全 文 ：书2013 年 8 月 1 日 第 8 期
No． 8 1 August 2013
中 医 学 报
CHINA JOUＲNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 183 期
Vol． 28 Serial No． 183
* 基金项目:国家自然科学基金重大项目( 编号: 69317668)
白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定*
Determination of Imperatorin and Isoimperatorin in Ｒadix Angelicae Dahuricae
万焱 Wan Yan，马国柱 Ma Guozhu，冯素香 Feng Suxiang
河南中医学院，河南 郑州 450046
Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou Henan China 450046
摘要:目的: 建立白芷中欧前胡素和异欧前胡素的高效液相色谱含量测定方法。方法: 色谱柱: Venusil XBP C18 ( 4． 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，以甲醇-水( 60∶ 40) 为流动相，体积流量 1． 0 mL·min －1，柱温: 30 ℃，检测波长 304 nm。结果: 欧前胡素和异
欧前胡素分别在 0． 15 ～ 1． 80 μg和 0． 10 ～ 1． 20 μg范围内呈良好的线性关系( r分别为 0． 999 5、0． 999 6) ; 平均回收率分别为
100. 2%、99． 4%，ＲSD%分别为 1． 57、1． 21( n = 5) 。结论: 该方法简便、可靠、重现性好，可用于测定药材白芷中欧前胡素和异
欧前胡素的含量。
文献引用:万焱，马国柱，冯素香．白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定［J］．中医学报，2013，28( 8) : 1178 － 1179．
Abstract: Objective: To establish a method for the simultaneous determination of imperatorin and isoimperatorin in radix angelicae dahu-
ricae by HPLC． Methods: The separation was performed on a Venusil XBP C18( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，column using methanol-wa-
ter( 60∶ 40) as mobile phase at 30 ℃，and the flow rate was 1． 0 mL·min －1 ． The detection wavelengths was set at 304 nm． Ｒesults:
The linear relation was in the rang of 0． 15 ～ 1． 80 μg( r = 0． 999 5) for imperatorin，0． 10 ～ 1． 20 μg( r = 0． 999 6) for isoimperatorin，re-
spectively． Their average recoveries were 100． 2% ( ＲSD was 1． 57% ) ，99． 4% ( ＲSD was 1． 21% ) ． Conclusion: The method is simple，
reliable，and reproducible for the content determination of imperatorin and isoimperatorin in radix angelicae dahuricae．
Ｒeference citation:Wan Yan，Ma Guozhu，Feng Suxiang． Determination of Imperatorin and Isoimperatorin in Ｒadix Angelicae Dahuri-
cae［J］． China Journal of Chinese Medicine，2013，28( 8) : 1178 － 1179．
关键词:白芷; 欧前胡素; 异欧前胡素; 含量测定; 高效液相色谱法
Key words: radix angelicae dahuricae; imperatorin; isoimperatorin; content determination; HPLC
中图分类号 CLC number:Ｒ284． 1 文献标志码 Document code:A 文章编号 Article ID:1674 － 8999(2013)08 － 1178 － 02
白芷收载于《中华人民共和国药典》2010 年版一部，来
源为伞形科植物白芷［Angelica dahurica(Fisch． ex Hoffm．)
Benth． et Hook． f．］或杭白芷［Angelica dahurica(Fisch． ex
Hoffm．)Benth． et Hook． f． var． formosana (Boiss．)Shan et
Yuan］的干燥根。性温味辛，归胃、大肠、肺经。具有散风除
湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。临床主要用于治疗感冒头
痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛等证［1］。欧
前胡素和异欧前胡素是白芷的主要活性成分，本试验结合文
献资料［2-5］采用高效液相色谱法同时测定白芷中欧前胡素与
异欧前胡素的含量，处理方法简便、快速、专属性强、分离度
高，可作为白芷药材的质量控制方法。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
美国 Waterse 2695 高效液相色谱仪系统，2998PDA 检测
器;Sartorius BS210 型电子天平(德国 Sartorius 公司) ;KH-
2200DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公
司)。
1． 2 试剂与药材
欧前胡素对照品(批号:110826-201002)和异欧前胡素
对照品(批号:110827-200407)均购自中国食品药品检定研
究院提供，白芷药材购于河南郑州张仲景大药房，甲醇
(HPLC级 4 L，Fisher Scientific) ，娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈
集团有限公司)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
Venusil XBP C18 色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流
动相为甲醇-水(60∶40) ，流速 1 mL·min －1，柱温为 30 ℃，
检测波长为 304 nm，进样量 20 μL。理论塔板数按欧前胡素
峰计算不低于 3 500。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液的制备 取欧前胡素和异欧前胡素对照
品适量，精密称定置 25 mL容量瓶中，加甲醇制得每 1 mL含
欧前胡素 0． 15 mg、异欧前胡素 0． 10 mg的混合对照品溶液，
经 0． 45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约 2． 0
g，精密称定，置 50 mL容量瓶中，加甲醇 45 mL，超声处理(功
率 300 W，频率 50 Hz)40 min，取出，放冷，用甲醇稀释至刻
度，摇匀，经 0． 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 系统适应性 按 2． 1 项下色谱条件，分别精密吸取
·8711·
DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2013.08.054
书2013 年 8 月 1 日 第 8 期
No． 8 1 August 2013
中 医 学 报
CHINA JOUＲNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 183 期
Vol． 28 Serial No． 183
2． 2 项下的对照品溶液和供试品溶液各 20 μL，进样，记录色
谱图。结果显示，欧前胡素和异欧前胡素二者分离良好，分
离度达到了定量分析的要求。见图 1。
2． 3． 2 线性关系考察 精密吸取 2． 2． 1 项下对照品溶液
0. 5 mL、1． 0 mL、2． 0 mL、4． 0 mL、6． 0 mL分别置于 10 mL容
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别进
样 20 μL，按上述色谱条件测定，以进样量(μg)为横坐标，相
应成分峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果显示，欧
前胡素回归方程为 Y = 5． 026 × 103X + 10． 156，r = 0． 999 5，在
0． 15 ～ 1． 80 μg内具有良好的线性关系;异欧前胡素回归方
程为 Y = 3． 816 7 × 103X + 11． 815，r = 0． 999 6，在 0． 10 ～ 1． 20
μg内具有良好的线性关系。
注:A．对照品溶液;B．药材样品溶液(1．欧前胡素，2．异欧前胡素)
图 1 HPLC色谱图
2． 3． 3 精密度试验 取 2． 2 项下对照品溶液，连续进样 5
次，计算欧前胡素和异欧前胡素峰面积的 ＲSD 分别为
1. 26%，1． 71%。表明精密度良好。
2． 3． 4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0 h、2 h、4
h、8 h、12 h、24 h 进样，测定欧前胡素和异欧前胡素的峰面
积，计算 ＲSD分别为 1． 75%，1． 38%，表明供试品溶液在室
温 24 h内基本稳定。
2． 3． 5 重复性试验 同一批白芷药材，按 2． 2． 2 项下方法
制备供试品溶液 5 份，照上述色谱条件测定。测得欧前胡素
的含量为 0． 134%、0． 133%、0． 136%、0． 138%、0． 135%，ＲSD
值为 1． 42%，异欧前胡素的含量为 0． 079%、0． 078%、
0. 076%、0． 080%、0． 078%，ＲSD值为 1． 90%，说明本法重复
性良好。
2． 3． 6 回收率试验 采用加样回收试验方法，取已知含量
的供试品 5 份，每份 1 g，精密称定，分别置于 25 mL 容量瓶
中，分别精密加入上述对照品溶液 0． 5 mL，加甲醇稀释至刻
度，按 2． 2． 2 项下供试品溶液制备方法制备样品溶液并按
2. 1 项下色谱条件测定各成分的含量，计算回收率。见表 1。
2． 3． 7 样品测定 取供试品 5 批，按 2． 2． 2 项下方法制备
供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果测得欧前素和
异欧前胡素的含量分别为 0． 132% ～0． 136%和 0． 078 9% ～
0. 079 3%，ＲSD值分别为 1． 34%和 1． 65%。
表 1 加样回收率试验结果 (n = 9)
组分
样品原有量
(m /mg)
加入量
(m /mg)
测得量
(m /mg)
回收率
(/%)
平均回收
率(/%)
ＲSD(/%)
欧前胡素 1． 34 1． 07 2． 39 99． 3
1． 33 1． 07 2． 36 98． 5
1． 34 1． 07 2． 45 101． 6
1． 35 1． 34 2． 70 100． 5
1． 34 1． 34 2． 65 98． 9 100． 2 1． 57
1． 32 1． 34 2． 68 100． 8
1． 33 1． 61 3． 01 102． 4
1． 35 1． 61 2． 97 100． 2
1． 34 1． 61 2． 94 99． 7
异欧前胡素 0． 79 0． 62 1． 38 97． 9
0． 78 0． 62 1． 38 98． 3
0． 78 0． 62 1． 41 100． 5
0． 80 0． 78 1． 57 99． 6
0． 81 0． 78 1． 58 99． 1 99． 4 1． 21
0． 79 0． 78 1． 58 100． 3
0． 77 0． 94 1． 67 97． 8
0． 78 0． 94 1． 71 99． 6
0． 79 0． 94 1． 75 101． 3
3 讨论
3． 1 提取方式的选择
本试验参考相关文献［6］，比较回流提取法与超声提取法
对欧前胡素与异欧前胡素提取率的影响，测得含量分别为
0. 135%、0． 078%和 0． 133%、0． 079%，结果显示两种方法提
取率无明显差异，而超声法简便易行，因此首选采用。
3． 2 提取时间的选择
试验分别超声 30 min、40 min、50 min 和 60 min 对样品
进行提取，测得欧前胡素和异欧前胡素含量分别为 0． 097%、
0． 134%、0． 131%、0． 133%;0． 057%、0． 078%、0． 079%、0．
077%。结果显示提取 40 min 以后，欧前胡素和异欧前胡素
提取率均达到 98%以上，因此确定提取时间为 40 min。
3． 3 检测波长的选择
将混合对照品注入高效液相色谱系统，在 200 ～ 400 nm
波长范围内进行紫外光谱扫描，结果显示欧前胡素和异欧前
胡素在 304 nm 处均具有较大紫外吸收。故检测波长选择
304 nm。
参考文献:
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典［S］．北京:中国医药科技
出版社，2010:97 － 98．
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［J］．海峡药学，2012，24(4) :63 － 64．
收稿日期:2013 － 02 － 24
作者简介:万焱( 1974 － ) ，女，江苏无锡人，医学硕士，高级实
验师，主要从事药物化学及药物分析工作。
通信作者:冯素香( 1971 － ) ，女，硕士研究生导师 主要从事
中药质量控制研究。Email: yangyan1536@ 163． com
编辑: 纪彬
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