全 文 ：两种栽培品种间存在明显差异。
近年来 , 我们对云南西双版纳地区的砂仁资源进行了初步考
察 , 发现该地区砂仁种质资源极其丰富 , 其中阳春砂至少存在圆
果型 、长果型 、小果型 3种不同的生态类型 , 3种不同类型可通过
株高 、果实形状及大小明显区分出 , 不同种质资源间还存在其它
性状如花 、叶舌颜色 、果实颜色等差异。马洁 [ 12]通过 GC-MS法
测定了西双版纳 16份不同种质挥发油的主要化学成分。结果表
明 , 不同种质间挥发油中各成分的比例差异较大。
以上研究可见阳春砂仁存在种内变异情况。 种内变异使
栽培群体中出现新类型 , 经过人工选择 、培育 , 可以选育出新
品种 , 但同时种内变异也可使栽培群体混杂 、退化。 目前大部
分产区砂仁产量较低 , 病害发生严重 , 这与砂仁种质混杂和品
种退化有一定的关联 。砂仁标准化和产业化的种植发展迫切
需要我们今后加强砂仁种质的收集 、整理和保护工作 , 并尽快
对现有种质资源进行品质 、抗病和抗逆性的鉴定与评价 , 为种
质创新与新品种培育奠定基础 , 以加速优异种质在生产上的
应用。
4　组织培养
近年来 , 一些学者利用阳春砂和海南砂根茎上的顶芽进行离
体培养获得再生植株 [ 13 ～ 15] 。张雅明等 [ 16]研究了阳春砂愈伤组
织诱导与植物再生的条件 ,结果表明:以阳春砂种子萌发后的茎
切段作为外植体 , 添加 0.5mg/L2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、
0.5mg/L萘乙酸(NAA)和 1.0mg/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)的
培养基适合愈伤组织的诱导。在该培养基中添加 6 mg/LAgNO3
可使诱导的愈伤组织更易于再分化。添加 0.1 mg/LNAA和 2.0
mg/L6-BA,再分别添加 0.5 mg/L呋喃氨基嘌呤(KT)或 0.1
mg/LN-苯基 -N-1, 2, 3-噻二唑 -5 -脲(TDZ)可诱导愈伤
组织的芽分化 , 丛生芽移至 MS培养基上可自然生根。这些研究
为进一步开展砂仁种质优化打下了基础。
参考文献:
[ 1 ] 　彭建明 ,张丽霞 ,马　洁 , 等.西双版纳引种栽培阳春砂仁的研究
概况 [ J] .中国中药杂志, 2006, 31(2):97.
[ 2 ] 　颜　艳.中药砂仁的研究进展 [ J] .中国中医药杂志 , 2007, 14
(4):304.
[ 3 ] 　胡玉兰 ,张忠义 ,林敬朋.中药砂仁的化学成分和药理活性研究进
展 [ J] .中药材 , 2005, 28(1):72.
[ 4 ] 　曾亚军 ,陈　训 ,彭惠蓉 ,等.砂仁及其常见混淆品分类鉴别 [ J].贵
州科学 , 2005, 23(3):60.
[ 5 ] 　李荣英 ,李学兰.西双版纳阳春砂仁生产现状调查 [ J] .中国民族
医药杂志 , 2005,增刊:165.
[ 6 ] 　陈　军 ,丁　平 ,徐新春 ,等.砂仁的药源调查和商品鉴定 [ J] .中
药材 , 2001, 24(1):18.
[ 7 ] 　罗天诰.森林药物资源学 [ M].北京:国际文化出版社 , 1994:531.
[ 8 ] 　丁　平 ,曾元儿 ,何智健 , 等.不同产地阳春砂挥发油气相色谱指
纹图谱研究 [ J] .中国药学杂志 , 2004, 39(6):418.
[ 9 ] 　丁　平 ,方　琴 ,张丹雁.云南引种阳春砂与阳春砂药理活性对比
研究 [ J] .中国药学杂志 , 2004, 39(5):342.
[ 10]　刘军民.砂仁 [ M] .北京:中国中医药出版社 , 2001:69.
[ 11]　张丹雁 ,刘军民 ,徐鸿华.阳春砂不同栽培品种的比较鉴别 [ J] .广
州中医药大学学报 , 2005, 22(1):1.
[ 12]　马　洁 ,张丽霞 ,彭建明 , 等.西双版纳不同种质阳春砂仁挥发油
的化学成分比较 [ J] .中药材 , 2007, 30(12):1489.
[ 13]　刘进平.阳春砂仁微繁殖技术研究 [ J] .亚热带植物科学 , 2004, 33
(3):37.
[ 14]　贺　红 ,刘婷娜.阳春砂的组织培养与植株再生 [ J] .植物生理学
通讯 , 2005, 41(1):57.
[ 15]　莫　饶 ,朱文丽 ,吴繁花 ,等.海南砂仁的离体快繁 [ J] .热带农业
科学 , 2003, 23(4):1.
[ 16]　张雅明 ,董　燕 ,周　聪 , 等.阳春砂愈伤组织诱导与植株再生
[ J] .广州中医药大学学报 , 2007, 24(1):66.
药理药化
收稿日期:2008-03-26;　修订日期:2008-09-25
基金项目:重庆市自然科学基金(No.CSTC2005BB5244)
作者简介:马登峰(1982-),男(汉族),河南驻马店人 ,现为西南大学在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药指纹图谱研究工作.
＊通讯作者简介:白志川(1956-),女(满族),新疆伊犁人 ,现任西南大学教授 ,硕士学位 ,主要从事药用植物生物技术研究工作.
色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究
马登峰 1 ,周　浓2 ,白志川 1＊ ,房立晶1 ,孙婵娟 1
(1.西南大学园艺园林学院 ,重庆 北碚 　400715;　2.大理学院药学院 ,云南 大理　671000)
摘要:目的 采用高效液相色谱(HPLC)色谱指纹图谱分析技术鉴别中药玄参产地。方法 采用 HPLC法测定了重庆市武
隆县玄参等 14个不同产地玄参样品。色谱条件 C18柱 ,甲醇 -1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱 , 检测波长 290 nm,体积
流量 1.0 ml/min, 柱温 30℃。结果 对重庆市武隆县 10批次玄参样品的多个活性成分进行综合评价 , 筛选出重庆市道地
药材玄参为建模对象 , 合成出玄参的标准 HPLC色谱指纹图谱模型;并用此模型和特征成分的相对峰面积比值准确地区
分浙江省磐安县等不同产地玄参。结论 研究将有助于玄参药材的标准化种植及质量控制。
关键词:玄参;　肉桂酸;　高效液相色谱法;　指纹图谱;　质量控制
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)04-0789-04
IdentificationoftheHabitatofRadixScrophulariaewithChromatographicFingerprinting
MADeng-feng1 ,ZHOUNong2 , BAIZhi-chuan1＊ ,FANGLi-jing1 ,SUNChan-juan1
(1.HorticultureGardenInstituteofSouthwestUniversity, Chongqing400715, China;2.PharmacologicalCol-
lege, DaliUniversity, Dali, Yunnan671000, China)
Abstract:ObjectiveToidentifytheHabitalofRadixScrophulariaewithChromatographicFingerprinting.MethodsActivecon-stituentswereextractedfromtenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.), whichcollected
fromChongqingWulongcounty, andevaluatedbyHPLC.ChromatographicconditionswasKromasilTMC18 columnwithmethanol-1% glacialaceticacidasmobilephase, thedetectionwavelengthwas290 nm, theflowratewas1.0ml· min-1 , andcolumn
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期
temperaturewas30℃.ResultsManyactiveconstituentsthatextractedfromtenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(Scro-
phularianingpoensisHemsl.), whichcolectedfromChongqingWulongcounty, wereevaluatedbyHPLC.Themodelsofstandard
HPLCFingerprintofRadixScrophulariaewereestablished;Takingthecinnamicacidasthereferencepeak, therelativetimeand
therelativepeakarearationofvariouscharacteristicspeakwerecalculated, andthesamplefromZhejiangprovincecouldbedis-
tinguishedbythismodelandtherelativepeakarearatioofthecharacteristiccomponents.ConclusionThisstudyisgoodforthe
standardplantingandqualitycontrolofRadixscrophulariae.
Keywords:RadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.);　Cinnamicacid;　HPLC;　Fingerprint;　Qualitycon-
trol
　　玄参科植物玄参 ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根具
有凉血滋阴 、泻火解毒的功效 ,临床上用于治疗热病伤阴 ,舌绛烦
渴 , 温毒发斑 ,津伤便秘 ,骨蒸劳嗽 , 目赤 , 咽痛 ,瘰疬 , 白喉 , 痈肿
疮毒 [ 1] 。玄参含哈巴苷 、哈巴苷元 、桃叶珊瑚苷 、 6 -对甲基梓
醇 、浙玄参苷甲 、乙等环烯醚萜类化合物及生物碱 、植物甾醇 、油
酸 、硬脂酸 、葡萄糖 、天冬酰胺 、微量挥发油等 [ 2] 。 《中国药典》
2005年版Ⅰ部对玄参的质量控制采用 HPLC法测定其中哈巴俄
苷的含量 [ 1] 。众所周知 , 单一指标性成分的含量测定往往难以
反映中药整体质量 , 而指纹图谱具有系统性 、特征性和重现性特
点 , 能较全面反映中药品质 , 现已成为中药质量评价和控制研究
的热点之一 [ 3 ～5] 。本文以具有轻泻 、抗细菌及真菌等作用的肉桂
酸 [ 6]作为指标成分 , 采用 HPLC法构建不同产地玄参药材的指
纹特征谱 , 为追踪不同产地的生药来源 、保证中成药的质量可控 、
建立可行的质量控制方法奠定了基础。
1　器材与方法
1.1 　仪器 Waters2695高效液相色谱仪 , Waters2996DAD二极
管阵列检测器 , Empower色谱工作站;METTLERAE240天秤(梅
特勒 -托利多仪器(上海)有限公司);KQ-250B型超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司);DHG-9240A型电热恒温鼓风
干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);SENCO, W2018型恒温水
浴锅(上海申生科技有限公司);SENCO, R系列旋转蒸发器(上
海申生科技有限公司);SHB-3型循环水多用真空泵(郑州杜甫
仪器厂);SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);
微型植物试样粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)。
1.2　 试剂 甲醇为色谱醇(美国 Fisher试剂公司), 水为二次蒸
馏水 , 其他试剂均为分析纯。
1.3　药材 肉桂酸对照品(供鉴别用 ,批号 0786-9802)由中国
药品生物制品检定所提供。不同产地玄参药材样品来源(见表
1),经西南大学园艺园林学院植物学教研室白志川教授鉴定为
玄参科植物玄参 ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根。
表 1　玄参样品来源(2005年)
实验
编号 采集地点
药用
部位
采集日期
(月-日)
S1 重庆市武隆县车盘乡 根 11-11
S2 重庆市武隆县赵家乡新华村马头山农业社刘三种植户 根 11-12
S3 重庆市武隆县赵家乡新华村水口农业社黄建国种植户 根 11-12
S4 重庆市武隆县赵家乡新华村水口农业社黄建平种植户 根 11-12
S5 重庆市武隆县赵家乡新华村马头山农业社刘刚种植户 根 11-12
S6 重庆市武隆县赵家乡新华村新房子农业社熊兴权种植户 根 11-12
S7 重庆市武隆县后坪乡 根 11-14
S8 重庆市武隆县龙洞乡 根 11-13
S9 重庆市武隆县赵家乡新华村新房子农业社李刚种植户 根 11-11
S10 重庆市武隆县黄莺乡 根 11-13
S11 重庆市南川市金佛山镇 根 11-17
S12 浙江省磐安县安文镇 根 11-25
S13 湖北省恩施州巴东县绿葱坡镇 根 11-30
S14 贵州省道真县平模镇 根 11-20
　　各产地玄参的种植方式均为人工栽培
1.4 　色谱条件 色谱柱为 YPW-KromasilTMC18柱(250mm×
4.6 mm, 5 μm)(美国迪马公司);流动相:甲醇 -1%冰醋酸 , 流
动相 A为甲醇 , 流动相 B为 1%冰醋酸水溶液。检测波长 290
nm, 柱温 30℃, 流速 1.0ml/min, 进样量 20μl。理论塔板数按肉
桂酸峰计算不低于 2 000,与其它峰的分离度均大于 1.0, 所有组
分均在 50min内被检测完。见表 2。
表 2　指纹图谱流动相线性梯度表
时间 t/min A流动相(%)
B
流动相(%)
0～ 20 95※65 5※ 35
20～ 30 65※54 35※ 46
30～ 40 54※25 46※ 75
40～ 50 25※12 75※ 88
1.5 　对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品适量 , 加甲醇
制成每毫升含 50.0μg的溶液 ,即得。
1.6　供试品溶液的制备 取玄参药材粉末(过 50目筛)约 1 g,
精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 30 ml, 密塞 , 称定重
量 , 浸泡 1 h后 , 超声处理(功率 250 W, 频率 40 kHz)30 min, 放
冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 ,
即得。
1.7 　方法学考察
1.7.1　 稳定性实验 取同一批次供试品(样品号:8), 在室温下
放置 , 分别于 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36, 48 h检测指纹图谱。 用
“中药指纹图谱相似度计算软件”计算 , 结果表明 , 在同一台仪器
测得的色谱指纹图谱的相似度分别为 0.999 7, 0.999 8, 0.999 5,
0.999 7, 0.999 6,满足相似度不小于 0.950的要求 , 各主要色谱
峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化 , RSD分别为
0.00% ～ 0.28%和 0.00% ～ 2.95%, RSD<3.00%, 各色谱峰的
相对保留时间在平均保留时间 ±1 min内 , 符合指纹图谱要求。
说明供试品溶液的成分在 48 h内是稳定的。
1.7.2　 精密度实验 取同一批次供试品(样品号:8), 连续进样
5次 , 记录指纹图谱。用 “中药指纹图谱相似度计算软件”计算 ,
结果表明 , 在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为
0.999 2, 0.999 8, 0.999 6, 0.999 7, 0.999 8, 满足相似度不小于
0.950的要求 ,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值
无明显变化 , RSD分别为 0.00% ～ 0.34%和 0.00% ～ 2.85%,
RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间 ±1 min
内 , 符合指纹图谱要求。说明仪器的精密度良好。
1.7.3　重复性实验 取同一批次样品(样品号:3), 按供试品溶
液的制备方法分别制备 5份供试品 , 记录指纹图谱。用 “中药指
纹图谱相似度计算软件”计算 , 结果表明 , 在同一台仪器测得的
色谱指纹图谱的相似度分别为 0.999 9, 0.999 2, 0.999 6,
0.999 8, 0.999 3,满足相似度不小于 0.950的要求 , 各主要色谱
峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化 , RSD分别为
0.00% ～ 0.34%和 0.00% ～ 2.84%, RSD<3.00%, 各色谱峰的
相对保留时间在平均保留时间 ±1 min内 , 符合指纹图谱要求。
说明该实验方法的重复性较好。
2 　结果
2.1 　供试品测定 同一上述实验条件下 , 连续测定 14批次供试
品 HPLC色谱图。
2.2 　指纹图谱 根据重庆市武隆县 10批次供试品测定结果所
给出的峰数 、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数 ,
进行分析 、比较 , 制定优化的指纹图谱见图 1。
2.3 　指纹图谱分析与评价 用 “ 1.4”项下的色谱条件测定了重
庆市武隆县 10批次玄参药材指纹图谱 ,见图 2。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4　
图 1　10批同一产地玄参药材甲醇提取物
的 HPLC指纹图谱共有模式(参照物为 12-肉桂酸)
图 2　重庆市武隆县 10批次玄参药材的 HPLC指纹图谱
通过对重庆市武隆县等 10个产地药材指纹图谱的测定
结果 ,比较其色谱图 , 确定了 14个色谱峰为各产地药材的共有峰。
对各指纹图谱中的共有峰的保留时间和相对保留时间进行统计 ,
计算结果见表 3。
表 3　玄参药材 14个共有特征峰的保留时间和峰面积
峰序号 保留时间t/min 峰面积
1 2.729 1 585 361
2 5.912 597 761
3 12.681 257 205
4 15.702 1 106 856
5 16.978 1 147 382
6 18.002 2 087 316
7 18.361 323 638
8 19.499 170 466
9 19.893 414 689
10 21.656 476 992
11 23.068 2 664 887
12(S) 25.857 3 738 165
13 38.407 349 738
14 38.910 1 073 038
2.3.1　共有指纹峰标定 根据 10批次供试品测定结果 ,标定共
有指纹峰。玄参 HPLC指纹图谱中 , 共有指纹峰 14个。与肉桂
酸参照物峰(12号峰)相比 , 其他 13个共有指纹峰相对保留时间
如表 4所示 , 共有指纹峰相对峰面积如表 5所示。
结果表明 ,各产地药材中共有峰的相对保留时间非常相近 ,
RSD在 0.00% ～ 1.42%之间 , 这也进一步证实了各共有峰选择
的准确性。
表 4　玄参药材 HPLC指纹图谱共有峰的相对保留时间
实验编号 共有峰相对保留时间峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11 峰 12 峰 13 峰 14
S1 0.104 2 0.230 9 0.492 3 0.610 2 0.659 7 0.701 0 0.719 6 0.762 2 0.774 4 0.845 3 0.901 8 1.000 0 1.499 0 1.518 2
S2 0.104 1 0.227 5 0.490 1 0.609 2 0.658 6 0.699 9 0.714 6 0.760 6 0.773 3 0.843 4 0.899 7 1.000 0 1.489 6 1.508 5
S3 0.104 3 0.227 1 0.489 9 0.609 1 0.658 3 0.700 0 0.715 1 0.762 4 0.774 0 0.844 3 0.900 3 1.000 0 1.486 3 1.510 5
S4 0.106 9 0.231 5 0.491 3 0.605 1 0.654 5 0.692 5 0.706 1 0.748 3 0.766 2 0.832 8 0.884 6 1.000 0 1.486 9 1.505 6
S5 0.106 8 0.230 4 0.490 9 0.605 3 0.654 5 0.692 2 0.705 7 0.747 8 0.765 5 0.831 6 0.883 1 1.000 0 1.481 9 1.500 3
S6 0.103 8 0.227 1 0.489 6 0.609 1 0.651 3 0.699 4 0.714 8 0.760 5 0.772 0 0.842 9 0.899 5 1.000 0 1.486 3 1.505 2
S7 0.104 2 0.227 2 0.489 1 0.609 1 0.658 5 0.699 7 0.714 8 0.761 2 0.773 7 0.844 0 0.900 4 1.000 0 1.492 8 1.511 8
S8 0.106 9 0.230 2 0.490 2 0.604 4 0.653 8 0.691 7 0.705 9 0.747 5 0.767 2 0.832 1 0.883 9 1.000 0 1.485 8 1.504 4
S9 0.106 6 0.231 2 0.491 7 0.605 3 0.654 6 0.692 1 0.705 5 0.747 7 0.765 4 0.831 5 0.883 1 1.000 0 1.482 1 1.500 6
S10 0.107 4 0.231 2 0.491 3 0.605 2 0.654 6 0.692 3 0.706 4 0.747 9 0.766 4 0.832 4 0.883 8 1.000 0 1.485 4 1.504 0
RSD(%) 1.42 0.84 0.21 0.38 0.42 0.60 0.76 0.95 0.51 0.75 0.99 0.00 0.34 0.36
表 5　玄参药材 HPLC指纹图谱共有峰的相对峰面积
实验编号 共有峰相对保留时间峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11 峰 12 峰 13 峰 14
S1 1.103 2 0.312 1 0.115 4 0.249 6 0.115 7 0.621 4 0.084 5 0.065 0 0.139 1 0.063 1 0.963 2 1.000 0 0.168 0 0.452 8
S2 0.287 3 0.081 9 0.082 5 0.394 9 0.536 4 0.711 8 0.133 7 0.085 9 0.124 7 0.236 4 0.798 5 1.000 0 0.120 7 0.405 6
S3 0.598 8 0.165 7 0.145 5 0.351 9 0.223 9 0.441 3 0.058 5 0.053 4 0.073 8 0.052 3 0.303 1 1.000 0 0.093 9 0.068 9
S4 0.278 0 0.097 8 0.077 4 0.387 4 0.615 8 0.722 0 0.124 5 0.056 4 0.151 4 0.223 0 0.823 2 1.000 0 0.119 2 0.409 1
S5 0.290 4 0.082 7 0.098 2 0.387 7 0.572 4 0.736 8 0.131 6 0.060 1 0.099 9 0.227 1 0.827 3 1.000 0 0.121 4 0.413 3
S6 0.287 8 0.077 8 0.096 7 0.378 2 0.528 6 0.683 3 0.129 5 0.082 2 0.119 7 0.231 4 0.791 9 1.000 0 0.113 3 0.393 2
S7 0.290 1 0.100 7 0.102 2 0.484 3 0.206 0 1.082 0 0.158 3 0.080 8 0.154 6 0.143 0 0.806 0 1.000 0 0.183 0 0.537 4
S8 0.181 3 0.104 7 0.031 5 0.213 0 0.158 8 0.318 6 0.027 5 0.073 2 0.073 2 0.065 0 0.612 1 1.000 0 0.044 3 0.118 9
S9 0.294 3 0.082 6 0.062 0 0.380 6 0.567 0 0.729 6 0.150 9 0.055 7 0.147 5 0.223 6 0.825 9 1.000 0 0.120 0 0.411 1
S10 0.808 4 0.420 1 0.049 8 0.079 3 0.083 6 0.321 6 0.046 2 0.032 3 0.118 6 0.045 5 0.714 0 1.000 0 0.090 0 0.187 0
RSD(%) 67.73 77.39 38.44 35.36 60.70 35.92 44.53 25.50 24.89 56.71 24.04 0.00 33.12 46.00
　　结果表明 , 重庆市武隆县不同批次的玄参药材 HPLC指纹图
谱存在一定的差异 , 其共有峰相对保留时间基本一致 , 相对峰面
积比值存在较大的差异 ,其原因有待进一步探索。
2.3.2　共有指纹峰面积比值 根据《中药注射剂指纹图谱研究
的技术要求(暂行)》规定 ,各共有指纹峰的峰面积的比值必须相
对固定:单峰面积占总峰面积≥20%,其差值 <20%;单峰面积占
总峰面积≥10%而 <20%, 其差值 <25%;单峰面积占总峰面积
<10%,面积比值不做要求 , 仅需检定相对保留时间。 结果表明 ,
除肉桂酸参照物峰(12号峰)以外 , 1号 、6号 、11号共有指纹峰面
积(峰)超过总峰面积的 10%而小于 20%, 规定 1号峰相对峰面
积比值为 0.331 5 ～ 0.552 5, 规定 6号峰相对峰面积比值为
0.477 6 ～ 0.796 0, 规定 11号峰相对峰面积比值为 0.559 5
～ 0.933 1。
2.3.3　共有指纹峰特征 1号峰后分裂有 1个小峰 , 2号峰与 3
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期
号峰之间有 3 ～ 5个小峰;3号峰与 4号峰之间有一段锯齿状峰;4
号峰为一平头峰 , 4号 、 5号 、6号 、7号和 8号为相连峰 , 其中 5号
峰为连在一起的小锯齿峰;8号和 9号峰之间有 1小峰;9号与 10
号峰之间有一段锯齿状峰;11号与 12号峰(S峰)之间有一个小
峰;12号和 13号峰(保留时间为 25.857 ～ 38.407 min)之间为平
滑直线;13号与 14号峰为相连峰 ,其中 14号峰之后有一个小峰
相连。
2.3.4　相似度评价 采用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱
相似度评价系统 2004A版对重庆市武隆县等地 10批次玄参药材
的指纹图谱进行相似度的分析。以相关系数(中位数)代表其相
似度 , 与玄参药材的对照指纹图谱(共有模式)比较 , 10批玄参药
材的相似度见表 6。
表 6　与玄参药材HPLC指纹图谱共有模式比较的玄参样品的相似度评价
编号 相似度
S1 0.928
S2 0.973
S3 0.930
S4 0.970
S5 0.972
S6 0.975
S7 0.944
S8 0.963
S9 0.973
S10 0.915
结果表明 , 重庆市武隆县等地 10批次玄参药材样品的相似
度为 0.915 ～ 0.975之间 ,均大于 0.900,符合《中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求(暂行)》规定。
2.4　不同产地玄参药材的 HPLC指纹图谱鉴别 在研究建立了
比较稳定的玄参药材 HPLC指纹图谱分析测试方法的基础上 , 我
们对重庆市南川市 、浙江省磐安县 、湖北省巴东县 、贵州省道真县
等 4个不同产地的玄参药材进行了 HPLC指纹图谱的鉴别:分别
精密称取其干燥至恒重的药材粉末(过 3号筛)4份 , 每份 1 g, 按
“ 1.6”方法制备供试品溶液 , 按 “ 1.4”色谱条件进行测定 , 记录其
HPLC色谱图。
采用国家药典会员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A版对浙江省磐安县等地 4个不同产地玄参药材的指纹图
谱进行相似度的分析。 以相关系数(中位数)代表其相似度 , 与
玄参药材的对照指纹图谱(共有模式)比较 , 结果见表 7及图 3。
表 7　不同产地玄参药材供试品与玄参药材共有模式相似度比较
编号 相似度
S11 0.595
S12 0.711
S13 0.459
S14 0.655
图 3　不同产地玄参药材供试品与玄参药材指纹图谱共有模式的比较结果
结果表明 , 4个不同产地的玄参药材的指纹图谱与重庆市武
隆县的玄参药材共有模式差别较大 , 共有指纹峰仅有 6个 , 相似
度均小于 0.800。玄参甲醇提取物的 HPLC指纹图谱共有模式所
得色谱图中的 14个共有色谱峰可作为其指纹特征 , 用于鉴别玄
参药材的多个产地。
3　讨论
3.1 　供试品溶液制备条件的考察 试验比较了不同提取溶剂如
石油醚 、氯仿 、丙酮 、乙醇 、甲醇的水浴回流和索氏提取 、超声提取
等不同提取方法的提取效果 , 结果以甲醇超声提取的总体效果为
佳。同时还考察了以甲醇为提取溶剂 , 不同提取时间(20, 30, 40
min)的提取效果。结果表明 , 以甲醇为提取溶剂 , 超声提取 30
min, 提取较完全 ,操作方法简便 , 且方法稳定 、重现性好。采用甲
醇超声提取样品 , 所得图谱信息量较大 , 既含脂溶性成分也包括
水溶性成分 , 符合指纹图谱整体性的要求 , 其尽可能反映了药材
所含的全部信息 , 可以作为综合质量评价的方法。
3.2 　色谱条件的选择及优化 在流动相系统的选择中 , 分别以
甲醇 -水 、甲醇 -1%冰醋酸 、乙腈 -水 、乙腈 -1%冰醋酸等不同
体积分数 、不同比例的流动相系统进行了等度和梯度洗脱试验。
结果表明 , 用甲醇 -1%冰醋酸进行梯度洗脱为佳 , 色谱峰检测比
较全面 ,锋形尖锐且分离度较好 ,峰面积较大 , 调整流动相不同时
间洗脱比例之后 , 各峰的保留时间适中 , 且基线较平稳 , 不易漂
移 ,同时提高了色谱图的分离度 ,有效避免了色谱图的拖尾现象 ,
有利于指纹图谱的分析。
3.3　检测波长的选择 对 190 ～ 400nm扫描的各波长下的色谱
图进行比较分析 , 结果 290 nm处检测的色谱图不仅基线平稳 , 信
息量多 ,各色谱峰的分离效果很好 ,峰面积大 , 而且参照物肉桂酸
在此波长下有较大吸收。因此 , 选 290nm作为检测波长。同时
按照试行标准的要求考察了其他波长下的色谱图 , 其结果显示重
庆市武隆县等地 10批次玄参样品在不同波长下的色谱指纹图谱
具有很好的相似度。
3.4 　分析时间的选择 在选择指纹图谱的洗脱时间时记录了
2h的色谱行为图。结果表明 40 min以后基本没有色谱峰出现 ,
同时为了照顾样品的产地 、采收时间 、加工方法等的差异性 ,保证
所有样品的特征峰都能够被检出 , 因此选择 50 min作为分析
时间。
本论文所研究的重庆市武隆县的玄参药材 HPLC指纹图谱
具有比较好的稳定性和重复性 , 10批玄参样品指纹图谱的特征
性和专属性很强 , 其主要峰群的整体图貌基本一致 , 14个共有峰
的稳定性很好 , 建立的重庆市道地药材玄参的 HPLC指纹图谱 ,
符合国家药品监督管理局颁发的《中药注射剂指纹图谱研究的
技术要求(暂行)》和《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指
南》的要求。
在玄参指纹图谱研究中 , 主要以玄参中的活性组分肉桂酸作
为指纹图谱研究的重点 , 从重庆市武隆县产 10批次玄参药材的
特征指纹峰图谱都能找到了 14个共有峰相对保留时间符合程度
较好 ,其含量均大于 90%。但相对峰面积相差较大 ,说明玄参用
药应在固定产地的前提下 ,才能保证药品的一致性 , 因此建议有
条件的制药企业 , 可采用浸膏来控制生产工艺 ,保证药品的质量 。
通过对重庆市武隆县玄参样品的多个活性成分进行综合评
价 ,筛选出重庆道地药材玄参为建模对象 , 合成出玄参的标准指
纹图谱模型;以肉桂酸为参考峰 , 计算各特征成分相对时间比和
相对峰面积比。用此模型和特征成分的相对峰面积比准确的区
分不同产地玄参。玄参指纹图谱的建立不仅为中药材玄参的质
量控制提供了方法 , 而且采用指纹图谱来评价玄参药材质量 , 为
玄参进一步深入研究开发 , 奠定了基础 , 具有重要意义。通过该
研究为有效控制玄参药材的质量提供了新的手段。
玄参药材作为一味常用中药 , 由于其具有很强的生长适应
性 ,故在我国大部分地区特别是浙江 、重庆等地区都有广泛的种
植 ,带来的问题是药材种质不清 、质量不稳定 、成分稳定性差 , 药
材质量的可追溯性差等诸多问题 , 使得 “质”和 “量”均无法保证。
要控制玄参药材的质量 , 传统的依靠单一组分评价药材质量的做
法已经无法适应当前的需要 , 而指纹图谱的方法可以系统的 、特
征的 、稳定的综合评价药材的质量 ,符合整体质量控制的要求 , 为
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4　
国际上所认可 , 将促进中药现代化 、国际化的快速发展。
致谢:西南民族大学少数民族药物研究所刘圆副教授和彭镰
心硕士在玄参样品处理过程中提供帮助。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中国药典 [ S] .北京:化学工业出版社 , 2005:76.
[ 2] 　高学敏.中药学 [ M] .北京:中国中医药出版社 , 2002:168.
[ 3] 　任德权.中药指纹图谱质控技术的意义与作用 [ J] .中药材 , 2001,
24(4):235.
[ 4 ] 　谢培山.中药质量控制模式的发展趋势 [ J] .中药新药与临床药理 ,
2001, 12(3):188.
[ 5 ] 　KatalinicV.Highperformanceliquidchromatographicdeterminationof
flavanfingerprintsinplantextracts[ J] .JChromatogrA, 1997,
775:359.
[ 6 ] 　国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 [ M].北
京:人民卫生出版社 , 1986:546.
收稿日期:2008-05-29;　修订日期:2008-11-02
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划重点项目(No.2006BAD06B02);
江苏省科技攻关项目(No.BE2006314)
作者简介:张锋伦(1980-),男(土家族),湖北宜昌人 ,现任南京野生植物综
合利用研究院助理研究员 ,硕士学位 ,主要从事天然产物开发研究工作.
＊通讯作者简介:张卫明(1957-), 男(汉族),安徽芜湖人 , 现任南京野生
植物综合利用研究院研究员 ,硕士学位,主要从事农林特产资源保护与产
业开发工作.
洋葱多糖不同提取工艺的提取效果研究
张锋伦 , 吴素玲 , 孙晓明 , 张卫明＊
(南京野生植物综合利用研究院 ,江苏 南京　210042)
摘要:目的 比较不同提取方法对洋葱中多糖的提取效果。方法 采用热水浸提法 、微波辅助冻融法和超声波法从新鲜
洋葱和洋葱皮中提取多糖 ,用 DNS法测定多糖含量。结果 以葡萄糖为标准品 , 采用 DNS法测定多糖含量是可行的 , 平
均回收率达到了 98.5%, RSD为 2.65%。不管是新鲜洋葱肉质部分还是洋葱皮干粉 ,微波辅助冻融法提取的多糖的得率
最高 , 超声波法提取的多糖的含量最高 , 其中微波辅助冻融法提取洋葱皮中多糖得率为 3.58%(含量为 63.9%);肉质部
分多糖得率为 3.15%(含量为 62.0%)。结论 微波辅助冻融法是提取洋葱多糖较为合适的方法 , 该法提取洋葱多糖得
率高 , 且多糖含量也较高。
关键词:洋葱;　多糖;　微波;　超声波
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)04-0793-02
ComparisonofDifferentTechnologyforPolysaccharidesExtractionfromOnion
ZHANGFeng-lun, WUSu-ling, SUNXiao-ming, ZHANGWei-ming＊(NanjingResearchInstitutefortheComprehensiveUtilizationofWildPlants, Nanjing, 210042, China)Abstract:ObjectiveTocomparetheeffectsofdifferentextractionmethodsonextractionofthepolysaccharidesfromonion.MethodsPolysaccharideswasextractedfromfreshonionandonionskinbyhotwaterleachingmethod, microwave-assistedfreeze
thawingmethodandultrasonicwavemethod.ThecontentofpolysaccharideswasdeterminedbyDNSmethod.ResultsUnderthe
conditionthattheglucosewasconfirmedasstandard, itwasaccurateandfeasibletodeterminethecontentofpolysaccharidesin
onionbyDNSmethod;theaveragerecoveryratereached98.5% withRSDof2.65%.Weatherfreshonionoronionskindrypow-
der, theyieldofpolysaccharidesobtainedbymicrowave-assistedfreezethawingwasthemost, andthecontentofpolysaccharicleobtainedbyutrasonicwavewasthemost.Theyieldofpolysacchalidesobtainedbymicrowave-assistedfreezethaucinginonion-
skinwas3.58% (thecontentofpolysaccharideswas63.9%);anditsyieldinfleshypartswas3.15% (thecontentofpolysac-
charideswas62.0%).ConclusionMicrowave-assistedfreezethawingmethodisanappropriatemethodforextractingpolysac-
charidesfromonion.Thepolysaccharidesobtainedbymicrowave-assistedfreezethawingmethod, anditsyieldandcontentwerethemost.
Keywords:Onion;　Polysaccharides;　Microwave;　Ultrasonicwave
　　洋葱 AlliuncepaL., 别名玉葱 、葱头 , 为百合科(Liliaceae)葱
属(Aliun)植物。洋葱栽培历史悠久 , 原产于西南亚 , 20世纪初
才在我国大量栽培。洋葱具有消炎抑菌 、活血化淤 、防癌抗癌 、利
尿 、降血糖以及预防心血管疾病等功效 [ 1 , 2] , 它所具备的这些功
能使其成为备受全世界青睐的食品。洋葱的化学成分主要为硫
化物 、类黄酮 、苯丙素酚类 、甾体皂苷类 、含氮化合物和前列腺素
类 、多糖等 ,国内外对于前几种物质的研究报道较多 ,而有关洋葱
多糖方面的研究甚少。多糖是由各种单糖组成的天然高分子化
合物 , 具有许多生理功能。洋葱多糖 [ 3]对超氧阴离子自由基 、羟
基自由基均有较好的清除能力 ,具有较高的研究开发价值。本文
比较了热水浸提法 、超声波提取法 [ 4 ～ 7]和微波辅助冻融法 [ 8～ 10]
对洋葱中多糖的提取效果差异 ,并比较了洋葱肉质部分和洋葱皮
中多糖的含量差异 ,为洋葱多糖的进一步研究开发奠定了基础。
1　仪器与试剂
TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公
司);JJ-2型组织捣碎机(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公
司);WP700J17微波炉(顺德格兰仕电器厂有限公司);JY92-2D
超声细胞粉碎机(宁波新蓝科器研究所);RE-52AA型旋转蒸发
器(上海荣华生化仪器厂);LXJ-II型离心沉淀机(上海医用分
析仪器厂);EL-410S电子分析天平(美国 setra);高速万能粉碎
机(天津市泰斯特有限公司)。新鲜洋葱(购于南京市白云亭农
贸市场 ,紫皮扁圆形);洋葱皮(选取较好的革质洋葱皮 , 洗净烘
干 , 粉碎过 40目筛备用);葡萄糖(纯度 98.6%);其他试剂均为
分析纯 。
2　方法与结果
2.1　洋葱肉质部分多糖的提取
2.1.1　热水浸提法 取 500 g新鲜洋葱(去皮), 切成细小的碎
块 , 加入 300 ml蒸馏水 , 用组织破碎机破碎 ,用 200 ml蒸馏水分
多次冲洗 ,放入 90℃恒温水浴锅中加热提取 , 时间为 40 min, 过
滤 , 残渣加入 500ml蒸馏水重复提取 3次。合并滤液 ,备用。
2.1.2　微波辅助冻融法 取 500g新鲜洋葱(去皮), 切分成细小
的碎块 ,加入 300 ml蒸馏水 , 用组织破碎机破碎后取出 , 用 200
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