全 文 ：近年来的药理研究表明 ， 刺山柑 （Capparis
spinosal L.）的根、茎、花、果提取物，除具有怯风除
湿、散寒、止痛、消肿的作用外，还具有保肝、抑菌、
降糖、降脂、抗凝血和改善记忆等药理作用，其应
用前景非常广泛 ［1］。 研究发现，刺山柑果实中含有
大量糖和苷类、黄酮类、生物碱类、挥发油、脂肪酸
类等有效成分 ［2-3］，但对于其中起抗氧化作用的活
性成分研究尚不多见。 刺山柑果实提取物具有体
外清除 DPPH 自由基的能力，且极性大的甲醇、水
提取物清除力高于极性小的乙酸乙酯和石油醚提
取物［4］。 对于不同类型的自由基体系，尚未有人比
较各极性部位的自由基清除能力。 我们的研究选
择刺山柑成熟果实，采用溶剂萃取法，依次用石油
醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇对 80%乙醇提取物按
极性进行萃取，比较不同极性溶剂提取物对 DPPH
自由基、 羟基自由基和超氧阴离子自由基 3 种不
同类型自由基的清除能力， 为进一步深入研究刺
山柑果实的抗氧化活性物质基础提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器 刺山柑（Capparis spinos-
al L.）果实 2009 年 9 月购于新疆阿克苏济仁堂药
店， 经福建中医药大学药学院中药鉴定教研室刘
小芬讲师鉴定。 1，1-二苯基-2-苦基肼 （DPPH）
（Sigma 公司）；维生素 C（北京双鹤药业股份有限
公司）；水杨酸、邻苯三酚（福州成海化学工业有限
公司）；无水乙醇等试剂均为分析纯（天津市富宇
精细化工有限公司）。 可见紫外分光光度计（上海
光谱仪器有限公司，752 型）； 循环水式多用真空
泵（郑州长城科工贸有限公司，SHB-III）；旋转蒸
发仪（上海亚荣生化仪器厂，RE-2000）。
1.2 方法
1.2.1 提取物的制备 将刺山柑果实经自然干燥
后用粉碎机粉碎为粗粉， 加入 80%乙醇回流提取
3 次，每次 1 h，合并滤液减压浓缩得乙醇提取总
浸膏。乙醇提取总浸膏加蒸馏水混悬后，依次用石
油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，并浓缩干
燥得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水等各
极性部位样品。
1.2.2 刺山柑果实提取物的体外抗氧化实验
1.2.2.1 对 DPPH 自由基的清除作用 配制浓度
为 0.1 mmol ／ L的 DPPH乙醇溶液，待测样品以95%
乙醇溶解并稀释成不同浓度的溶液。 按以下计算
公式中的方法加样， 室温下反应 30 min， 在波长
517 nm 处测定吸光值。 每样重复 3 次，取平均值，
并按下式计算自由基清除率：
K＝［1－（Ai－Aj） ／Ac］×100%
式中 Ai 为 2 mL DPPH 溶液加 2 mL 待测溶
液的吸光值；Aj 为 2 mL 待测溶液加 2 mL 乙醇的
吸光值；Ac 为 2 mL DPPH 溶液加 2 mL 乙醇的吸
光值。
1.2.2.2 对羟自由基（·OH）的清除作用 在试管
中依次加 9 mmol ／ L 水杨酸-乙醇溶液 0.5 mL，0.5
mL 不同浓度的待测样品，9 mmol ／ L Fe2＋溶液 （现
配）0.5 mL，3.5 mL 蒸馏水， 最后加入 8.8 mmol ／ L
H2O2 5 mL 启动 Fenton 反应， 摇匀后在波长 510
nm 处测定吸光值 A1。每样重复 3 次，取平均值，按
下列公式计算羟基自由基的清除率：
K＝［1－（A1－A2） ／A3］×100%
式中 A1 为加入 9 mmol ／ L Fe2＋溶液测得的吸
光值；A2 为以 0.5 mL 蒸馏水代替 9 mmol ／ L Fe2＋
溶液测得的吸光值；A3为 0.5 mL 蒸馏水代替待测
样品测得的吸光值。
1.2.2.3 对超氧阴离子自由基（·O2-）的清除作用
采用邻苯三酚自氧化法测定对超氧阴离子自由
基的清除作用。 取 10 mmol ／ L PBS 缓冲液 4.5 mL
（pH 8.3）与 100 μL 不同浓度的待测样品混合，于
刺山柑果实醇提取物的体外抗氧化活性
陈 莉 1，肖永成 2，林 晶 2
（1. 福建中医药大学药学院，福建 福州 350108；2. 福大百特科技发展有限公司，福建 福州 350002）
关键词：刺山柑提取物；抗氧化；自由基
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2010）05-0044-03
收稿日期：2010-02-03
作者简介：陈莉（1980—），女，硕士，讲师，主要从事药物活性物质的分离工作。
Journal of Fujian University of TCM October 2010，20（5）
福建中医药大学学报 2010 年 10 月 第 20 卷 第 5 期
44
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002397
表 1 乙醇粗提物对 DPPH 自由基的清除效果
浓度 ／ （mg ／mL）
清除率 ／%
2.07
92.53
1.38
82.22
1.03
63.47
0.69
54.20
0.52
42.43
表 2 乙醇粗提物对羟自由基的清除效果
浓度 ／ （mg ／mL）
清除率 ／%
50.00
86.93
20.00
77.14
10.00
60.12
5.00
37.47
3.00
28.82
25℃恒温 15 min，取混合液 3 mL 加入 45 mmol ／ L
邻苯三酚 100 μL，摇匀，反应 3 min，在波长 420
nm 处测定吸光值 A1。每样重复 3 次，取平均值，并
依下式计算超氧阴离子自由基的清除率：
K＝［1－（A1－A2） ／A3］×100%
式中 A1 为 4.5 mL PBS 缓冲液加 100 μL 待
测样品， 加 100 μL 邻苯三酚溶液的吸光值；A2为
4.5 mL PBS 缓冲液加 100 μL 10 mmol ／ L HCl 加
100 μL 蒸馏水的吸光值；A3 为 4.5 mL PBS 溶液
加 100 μL 邻苯三酚溶液加 100 μL 蒸馏水的吸光
值。
2 结果与分析
2.1 刺山柑果实粗提物的体外抗氧化作用 将
刺山柑果实的乙醇粗提物加 入到 1.2.2.1 和
1.2.2.2 项下所述的体外抗氧化体系中， 在实验浓
度范围内，随着样品浓度的增加，对自由基的清除
率均有所增高，呈一定的量效变化关系，见表 1、
表 2。
2.2 刺山柑果实提取物对 DPPH 自由基的清除
作用 分别将刺山柑果实乙醇提取物的不同极性
部位样品加入到 1.2.2.1 项下所述体系中，测得样
品对 DPPH 自由基的清除能力，见图 1。
由图 1 可知，粗提物的不同极性部位对 DPPH
自由基均有一定的清除作用， 清除能力与浓度呈
一定的量效关系。 在试验浓度范围内，对 DPPH 自
由基的清除能力以正丁醇提取物最高， 水提取物
次之，而极性较低的石油醚提取物、氯仿提取物和
乙酸乙酯提取物较低。
维生素 C、正丁醇提取物、水提取物清除DPPH
自由基的 IC50分别为 0.0068、0.37、0.48 mg ／mL。各
物质清除 DPPH 自由基的能力次序为 ： 维生素
C＞正丁醇提取物＞水提取物。
2.3 刺山柑果实提取物对羟自由基（·OH）的清
除作用 分别将刺山柑果实乙醇提取物的不同极
性部位样品加入到 1.2.2.2 项下所述体系中，测得
样品对羟自由基（·OH）的清除能力，见图 2。
由图 2 可知， 刺山柑果实乙醇提取物的不同
极性部位对羟自由基 （·OH） 均有一定的清除作
用，清除能力与浓度呈一定的量效关系。在试验浓
度范围内， 对羟自由基的清除能力为水提取物最
高，正丁醇提取物次之，而极性较低的石油醚提取
物、氯仿提取物和乙酸乙酯提取物清除力较低。
正丁醇提取物、 水提取物和维生素 C 清除羟
基自由基的 IC50 依次为 2.841、0.211、1.268 mg ／
mL。 清除羟自由基的能力次序为： 水提取物＞维
生素 C＞正丁醇提取物。
2.4 刺山柑果实提取物对超氧化阴离子自由基（·
O2-）的清除作用 将刺山柑果实乙醇提取物的不同
极性部位样品加入到 1.2.2.3 项下所述体系中，测
得样品对超氧化物自由基的清除能力，见图3。
由图 3 可知， 刺山柑乙醇提取物对超氧阴离
子自由基均有一定的清除作用， 清除能力与浓度
呈一定的量效关系。在试验浓度范围内，对超氧阴
离子自由基的清除能力为水提取物最高， 正丁醇
提取物次之，而极性较低的石油醚提取物、氯仿提
取物和乙酸乙酯提取物较低。
正丁醇提取物、 水提取物和维生素 C 清除超
氧阴离子自由基的 IC50 依次为 1.858、0.393、1.083
mg ／mL。 各物质清除超氧阴离子自由基的能力次
第 5期 陈 莉等：刺山柑果实醇提取物的体外抗氧化活性 45
序为：水提取物＞维生素 C＞正丁醇提取物。
3 讨 论
3.1 体外清除自由基实验表明，刺山柑果实乙醇
提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水提
取物 5 个不同极性部位均有一定的清除自由基能
力，且清除能力有较大差异，极性大的水提取物和
正丁醇提取物清除能力较高，极性较小的氯仿、乙
酸乙酯、石油醚提取物则清除能力较低。 其中，清
除 DPPH 自由基的能力依次为： 维生素 C＞正丁
醇提取物＞水提取物，这与前人实验结果相符 ［4］。
然而， 清除羟自由基和超氧化物自由基的能力次
序为：水提取物＞维生素 C＞正丁醇提取物，这与
DPPH 自由基体系中存在差异。
3.2 不同的抗氧化物质，清除自由基的机理存在
差别。 例如黄酮类和酚酸类物质，通过提供质子，
消除自由基， 而自身形成稳定的共振结构而阻断
氧化；皂苷类物质能提高体内 SOD（超氧化物歧化
酶）、CAT（过氧化氢酶）等抗氧化酶的活性，从而
增强机体抗氧化系统功能； 多糖可通过直接清除
活性氧（ROS）、络合产生 ROS 所必需的金属离子
等途径实现抗氧化作用。 混合几种天然提取的抗
氧化剂往往能显示多组分抗氧化协同作用， 表现
出更高的自由基清除能力 ［5］。 在本实验中，各提取
物对不同类型的抗氧化体系， 表现出的自由基清
除能力次序存在差别；即使是同一极性部位，在不
同抗氧化体系中表现出的自由基清除能力差别也
非常大， 这可能与各极性部位中存在的抗氧化活
性组分的类型、比例不同，能选择性地协同地清除
某种自由基有关。
3.3 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是自
身免疫性疾病，确切发病机理不明，被认为与多种
因素的综合作用相关，包括免疫反应调节异常、遗
传因素、病毒因素等。 近年来的研究发现，氧化应
激在类风湿关节炎的发生及发展过程中也具有重
要的地位， 自由基介导的长期的慢性的炎症反应
是类风湿关节炎发病过程的重要原因之一 ［6－7］。 近
年来发现， 自由基在慢性炎症反应过程中扮演重
要的角色， 各类自由基可能直接或间接参与关节
滑膜的炎性病变和骨质的破坏过程， 从而产生类
风湿性关节炎的临床症状 ［8－9］。 本研究通过对刺山
柑果实醇提取物的不同极性部位进行体外清除自
由基实验， 证明其醇提取物在体外具有较强的清
除自由基能力。实验表明，极性较强的水提取物和
正丁醇提取物， 对自由基的清除能力强于极性较
弱的石油醚提取物、 氯仿提取物和乙酸乙酯提取
物。在杨涛等 ［10］的实验中，刺山柑果实醇提物的极
性部位抗炎镇痛活性较为显著， 这与本研究实验
结果相符。因此，我们推测刺山柑治疗类风湿性关
节炎的作用也与此有关。
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福建中医药大学学报 第 20 卷46