全 文 ：北方园艺２０１６（１７）：１０７～１１０ ·生物技术·
第一作者简介：李庆伟（１９７９－），男，河南封丘人，硕士，讲师，研究
方向为种苗繁育与大蒜生产。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｑｉｎｇｗｅｉ２００３＠１６３．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１６－０４－１５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１７０２５
燕子掌叶片再生体系的建立
李 庆 伟，侯 殿 明，申 顺 先
（河南农业职业学院 园艺园林学院，河南 郑州４５１４５０）
　　摘　要：以燕子掌叶片为试材，采用植物组织培养方法，研究了消毒时间、不同浓度２，４－Ｄ、６－ＢＡ、
ＮＡＡ对燕子掌再生的影响。结果表明：叶片用７０％～７５％的酒精浸泡１０～１５ｓ，再用０．１％ ＨｇＣｌ２
消毒１２～１５ｍｉｎ，具有较低污染率和较高的存活率；用 ＭＳ＋１．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１
２，４－Ｄ进行不定芽诱导，平均可以产生１３．７个不定芽；不定芽在 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＧＡ３０．５ｍｇ·Ｌ－１中增殖倍数为１１．０；在１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１或ＭＳ＋ＩＢＡ
０．５ｍｇ·Ｌ－１培养基中平均能产生９～１１条根。
关键词：燕子掌；叶片；不定芽；再生
中图分类号：Ｓ　６８２．３６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）１７－０１０７－０４
　　燕子掌（Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）属景天科青锁龙属多
年生植物［１］，别名玉树景天、玉树、金钱树、玻璃翠、肉质
万年青，原产非洲南部干旱地区，现在我国各地广泛栽
培。其植株灌木状，形态俊美，叶片肉质，长卵圆形，较
耐荫、耐旱，因此常作室内观叶植物栽培，对改善室内空
气质量具有明显效果［２］。燕子掌植株体内含有β?谷甾
醇、Ｄ－甘露醇、Ｎ－３－２－丁烯基胍、β胡萝卜苷等化合物
［３］，
临床研究表明，其提取物对Ⅱ型糖尿病及其并发症的治
疗效果明显［４－５］。随着国家对中药行业的重视，以燕子
掌为原料的中药制剂不断开发，尤其是“燕子掌中药材
及其制剂”国家新药的申报［６］，使其种苗的需求量不断
增加。但由于我国没有野生燕子掌资源，只能依靠人工
种植满足其需求，而燕子掌只能依靠扦插和分株方式进
行繁殖［７］，繁殖速度慢且受环境条件影响较大。目前，
关于燕子掌植物组织培养的研究，仅有蒲仕明等［８］以叶
片为外植体，通过愈伤组织诱导再生植株的报道。为进
一步探索燕子掌种苗快速繁育方法，现以燕子掌叶片为
外植体，研究了不同消毒时间及添加不同浓度２，４－Ｄ、
６－ＢＡ、ＮＡＡ对燕子掌叶片愈伤组织再生的影响，进而探
索出燕子掌叶片诱导、增殖、生根的最佳培养基，以期为
燕子掌大规模培养育苗奠定基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料为河南省农业高新科技园花卉中心提供
盆栽燕子掌植株，２０１４年９月剪取植株中部叶片为外植
体，备用。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体消毒　将燕子掌叶片用自来水冲洗干净，
置于洗洁精液中漂洗５～１０ｍｉｎ，再用自来水冲洗２０ｍｉｎ，
用吸水纸吸干表面水分，置于灭菌的塑料瓶中。在无菌
环境下，用７０％～７５％的酒精浸泡１０～１５ｓ，再用０．１％
ＨｇＣｌ２分别消毒３、６、９、１２、１５、１８ｍｉｎ，最后用无菌水冲
洗３～５次，无菌滤纸吸干水分，切成１ｃｍ×１ｃｍ的小
块，接种到 ＭＳ培养基上进行培养。每个处理接种３０
瓶，每瓶接种１个。接种后置于培养室中培养。培养条
件：光照时间１４ｈ·ｄ－１，光照度２２μｍｏｌ·ｍ－２·ｓ－１，温度
２４～２６℃，以下同。３０ｄ后统计外植体污染率及存活率。
污染率（％）＝污染外植体个数／接种外植体总数×１００，存
活率（％）＝存活外植体个数／接种外植体总数×１００。
１．２．２　不定芽诱导　以ＭＳ为基本培养基，添加不同浓
度２，４－Ｄ和６－ＢＡ（表１），此外还添加３％蔗糖及０．７％琼
脂。培养基ｐＨ　５．８，在１．１ｋｇ·ｃｍ－２压力下湿热灭菌
２０ｍｉｎ（下同）。叶片正面向上摆放到培养基中，每瓶接
种１个叶片小块，每处理接种６瓶。３０ｄ之后统计平均
不定芽诱导数。平均不定芽诱导数＝形成不定芽的总
数／调查外植体总数。
１．２．３　不定芽增殖　选生长健壮的不定芽，接种到丛生
芽诱导培养基中。以 ＭＳ为基本培养基，采用Ｌ９（３４）
３因素３水平正交实验设计６－ＢＡ、ＮＡＡ、蔗糖的使用浓
度配比（表２），添加到 ＭＳ培养基中。每瓶接种３个材
料，每个处理接种８瓶。３０ｄ之后调查不定芽诱导形成
的丛生芽个数、丛生芽生理状态，统计不定芽增殖倍数。
不定芽增殖倍数＝形成丛生芽的总数／接种芽苗总数。
７０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（１７）：１０７～１１０
表１ 燕子掌的不定芽诱导培养基
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
２，４－Ｄ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
１ － －
２　 ０．５ －
３　 １．０ －
４　 １．５ －
５　 ０．５　 ０．２
６　 １．０　 ０．２
７　 １．５　 ０．２
８　 ０．５　 ０．５
９　 １．０　 ０．５
１０　 １．５　 ０．５
１１　 ０．５　 １．０
１２　 １．０　 １．０
１３　 １．５　 １．０
　　表２ 正交实验设计的因素及水平
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　 ｍｇ·Ｌ－１
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素Ｆａｃｔｏｒ
Ａ
６－ＢＡ
Ｂ
ＮＡＡ
Ｃ
ＧＡ３
１
２
３
０．５
１．０
１．５
０．１
０．２
０．３
０．５
０．８
１．１
１．２．４　不定芽生根　将诱导形成的丛生芽切分成单芽，
选健壮芽，接种到生根培养基中（表３），每瓶接种３个
芽，每处理接种１０瓶。３０ｄ之后调查生根数量，计算平
均生根数。平均根数＝所有根数之和／生根苗数。
表３ 燕子掌的生根培养基
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
基本培养基
Ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉｕｍ
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
１　 １／２ＭＳ　 ０．０
２　 １／２ＭＳ　 ０．１
３　 １／２ＭＳ　 ０．３
４　 １／２ＭＳ　 ０．５
５　 １／２ＭＳ　 ０．８
６ ＭＳ　 ０．０
７ ＭＳ　 ０．１
８ ＭＳ　 ０．３
９ ＭＳ　 ０．５
１０ ＭＳ　 ０．８
１．３　数据分析
试验数据采用ＤＰＳ　７．５进行分析，Ｅｘｃｅｌ　２００７作图，
采用ＳＳＲ法进行差异显著性比较。
２　结果与分析
２．１　不同消毒时间对燕子掌无菌体系建立的影响
由图１可知，随着消毒时间的增加，污染率和存活率
同时下降。消毒３ｍｉｎ和６ｍｉｎ存活率为１００％，而污染率
也接近１００％；消毒１８ｍｉｎ的污染率最低，同时存活率也
为最低。可见，消毒剂浸泡时间增加，虽对微生物的消灭
有明显作用，但对植物组织也造成了伤害。综合污染率和
存活率曲线，可以看出，消毒１５ｍｉｎ的叶片污染率不足
１０％，但存活率在７０％以上，消毒１２ｍｉｎ的污染率约为
４０％，存活率约为９０％，对于燕子掌叶片来说，消毒时间
在１２～１５ｍｉｎ时，具有较低污染率和较高的存活率。
图１　不同消毒时间对燕子掌外植体污染率及存活率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ
ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ　ｅｘｐｌａｎｔ
２．２　不同激素配比对燕子掌叶片不定芽诱导的影响
由表４可知，不添加任何生长调节物质的培养基，
叶片没有再生不定芽。仅添加６－ＢＡ的培养基，可以诱
导产生不定芽，说明６－ＢＡ能促进燕子掌叶片不定芽的
诱导；随培养基中６－ＢＡ浓度的增加，不定芽的诱导数量
明显增加，０．５ｍｇ·Ｌ－１的６－ＢＡ平均诱导产生０．３个
芽，添加１．５ｍｇ·Ｌ－１的６－ＢＡ平均诱导产生８．８个芽。
随着２，４－Ｄ浓度的增加（０．２～０．５ｍｇ·Ｌ－１），诱导芽数
显著增加。但当２，４－Ｄ浓度增加至１．０ｍｇ·Ｌ－１时，诱
导芽数开始降低，说明相对高浓度的２，４－Ｄ对燕子掌叶
片的不定芽诱导有一定制约作用。在６－ＢＡ浓度相同的
条件下，随２，４－Ｄ浓度的增加，不定芽的诱导数量呈先增
后降变化趋势。由方差分析可以看出，处理１０诱导的
平均芽数最多，为１３．７个，与其它处理达到极显著差异，
因此ＭＳ＋１．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ为
燕子掌叶片不定芽诱导的最适培养基（图２ａ）。
表４　 ６－ＢＡ和２，４－Ｄ配比对燕子掌
叶片不定芽诱导的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ　ｌｅａｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
材料
Ｍａｔｅｒｉａｌ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ／个
芽数
Ｎｏ．ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｂｕｄｓ／个
平均芽数
Ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　ｂｕｄｓ／个
１　 ６　 ０　 ０．０Ｉ
２　 ６　 ２　 ０．３Ｉ
３　 ６　 ３３　 ５．５Ｅ
４　 ６　 ５３　 ８．８Ｃ
５　 ６　 ６　 １．０Ｈ
６　 ６　 ３５　 ５．８Ｅ
７　 ６　 ５８　 ９．７Ｂ
８　 ６　 １３　 ２．２Ｇ
９　 ６　 ４９　 ８．２Ｃ
１０　 ６　 ８２　 １３．７Ａ
１１　 ６　 ８　 １．３Ｇ
１２　 ６　 ２６　 ４．３Ｆ
１３　 ６　 ３８　 ６．３Ｄ
８０１
北方园艺２０１６（１７）：１０７～１１０ ·生物技术·
注：ａ．再生不定芽；ｂ．丛生芽；ｃ．玻璃化丛生芽；ｄ．生根苗。
Ｎｏｔｅ：ａ．Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ；ｂ．Ｂｕｄｓ；ｃ．Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ；ｄ．Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．
图２　燕子掌叶片再生
Ｆｉｇ．２　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ　ｌｅａｆ
２．３　不同激素配比对燕子掌不定芽增殖的影响
由表５可知，Ａ因素（６－ＢＡ）浓度从０．５ｍｇ·Ｌ－１增加
到１．５ｍｇ·Ｌ－１，不定芽的增殖倍数从３．６增加到１１．５，
不同水平间差异显著；Ｂ因素（ＮＡＡ）的从０．１ｍｇ·Ｌ－１
增加到０．３ｍｇ·Ｌ－１，不定芽的增殖倍数从７．９减低
到７．２，各浓度间差异不显著；Ｃ因素（ＧＡ３）的浓度由
０．５ｍｇ·Ｌ－１增加到１．１ｍｇ·Ｌ－１，不定芽的增殖倍数
由８．１降低到６．９，然后又升高至７．６，各浓度间差异不
显著。比较各因素间的极差（Ｒ）可以看出，Ａ因素的极
差最大，为７．９；其次为Ｃ因素，为１．２；Ｂ因素最小，仅为
０．７，说明各因素对不定芽的增殖影响不同。分析各因
素不同水平间增殖倍数时可以看出，Ａ因素各水平增殖
倍数顺序为Ａ３＞Ａ２＞Ａ１，Ｂ因素为Ｂ１＞Ｂ２＞Ｂ３，Ｃ因素
为Ｃ１＞Ｃ３＞Ｃ２。综合分析各试验组合间丛生芽的生长
情况，认为组合Ａ３Ｂ１Ｃ１、Ａ３Ｂ２Ｃ１ 可能是最优试验组合，
但试验组合Ａ３Ｂ２Ｃ１就是试验中的处理８，试验结果表现
为轻度玻璃化苗发生，故舍弃。
表５　不同激素组合对燕子掌不定芽增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　Ｃｒａｓｓｕｌａ
ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓｌｅａｆ　ｂｕｄｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
因子代号Ｆａｃｔｏｒ
Ａ　 Ｂ　 Ｃ
增殖倍数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｅ
１　 ０．５（１） ０．１（１） ０．５（１） ４．６ 芽壮
２　 ０．５（１） ０．２（２） ０．８（２） ３．４ 芽壮
３　 ０．５（１） ０．３（３） １．１（３） ２．８ 芽壮
４　 １．０（２） ０．１（１） ０．８（２） ６．８ 芽多且壮
５　 １．０（２） ０．２（２） １．１（３） ７．８ 芽多且壮
６　 １．０（２） ０．３（３） ０．５（１） ８．２ 芽多且壮
７　 １．５（３） ０．１（１） １．１（３） １２．３ 芽多，玻璃化重（图２ｃ）
８　 １．５（３） ０．２（２） ０．５（１） １１．５ 芽多，轻微玻璃化
９　 １．５（３） ０．３（３） ０．８（２） １０．６ 芽多，较壮
Ｔ１ ３．６ｃ ７．９ａ ８．１ａ
Ｔ２ ７．６ｂ ７．６ａ ６．９ａ
Ｔ３ １１．５ａ ７．２ａ ７．６ａ
极差Ｒ　７．９　 ０．７　 １．２
　　因组合Ａ３Ｂ１Ｃ１ 未出现在试验中，需进行验证，以
试验中处理９（没发生玻璃化，且丛生芽数量多）为对
照，进行验证。由表６可知，组合Ａ３Ｂ１Ｃ１（ＭＳ＋６－ＢＡ
１．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＧＡ３０．５ｍｇ·Ｌ－１）
的增殖倍数为１１．０（图２ｂ），且没有出现玻璃化，为燕子
掌丛生芽增殖的最佳培养基。
表６　 ２种组合的增殖比较
　　Ｔａｂｌｅ　６　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
组合
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
／个
增殖数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
／个
增殖倍数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ
ｓｔａｔｅ
Ａ３Ｂ１Ｃ１ ３０　 ３３１　 １１．０ 芽多，较壮
Ａ３Ｂ３Ｃ２ ３０　 ３１６　 １０．５ 芽多，较壮
２．４　不同激素组合对燕子掌诱导生根的影响
由表７可知，燕子掌的生根数先增后降。ＩＢＡ浓度
变化从０．０～０．５ｍｇ·Ｌ－１，１／２ＭＳ中的生根数量比 ＭＳ
中的多，但０．８ｍｇ·Ｌ－１，１／２ＭＳ中的生根数量则比 ＭＳ
中的少。比较各处理间的差异显著性可以看出，处理４
平均生根数最高，但与处理９不存在显著性差异，与其
它各处理均达到显著性差异；处理９与处理１０不存在显
著性差异，与其它各处理间存在显著性差异。可以认
为，１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１、ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１
作为燕子掌的生根培养基比较适宜（图２ｄ）。
表７ 不同培养基对生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　７ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ／个
平均生根数
Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ／条
１　 ３０　 ３．３ｇ
２　 ３０　 ６．８ｅ
３　 ３０　 ８．６ｃｄ
４　 ３０　 １０．６ａ
５　 ３０　 ８．４ｃｄ
６　 ３０　 ２．１ｈ
７　 ３０　 ５．８ｆ
８　 ３０　 ７．７ｄｅ
９　 ３０　 ９．８ａｂ
１０　 ３０　 ９．２ｂｃ
３　讨论
建立无菌体系是开展植物组织培养的关键因素，材
料不同的生理状态［９］、取材时期［１０］、消毒剂种类［１１］、消毒
９０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（１７）：１０７～１１０
时间［１２］、消毒方法［１３］都直接影响植物无菌体系的建立，
但可以肯定的是无菌体系建立过程中以相对较低的污
染和相对较高的存活率来均衡评价消毒剂及消毒方法
是否合理［１４］。唐军荣等［１５］的研究指出，延长消毒时间
能够降低污染，但也会使外植体材料的存活率下降，故
消毒过程中要减少消毒时间过长造成的伤害，把握污染
率和存活率的平衡关系。该试验通过延长消毒时间同
样也发现，外植体的污染率虽然降低了，但材料的死亡
率明显增加，受伤害的外植体叶片对培养基中激素的响
应速度也相应减缓，甚至没有反应。
蒲仕明等［８］在培养基中添加不同浓度的ＩＢＡ和
６－ＢＡ进行燕子掌叶片的诱导中发现，４０ｄ左右时叶片边
缘产生乳白色粒状愈伤组织后，逐渐生长成为愈伤组织
块，随着培养时间延长，愈伤组织上分化形成不定芽。愈
伤组织经转接培养，在ＩＢＡ浓度一定时随６－ＢＡ浓度的增
加，愈伤组织分化形成的芽数量也在明显增加。ＬＩＵ
等［１６］用玉树的茎、叶为外植体材料，在０．２～２．０ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ和２．３ｍｇ·Ｌ－１的６－ＢＡ共同作用下，通过愈伤组
织阶段形成不定芽，每个材料上可形成１０个以上芽。
该试验中，通过２，４－Ｄ和６－ＢＡ的相互配比，没有经过愈
伤组织阶段成功从叶片上产生不定芽，在１．０ｍｇ·Ｌ－１
的６－ＢＡ和０．５ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ的作用下，３０ｄ后每个材
料平均可以产生１３．７个不定芽，这与蒲仕明等［８］、ＬＩＵ
等［１６］通过愈伤组织阶段形成不定芽明显不同，且诱导速
度快，所用生长调节物质浓度较低。高燕等［１７］用贝母为
材料，进行不定芽诱导时发现，６－ＢＡ和２，４－Ｄ的组合是
不定芽诱导的最佳培养基，与该研究结果相近，但其内
部生理变化有待进一步研究。
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［１６］ＬＩＵ　Ｙ　Ｌ，ＬＯＮＧ　Ｚ　Ｌ，ＧＡＯ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｒｇａｎ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎ－
ｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ），２００７，３３（６）：５９１－５９６．
［１７］高燕，贺宾，范弢，等．贝母愈伤组织的诱导及植株再生［Ｊ］．新疆农业
科学，２００５，４２（１）：３５－３７．
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌｅａｆ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ
ＬＩ　Ｑｉｎｇｗｅｉ，ＨＯＵ　Ｄｉａｎｍｉｎｇ，ＳＨＥＮ　Ｓｈｕｎｘｉａｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｈｅｎａｎ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ　４５１４５０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ　ｌｅａｖｅｓ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｕｓｉｎｇ　ｐｌａｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｉｍｅ
ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４－Ｄ，６－ＢＡ，ＮＡＡ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｏａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｉｎ　７０％－７５％ａｌｃｏｈｏｌ　ｆｏｒ　１０－１５ｓｅｃｏｎｄｓ，ｔｈｅｎ　０．１％ ＨｇＣｌ２ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　１２－１５ｍｉｎｕｔｅｓ，
ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｈａｄ　ｌｏｗ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ．ＭＳ＋１．５ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ　ｗａｓ
ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　１３．７ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎ　ＭＳ＋
６－ＢＡ　１．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＧＡ３０．５ｍｇ·Ｌ－１，ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｗａｓ　１１．０；ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｈｏｏｔｓ
ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ａｎ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　９－１１ｒｏｏｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１　ｏｒ　ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１　ｍｅｄｉｕｍ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ；ｌｅａｆ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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