
位点之间，转化 DH5α感受态细胞并进行蓝白斑筛
选，挑取白色单菌落通过 PCR筛选以及电泳检测，在
1 269 bp处有特异条带(图 1B)。提取质粒，用 BamHⅠ
和 EcoRⅤ进行双酶切检测，证明特异条带为目的重
组子(图 1C)。结果表明，中国水仙花香基因 NtSAMT
克隆成功，将重组子命名为 pSAMT，将鉴定好的菌
液送往北京金唯智生物科技有限公司测序。
1.2 中国水仙 NtSAMT 全长 cDNA 序列及其推测的
氨基酸序列分析
使用 DNAMAN软件分析，证实克隆获得的中
国水仙花香基因 NtSAMT cDNA片段包含引物序列
全长共 1 269 bp，包含 1 131 bp的开放阅读框。该基
因编码蛋白质的分子量大小为 42.46 kD，等电点(pI)
图 1 NtSAMT基因的克隆及双酶切鉴定
注: A:中国水仙花瓣总 RNA; M: DL-2000; B:菌液 PCR; M: DL-2000; C: pSAMT质粒双酶切; M: DL-10000
Figure 1 NtSAMT gene cloning and double enzyme identification
Note: A: Total RNA of flower petals of Narcissus tazetta var. chinensis; M: DL-2000; B: PCR detection of bacteria solution; M:
DL-2000; C: Double enzyme identification of pSAMT; M: DL-10000
中国水仙 NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤
Clone of the NtSAMT Gene in Narcissus tazetta L. Var. chinensis Roem and Transformation of Asarina procumbens 421
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
图 2中国水仙 NtSAMT全长 cDNA序列及其编码氨基酸序列
Figure 2 The NtSAMT cDNA sequence of Narcissus tazetta var. chinensis and its derived encoding amino sequence
为 5.11，编码 376个氨基酸(图 2)与 GenBank登录号
为 JX273470的中国水仙氨基酸(AFR23078)数量相
同，同源性为 99.2%，两者之间有 3个氨基酸残基差
异，分别是 H20与 Y20、L62与 S62、L143与 F143。
将其与其他植株的氨基酸序列进行同源性多重序列
比较(图 3)同源性在 41.6%~99.2%之间(表 1)，为了表
明新克隆的中国水仙花香基因 SAMT与其他植物花
香基因 SAMT的相关关系，绘制了植物 SAMT基因
的分子进化树(图 4)，由图可知本试验克隆出的中国
水仙 SAMT基因与在 GenBank中已登录的中国水仙
SAMT基因(登录号为 AFR23078)同源性较高且归属
于同一个聚类分支，而与其他含有该基因的植物比
较，SAMT基因在不同种植物中氨基酸序列的同源性
相对较小。
422
中国水仙 NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤
Clone of the NtSAMT Gene in Narcissus tazetta L. Var. chinensis Roem and Transformation of Asarina procumbens
图 3中国水仙与部分已报道的植物 SAMT蛋白序列比较分析
Figure 3 Comparative analysis of SAMT protein sequences between Narcissus tazetta var. chinensis and other reported plants
1.3植物表达载体的构建
以质粒 pSAMT为模板，S2和 A2为引物，扩增
NtSAMT基因。扩增出与预计的片段大小相同的片
段。回收目的片段，将其插入到 pEASY-T1中间载
体中，重组自转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞，通
过蓝白斑筛选，选择抗性克隆提取质粒 DNA，进行
双酶切鉴定，可以切出与目的片段大小相同的片
段。用 BamHⅠ和 SacⅠ双酶切 pT1SAMT和PBI121，
回收 NtSAMT和 PBI121的基因片段，将二者进行连
接，转化大肠杆菌 DH5α感受态，命名为pBISAMT。
经 BamHⅠ和 SacⅠ双酶切质粒 pBISAMT检测证明
NtSAMT基因已经插入表达载体 PBI121中(图5A)。
将鉴定好的菌液送往金唯智公司测序，结果表明
插入的基因片段为克隆得到的 NtSAMT 基因(刘超
等, 2015)。
采用冻融法将 pBISAMT导入农杆菌 LBA4404
感受态细胞中，提取质粒 DNA，进行 PCR鉴定后
(图 5B)，准备转化金鱼藤茎段。
423
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
表 1新克隆的中国水仙 NtSAMT基因编码的氨基酸与其他植物 SAMT蛋白质同源性分析
Table 1Homologymultiple alignment ofencodingamino sequenceofNtSAMT betweenNarcissus tazettaL. var.Chinensis andother plants
序号
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
新克隆
NtSAMT
42.3
43.4
47.1
45.8
41.6
43.3
43.0
99.2
43.9
44.7
45.0
44.4
43.9
47.2
1
55.4
62.0
53.7
58.1
68.0
57.3
43.1
61.3
59.7
59.9
61.1
58.5
61.7
2
59.5
51.6
57.5
56.5
74.2
44.2
58.8
58.8
59.1
58.5
58.3
62.8
3
59.6
61.5
62.4
63.1
47.9
68.3
66.9
67.2
66.9
67.2
73.0
4
56.4
54.9
52.2
46.6
57.4
56.9
57.7
58.5
57.7
60.3
5
58.8
59.0
42.5
60.3
59.1
60.3
59.4
59.7
65.5
6
57.4
44.1
64.1
62.1
62.4
63.6
61.3
63.6
7
43.8
58.9
58.4
58.9
58.6
57.8
61.7
8
44.7
45.5
45.8
45.3
44.7
48.1
9
93.6
93.3
96.4
95.5
67.6
10
97.8
93.6
94.7
66.5
11
93.3
93.9
66.8
12
94.4
67.3
13
65.9
注 : 1: AAN40745; 2: AIN76709; 3: AGC11863; 4: ABU88887; 5: AAF00108; 6: AIY26015; 7: ACP20216; 8: AFR23078; 9:
ACZ55219; 10: AFS35577; 11: ACZ55216; 12: ACZ55222; 13: AAW66850; 14: AGR50490
Note: 1: AAN40745; 2: AIN76709; 3: AGC11863; 4: ABU88887; 5: AAF00108; 6: AIY26015; 7: ACP20216; 8: AFR23078; 9:
ACZ55219; 10: AFS35577; 11: ACZ55216; 12: ACZ55222; 13: AAW66850; 14: AGR50490
图 4 NtSAMT基因与其他植物 SAMT的进化树分析
Figure 4 Phylogenetic analysis of the NtSAMT gene and SAMT
transcription factors of other plants
图 5重组质粒 pBISAMT的酶切及转化农杆菌的鉴定
注: A: pBISAMT酶切鉴定, M: DL10000 Marker; B:农杆菌中
质粒 pBISAMT的 PCR鉴定; M: DL2000 Marker
Figure 5 Restricition analysis of recombinant plasmid pBISAMT
and PCR detection of plasmid DNA from transformed strain
LBA4404
Note: A: Restricition analysis of recombinant plasmid, M:
DL10000 Marker ; B: PCR detection of plasmid DNA in strain
LBA4404; M: DL2000 Marker
1.4外源基因转化金鱼藤
金鱼藤茎段愈伤组织用 pBISAMT/LBA4404侵
染，避光共培养 3 d后，转置筛选培养基，以未经农杆
菌侵染转化的金鱼藤茎段组织为对照。20 d后可看
见有大量的愈伤组织长出(图 6A)，而对照组织在抗
性培养基上发生褐化直至死亡(图 6B)。通过过继代
培养和生根培养后共收获 12株抗性苗(图 6C;图 6D)。
对转基因金鱼藤植株和未转基因对照植株植株形
态、进行观察，均未发现有明显差异(图 6E)。
1.5抗性植株的 PCR检测
CTAB法分别提取转化植株和非转基因植株的
总 DNA，用 NtSAMT基因的引物 S1和 A1进行 PCR
扩增、电泳检测后发现，其中有 8株在 1 269 bp处扩
424
增出与对照质粒 PCR产物大小相似的单一条带，而
未转基因金鱼藤植株均未扩增出条单一条带(图 7)，
可以初步判定 NtSAMT基因成功地转化到了植物的
基因组中。
1.6转基因植株的 RT-PCR检测
用 TRIzol提取经 PCR检测为阳性的 8株转基
因金鱼藤和非转基因金鱼藤的总 RNA，经 RT-PCR
检测，有 5株在 1 269 bp处有单一明亮条带，与对照
图 6金鱼藤愈伤组织遗传转化及抗性植株的再生
注: A:侵染后共培养; B:在筛选培养基上未经农杆菌侵染的
茎段; C, D:再生的转基因苗; E: 1:移栽成活的非转基因植株;
2:移栽成活的转基因植株
Figure 6 Asarina procumbens embryogenic calli transformation
and Resistance plant Regeneration
Note: A: Co-culture after infection; B: Untreated explants on se-
lected medium; C, D: The regenerated transgenic seedlings; E: 1:
The non-transgenic plants of transplanting survival; 2: The trans-
genic plants of transplanting survival
图 7 NtSAMT基因转化金鱼藤植株的 PCR鉴定
注: M: DNA Ladder; 1~12:转化植株; P:质粒 pSAMT; CK:阴
性对照(非转基因金鱼藤); H:空白对照
Figure 7 PCR identification of NtSAMT gene from transformed
Asarina procumbens
Note: M: DNA Ladder; 1~12: Transformed plants; P: Plasmid
pSAMT; CK: Negative control (non-transgenic Asarina procumb-
ens); H: Blank control
图 8 NtSAMT基因转化金鱼藤植株的 RT-PCR鉴定
注: M: DNA Ladder; 1~8:转基因植株; H:空白对照; CK:阴性
对照(非转基因金鱼藤); P:质粒 pSAMT
Figure 8 RT-PCR identification of NtSAMT gene from trans-
formed Asarina procumbens
Note: M: DNA Ladder; 1~8: Transformed plants; H: Blank con-
trol; CK: Negative control (non-transgenic Asarina procumbens);
P: Plasmid pSAMT
质粒 PCR产物大小一致，非转基因的金鱼藤 RNA
反转录产物未扩增出相应条带(图 8)，可以断定在这
5个单株中发生了基因转录。
2讨论
花香的遗传改良是一项极为复杂的工程，研究
表明萜类、苯基 /苯丙烷类花香物质等其他次生代谢
产物的合成途径都很相似，只是催化合成最终产物
的关键酶不同。因此，在植物中直接引入催化代谢产
物的合成酶基因，可以加快酶催化合成代谢产物的
速率，即使不增加代谢途径中底物的浓度，同样可以
达到改变花香物质的产量的目的。Guterman等(2006)
克隆月季 AAT 基因并导入矮牵牛‘Mitchell’中，结
果在转基因矮牵牛的花香成分中检测到了乙酸卞酯
和乙酸苯乙酯两种新的挥发性物质。Tamer等(2003)
和 Lucker等(2004)分别将从柠檬中获得的 3个单萜
合成酶基因导入烟草中，在转基因的烟草植株的花
朵和叶片的挥发性物质中检测到 γ-萜品烯、柠檬
烯、β-蒎烯以及一些其它产物，并且人类的嗅觉可
以感觉到这些新合成的挥发性物质的存在。随着更
多转录基因被发现，通过引入外源基因使花卉香味
增加，为花香基因工程提供了一个新的策略。
本研究利用农杆菌介导法将 NtSAMT基因转入
金鱼藤中，对转基因植株进行了 PCR检测和 RT-PCR
检测，初步证明 NtSAMT基因已在金鱼藤中表达，但
对于转基因金鱼藤的花香成分的变化情况仍需进一
步试验研究，包括对转基因植株进行花香成分的测
定、基因表达水平的时空定量分析、基因表达对植株
生理代谢的影响及遗传稳定性的表达等，为探究金鱼
藤花香提供基因资源，对提高金鱼藤的园林绿化价值
中国水仙 NtSAMT基因的克隆及转化金鱼藤
Clone of the NtSAMT Gene in Narcissus tazetta L. Var. chinensis Roem and Transformation of Asarina procumbens 425
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
以及观赏植物进行花香遗传改良提供科学依据。
3材料与方法
3.1植物材料
中国水仙 (Narcissus tazetta var. chinensis roem)
“金盏银台”商品球购自福建省漳州市，用清水培养。
取盛花期花瓣，用液氮冻结后，置于-80℃冰箱中保
存备用。
金鱼藤(Asarina procumbens)由东北农业大学园
艺站提供，取茎段作为外植体。
3.2菌株及质粒
大肠杆菌(E. coil)菌株 DH5α、克隆载体 pEASY-
T1、根癌农杆菌菌株 LBA4404、植物表达载体 PBI121
均由东北农业大学园艺学院园林育种实验室提供。
3.3工具酶及主要试剂
TRIzol 试剂、T4 连接酶购于全式金生物公司，
HiFiScript cDNA试剂盒，琼脂糖凝胶 DNA回收试
剂盒、质粒提取试剂盒购于康为世纪生物公司，各种
限制性内切酶均购自 TaKaRa公司。其余常规药品均
为进口或国产分析纯级。
3.4中国水仙总 RNA的提取与 cDNA的克隆
采用 TRIzol 法提取中国水仙花瓣总 RNA，用
HiFiScript cDNA试剂盒进行 cDNA第 l链的合成。
参照 GenBank登录号为 JX273470的中国水仙
花香基因 SAMT序列在 ORF区外设计上游引物 S1：
5-AAGGAGCAAATTAGATTAAGGAG-3 和下游
引物 A1：5-TTATACGACATTAAACATCACCC-3。
PCR扩增程序为：94℃预变性 5 min，然后 94℃变性
30 s，60℃退火 30 s，每个梯度下降 0.5℃，72℃延伸
1 min，20 个循环，再以 50℃退火 30 s，72℃延伸
1 min，10个循环，最后 72℃延伸 11 min。用胶回收试
剂盒回收 cDNA，并与 pEASY-T1载体连接，转化
DH5α E. coli。通过蓝白斑筛选、PCR检测、双酶切检
测筛选重组质粒，命名为 pSAMT，阳性重组子送北京
金唯智生物工程公司测序。测序结果通过网站 www.
Ncbi.Nlm.Nih.gov/Blast和 DNAman软件进行分析。
3.5植物表达载体的构建
根据 PBI121 表达载体和 NtSAMT 基因全长设
计 1对特异引物，上游引物 S2：5-CGGGATCCAAT
TAGATTAAGCAG-3 (划线部分为 BamHⅠ酶切位点)
和下游引物 A2：5-CGAGCTCACCCCCAACATCA
TAG-3 (划线部分为 SacⅠ酶切位点)。PCR扩增程
序和胶回收方法同 1.4。目标条带经胶回收后，连接
到 pEASY-T1中间载体上，转化感受态细胞 DH5α，
重组质粒命名为 pT1SAMT。
将重组质粒 pT1SAMT 用 BamHⅠ和 SacⅠ酶
切，回收目的片段(NtSAMT基因)插入到经 BamHⅠ
和 SacⅠ双酶切后的 PBI121植物表达载体上，转化
感受态细胞 DH5α，经菌落 PCR和酶切鉴定后，得到
阳性重组质粒命名为 pBISAMT。提取重组质粒
pBISAMT用冻融法转化大肠杆菌 LBA4404。以转化
平板上长出的单菌落菌液为模板,用目的基因引物进
行 PCR扩增，凝胶电泳检测。
3.6金鱼藤遗传转化及抗性植株的再生
将含有 NtSAMT基因质粒的农杆菌单菌落接种
在 5mL含有硫酸卡那霉素(Kan, 50mg/L)、利福平(Rif,
100 mg/L)和链霉素(Sm, 50 mg/L)的 YEB 液体培养
基中，于 28℃，200 r/min振荡培养，至菌液 OD600为
0.5~0.6；然后将活化的菌液按 1:10的比例在 YEB
液体培养基中进行二次活化，至菌液 OD600 为
0.5~0.6；最后将菌液于 2 000 r/min离心 10 min，用
等体积的 MS液体培养基重悬，再振荡至液体 OD600
为 0.5~0.6备用。
将金鱼藤无菌苗茎段切成 1 cm 大小置于 M1
培养基上培养 10 d诱导愈伤组织形成，然后将长出
愈伤组织的茎段置于制备好的农杆菌菌液中侵染
15 min，无菌滤纸吸干多余菌液，重新置于共培养培
养基上，暗培养 3 d；再将茎段转移至 M2筛选培养
基上，正常光照条件下培养，每 10 d 更换 1 次培养
基，直到分化出不定芽；长芽后，将芽切下，转 M3继
代培养基上继代培养；待长至 2~3片叶时，切下转入
M4生根培养基上进行生根培养(表 2)。
3.7转基因植株的 PCR检测
用 CTAB法提取转植株叶片 DNA，以此 DNA
为模板，以 NtSAMT基因特异引物进行 PCR检测。以
质粒 pBISAMT作为阳性对照，以未转化的植株作为
阴性对照。PCR扩增程序方法同 1.4。
3.8转基因植株的的 RT-PCR检测
为进一步检测 NtSAMT在转基因植株中的表达
情况，用 TRIzol提取经 PCR检测阳性植株及非转基
因植株的总 RNA，反转录得到 cDNA，然后以反转录
产物为模板，对转 NtSAMT基因阳性植株进行 RT-
PCR检测，以检测目的基因在转录水平上的表达。
426
作者贡献
郑清波是本研究的实验设计和实验研究的执行
人，并完成了数据分析和论文初稿的写作；赵明明参
与实验设计；郑鑫和刘绪明协助完成了实验研究及
论文修改；樊金萍博士指导实验思路，论文修改。全
体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由中国黑龙江省省教育厅项目(12531-
014)资助。
参考文献
Dou Y.J., Zhai J., Hou F.M., Leng P.S., Wang W.H., and Hu Z.
H., 2014, Effect of different light intensities on the floral
aroma emitted form Chinese Daffodil (Narcissus tazetta L.
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表 2试验所用培养基组成和编号
Table 2 The medium composition and number
编号
Number
M1
M2
M3
M4
培养基用途
The purpose of the medium
预培养和共培养
Pre-culture and co culture
筛选培养基
Selection medium
继代培养基
Subculture medium
生根培养基
Root culture medium
培养基组成成分
Medium composition
MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L
MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+KT 0.3 mg/L+Kan 100 mg/L+Cef 400 mg/L
MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Kan 50 mg/L+Cef 300 mg/L
MS+Kan 50 mg/L+Cef 300 mg/L
注: Kan:硫酸卡那霉素; Cef:头孢霉素
Note: Kan: Kanamycin monosulfate; Cef: Cefradine
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Molecular Pathogens (MP)
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