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白芷提取物欧前胡素对洗涤血小板功能的影响



全 文 :成都中医药大学学报
Journal of Chengdu University of TCM
2012 年 6 月第 35 卷第 2 期
June. 2012,Vol. 35,No. 2
白芷提取物欧前胡素对洗涤血小板功能的影响
胡荣 李祖伦 杨金荣 杨露
(成都中医药大学,四川 成都 610075)
摘 要:目的:观察白芷提取物欧前胡素对洗涤血小板的影响。方法:分别以 ADP 和凝血酶诱导血
小板聚集,考察欧前胡素对血小板聚集的影响。结果:欧前胡素有极显著降低对 ADP 和凝血酶诱导的血
小板聚集率和聚集曲线斜率的作用 (P < 0. 01)。通过比较凝血酶诱导的聚集曲线,给药组与空白对照组
有显著性差异,说明欧前胡素对血小板的第二相聚集反应有抑制作用。结论:欧前胡素有抑制血小板聚集
的作用,并对血小板释放和花生四烯酸代谢有影响。
关键词:白芷;欧前胡素;血小板聚集
中图分类号:R282. 71;R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2012)02-0086-03
基金项目:四川科技厅科技攻关项目 (编号:2006Z08- 076)
作者简介:胡荣,男,1970 年出生,博士;研究方向:主要从事中药理论及应用研究。
Study on Effect of Imperatorin from Radix Angelicae Dahurica
on Washed Platelet Aggretation
HU Rong,LI Zu-lun,YANG Jin-rong,et al
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)
[Abstract] Objective:To investigate the effect of imperatorin from Radix Angelicae Dahurica on washed platelet aggregation.
Methods:The platelet of rat blood was prepared and both ADP-induced and thrombin-induced platelet aggregation tests were used for
the investigation. Results:Imperatorin from Radix Angelicae Dahurica significantly reduced the platelet aggregation rate and the aver-
age slope of the curves rising segment (P < 0. 01)。From the comparison among the thrombin-induced platelet aggregation curves of
different groups,it could be concluded that imperatorin had effect on the phase 2 of platelet aggregation. Conclusion:Imperatorin has
the action of inhibiting platelet aggregation and has effect on release reaction of platelet and arachidonic acid metabolism in platelet.
[Key words]:Radix Angelicae Dahurica;imperatorin;platelet aggregation
中药白芷止痛力较强,善治多种痛证;尤其对
头风痛、偏头痛单用有效。实验研究[1]也证实白
芷香豆素对偏头痛动物模型有治疗作用。偏头痛的
发病与血小板功能异常关系密切。欧前胡素是含量
相对较高的白芷香豆素之一。本研究通过考察白芷
提取物欧前胡素对血小板聚集的影响,以期为进一
步研究欧前胡素对血小板功能的影响奠定基础,为
认识白芷治疗偏头痛的作用及效应物质基础提供实
验依据。
1 实验材料
1. 1 实验动物
SD 雄性大鼠,清洁级,体重 (200 ± 20) g。
由四川省医学科学院实验动物研究所提供,合格证
号:SCXK (川)2008-24。
1. 2 主要试剂
二磷酸腺苷 (ADP) ,法国 Alexis公司,批号:
63718,临用时用蒸馏水配制制成 200 μmol /L 备
用;凝血酶,法国 Alexis 公司,批号:73426,临
用时用蒸馏水配制成 1 U /mL 备用;稀释液 (自
制) :DMSO 10 mL、聚乙二醇 100 mL,蒸馏水定
容于 1000 mL备用;阿司匹林溶液:用稀释液配制
成 0. 23 g /L溶液备用。克氏液按文献方法[2]配制。
其余均为国产分析纯试剂。
1. 3 受试药物
药材购于四川遂宁白芷 GAP种植基地,由成都
中医药大学中药鉴定教研室严铸云教授鉴定为伞形
科植物杭白芷 Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm. )
Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss. )shan et
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DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2012.02.029
第 2 期 胡荣 等 白芷提取物欧前胡素对洗涤血小板功能的影响
Yuan的干燥根。欧前胡素 (Imperatorin,又名欧芹
素乙[3])参照文献方法[4]制备,用稀释液配制成
高、中、低浓度 (0. 62、0. 31、0. 16 g /L)受试药。
1. 4 主要仪器
APACT2 双通道血小板聚集仪 (德国兰波公
司) ;MEK- 6318K全自动血球计数仪 (日本光电
仪器公司) ;Biofuge stratos 台式高速冷冻离心机
(德国 Heraeus 仪器公司) ;BP211D 电子天平 (德
国赛多利斯公司)。
2 方法及结果
2. 1 血小板悬液制备
参照文献方法[5],麻醉大鼠后于腹主动脉取
血 3. 8 %枸橼酸钠抗凝收集于塑料离心管中,抗凝
剂与血体积比为 1∶ 9。室温 650 r /min 离心 15 min
得富血小板血浆 (Platelet rich plasma,PRP) ,PRP
以 2000 r /min 离心 5 min,得血小板团块。用克氏
式液洗涤血小板 3 次,最后悬浮于含 2 mmol /L
CaCl2 的克氏液中。用全自动血球计数仪检测并调
整血小板浓度至 4. 5 × 1013cells /L。
2. 2 血小板聚集检测
实验分为空白对照组、溶剂对照组,阳性对照
组,受试药物高、中、低剂量组 (0. 62、0. 31、
0. 16 g /L)。取 20 μL 受试药与洗涤血小板悬液 150
μL置于测试杯中,37 ℃温育 3 min;空白对照组、
溶剂对照组和阳性对照组分别以 20 μL 生理盐水、
稀释液和乙酰水杨酸溶液 (230 mg /L)代替受试
药。温育后,分别加入 20 μL ADP (200 umol /L)
或凝血酶 (1 U/mL)诱导剂,Born 法测定并记录 3
min内的血小板聚集曲线,比较 3 min内血小板最大
聚集率和曲线上升段的平均斜率。
2. 3 结果
结果见表和图 1、图 2。ADP 为诱导剂的实验
显示,与空白对照组比较,阳性对照组和受试药各
剂量组的血小板最大聚集率和曲线平均斜率有极显
著性或显著性降低 (P < 0. 01,P < 0. 05) ,溶剂对
照组无显著性差异。凝血酶为诱导剂的实验表明,
与空白对照组比较,阳性对照组和受试药高、中剂
量组聚集率和斜率均有极显著性降低,受试药低剂
量组和溶剂对照组无显著性差异。
比较凝血酶诱导的血小板聚集曲线可见,阳性
对照组和受试药各剂量组与空白对照组有显著差异。
空白对照组和溶剂对照组聚集曲线达峰时间短,峰
值后为水平直线,说明血小板发生了不可逆的第二
相聚集。阳性对照组和受试药各剂量组达峰时间相
对较长,受试药高剂量组聚集曲线达峰后逐渐下降,
说明血小板聚集是可逆性的,即第一相聚集。
表 对 ADP、凝血酶诱导血小板聚集的影响 (珋x ± s,n = 20)
组 别
试药浓度
(g /L)
ADP诱导 凝血酶诱导
最大聚集率 (%) 平均斜率 (% /min) 最大聚集率 (%) 平均斜率 (% /min)
空白对照组 — 90. 10 ± 2. 30 77. 7 ± 7. 7 72. 90 ± 9. 45 128 ± 2. 68
溶剂对照组 — 89. 00 ± 3. 30 88. 60 ± 8. 06 71. 10 ± 2. 32 130 ± 3. 50
阳性对照组 乙酰水杨酸 0. 23 35. 00 ± 1. 20** 33. 80 ± 2. 28** 38. 70 ± 3. 93** 40. 8 ± 2. 28**
受试药高剂量组 0. 62 10. 40 ± 0. 8** 3. 40 ± 0. 05** 31. 62 ± 3. 16** 25. 33 ± 0. 11**
受试药中剂量组 0. 31 33. 60 ± 2. 90** 31. 44 ± 3. 00** 57. 33 ± 0. 76** 14. 05 ± 0. 18**
受试药低剂量组 0. 16 46. 66 ± 2. 97** 69. 48 ± 2. 77* 72. 10 ± 4. 32 119 ± 6. 5
与空白对照组比较:* P < 0. 05,** P < 0. 01
图 1 ADP诱导血小板 图 2 凝血酶诱导血小板
聚集曲线 聚集曲线
4 讨论
偏头痛是一种原发性颅内血管运动和神经功能
调节失常所引起的复发性疾病,人群中患病率和发
病率都非常高,研制新的偏头痛治疗药物,是当今
世界医学的热点之一。偏头痛先兆期的早期,可见
血中 NE 增加和血小板聚集。NE 增加可加重血小
板聚集,并有 5-HT及 ADP的释放。血小板释放的
5-HT又进一步促进血小板聚集。5-HT 一过性的增
加,使动脉收缩,毛细血管扩张,产生头痛前期症
状。5-HT一过性增加后,逐渐减少至耗竭,血管
扩张,即产生头痛。因此,偏头痛的发病与血小板
功能异常关系密切[6]。
偏头痛属于中医学“头风”、“头痛”的范畴,
中医对偏头痛的治疗,在减少头痛发作频率和减轻
疼痛程度方面具有特色。在众多中药中,白芷为历
代治疗头痛的要药。现代临床运用白芷治疗神经
性、血管性及外伤性头痛,风寒、风热、血瘀、肝
阳上亢等各证型,均有明显的治疗作用[7]。白芷
香豆素为药材中重要的活性成分,欧前胡素是含量
相对较高的白芷香豆素之一。考察欧前胡素对血小
板功能的影响,可以为白芷的临床应用提供实验依
据,也有助于白芷效应物质的认识。研究中选用了
ADP和凝血酶两种诱导剂。实验结果显示,欧前
胡素对 ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率和聚集
曲线上升支的平均斜率都有显著的降低,说明对血
小板聚集程度和聚集反应速率均有抑制作用。ADP
为血小板聚集的弱诱导剂,通常只引起血小板的变
形和聚集,而不引起释放,表现为可逆的第一相聚
(下转第 94 页)
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成都中医药大学学报 2012 年第 35 卷
胞受损而进一步失去解毒功能,加重肝病病情。
(3)高血压患者:人体的收缩压和舒张压均会随
着饮酒量的增多而逐步升高,血压升高愈大,患者
心、脾、肾等重要器官的并发症也愈多。因此高血
压患者宜戒酒,服用冶疗药酒也应适量。 (4)冠
心病患者:大量饮酒会使脂蛋白脂肪酶的活性降
低,从而使低密度脂蛋白和三酰甘油的血浓度增
加,并阻碍高密度脂蛋白的合成,增加了胆固醇在
血管壁上的沉着,造成动脉粥样硬化。 (5)中风
患者:虽然饮用药酒能使中风后遗症患者康复,但
酒精有直接导致心律失常作用,可引起心律紊乱或
心肌病,如果饮酒者同时伴有高血压动脉硬化、糖
尿病等及吸烟这些危险因素存在,则中风发生率将
会提高。(6)骨折患者:骨折后少量饮用药酒可
以促使血液循环,活血化前瘀,有助于骨折早日愈
合。但饮酒过多,会损害骨骼组织的新陈代谢,使
其丧失生长发育和修复损伤的能力,不利于骨折的
愈合。
4. 3 忌饮酒成癖
是长期或大量饮酒,嗜酒成瘾,是一种精神障
碍,不利于人的身心健康。
总之,无论是用以治疗还是保健的药酒,服用
时,一定要辨证、辨症的科学使用,要因人而宜,
中病则止,只有这样,才能使药酒发挥保健和治疗
作用。
参考文献
[1]刘建,严敏 . 酒与解酒 [J]. 陕西中医函授,2000,
(3) :14-16.
[2]于涛,包昆 . 浅析酒的医用价值 [J]. 现代中西医结
合杂志,2001,10 (5) :479-480.
[3]杨基森. 中国药酒学 [M]. 贵州:贵州科技出版社,
2002.
[4]张梅. 常用药酒 [M]. 成都:四川科学技术出版社,
2002.
[5]杨沛群,吴弥漫. 《内经》酒论浅析 [J]. 安徽中医
学院学报,2003,22 (3) :10-11.
[6]陈熠. 中国药酒大全 [M]. 第二版. 上海:上海科
学技术出版社,2003.
[7] 韩明信 . 酒为了健康莫狂饮 [J]. 大众标准化,
2003,(3) :24.
[8]方忠宏,钱董文 . 酒对健康的影响 [J]. 中国药物滥
用防治杂志,2002,41 (6) :40-41.
[9]管国涛,唐济生,胡洪涛,等 . 酒依赖与暴力行为
[J]. 中国行为医学科学,2002,11 (1) :118-120.
[10]郑云郎 . 酒与健康 [J]. 生物学教学,2004,29
(10) :34-35.
[11]肖芳 . 酒与药物不良反应 [J]. 中国社区医师,
2004,20 (10) :20-35.
(收稿日期:2012-01-10 责任编辑:薛红
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)
(上接第 87 页)
集反应。凝血酶为血小板聚集的强诱导剂,可诱发
血小板的花生四烯酸代谢产生 TXA2 和释放内源性
ADP等物质,从而产生第二相聚集。因此,第二
相聚集反应的出现,表明发生了血小板的释放和花
生四烯酸代谢。TXA2 和内源性 ADP 是引起第二相
不可逆聚集反应的重要因素。阿司匹林可阻止血小
板的释放和 TXA2 的生成,从而阻断血小板的第二
相聚集[8]。
比较凝血酶诱导的血小板聚集曲线可见:空白
对照组曲线快速上升达到峰值,与 ADP 诱导曲线
逐渐上升达到峰值有明显差异;空白对照组曲线达
到峰值后呈水平直线,没有出现逐渐下降,说明空
白对照组血小板发生了不可逆聚集,即第二相聚
集。阳性对照组和受试药各剂量组曲线表现为逐渐
上升达到峰值,与空白对照组有明显差异,而与
ADP诱导的聚集曲线相似;受试药高剂量组曲线
达到峰值后,还出现逐渐下降。由此说明,阳性对
照组和受试药各剂量组血小板聚集为可逆的第一相
聚集。没有出现第二相聚集,说明欧前胡素可能有
抑制血小板的释放和花生四烯酸代谢的作用。由此
提示,中药白芷对偏头痛的治疗作用,可能与影响
血小板的功能有关。
血小板是一个多功能的细胞,激活后产生花生四
烯酸代谢,释放出 α?颗粒、致密体、溶酶体的内容
物,在止血、血栓形成、动脉粥样硬化、炎症以及免
疫反应中,都起着重要的作用。因此,欧前胡素对血
小板功能的影响及机制值得进一步深入探讨。
参考文献
[1]秦旭华 . 川白芷总香豆素治疗偏头痛的部分药效学实
验研究 [J]. 四川中医,2008:26 (6) :4-6.
[2]李仪奎 . 中药药理实验方法 [M]. 上海:上海科学技
术出版社,2006:211.
[3]杨云,张晶,陈玉婷 . 天然药物化学成分提取分离手
册 [M]. 第 2 版. 北京:中国中医药出版社,2003:
204.
[4]周继铭. 白芷的研究Ⅷ欧芹素乙的大量制备法 [J].
泸州医学院学报,1989,12 (6) :429-430.
[5]沈志强. 中性粒细胞对洗涤血小板聚集功能的影响
[J]. 中国病理生理杂志,2002;18 (7) :801-803.
[6] 胡浴桓. 疼痛与镇痛 [M]. 乌鲁木齐:新疆人民出
版社,1985:91-92.
[7]雷载权,张廷模. 中华临床中药学 [M]. 第 1 版. 北
京:人民卫生出版社,1998:219.
[8] 阮长耿. 血小板基础与临床 [M]. 上海:上海科学
技术出版社,1987:47-48.
(收稿日期:2011-01-01 责任编辑:薛红)
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