全 文 ：发现了和格列吡嗪 、格列美脲 、格列本脲 、格列齐特 、盐酸苯
乙双胍对照品保留时间一致的色谱峰 , 采用二极管阵列检测
器进行检验 , 证实这些检出成分的紫外吸收图谱和相应对照
品的完全一致。 同时对苦瓜口含片 、茯苓山药片 、蜂胶胶囊
已鉴定出的西药成分进行了定量 , 其中 10批苦瓜口含片检
出格列吡嗪 , 含量 0.52 ～ 1.04 mg/片 , 8批蜂胶胶囊中检出
格列本脲 , 含量在 0.08 ～ 0.78 mg/粒 , 6批茯苓山药片检出
格列本脲 , 含量在 0.06 ～ 1.02mg/片。
3　讨论
3.1　结果确证
为保证检验结果准确无误 ,对阳性样品进行了 LC-MS及
MS-MS确证。采用正离子检测模式 ,分别检测到格列吡嗪准
分子离子 [ M+H] +峰 446、格列美脲 [ M+H] +峰 491、格列
本脲 [ M+H] +峰 494、格列齐特 [ M+H] +峰 324、苯乙双胍
[ M+H] +峰 206;进行二级质谱全扫描可得各化合物主要
碎片离子有:格列吡嗪 m/z321、 286, 格列美脲 m/z351、126,
格列本脲 m/z369、169、格列齐特 m/z127、110、苯乙双胍 m/z
189、 60;在相同条件下进行测定 , 阳性样品提取液中分别检
测到上述化合物准分子离子及相应的碎片离子。 LC-MS1-2检
验结果证实本实验方法的准确性。
3.2　方法适应性试验
本实验建立的线性梯度色谱法在 Waters600E、Shimadzu
LC-2010C和 Agilent1100高效液相色谱三种仪器系统上分别
操作 , 10种成分的保留时间及峰面积重复性良好(RSD均小
于 0.6%)。
3.3　检测波长的选择
从二极管阵列检测器检测得到的紫外吸收图谱可以看
出 , 10种成分中有 6种在 230nm波长左右有最大吸收 , 另 4
种成分在该波长处亦有较大的吸收 , 故将测定波长选在
230nm能达到理想的检测灵敏度。
3.4　流动相的选择
考察了不同的流动相成分组成:A相曾分别选用不同浓
度的磷酸二氢钾 ,磷酸铵 ,磷酸二氢铵 , 效果都不理想。最后
选用 0.01mol· L-1的醋酸铵溶液 , 不但应用于HPLC梯度洗
脱结果令人满意 , 而且也适合在需要用液相-质谱做进一步
确证时 , 选用该流动相。
3.5　近年来 , 中药中非法添加化学药物有愈演愈烈之势 ,同
时掺入多种低浓度的化合物(或药物的同系物 、衍生物)是新
趋势之一 [ 4] 。因此建立 “一法多检 ”的检验方法具有重要意
义。尽管 LC-MS或 GC-MS联用技术是目前各国普遍采用的
确证此类掺假行为的终极方法 [ 5-6] ,但质谱仪器价格昂贵 ,操
作要求高 , 仪器不普及 , 限制了在基层的打假应用。建立快
速 、简便 、高通量的 HPLC检验方法 , 适合基层药监 、药检部
门发现打击此类不法行为。本实验应用 HPLC梯度洗脱法
分析鉴别中药降糖制剂中 10种比较常用的化学降糖药物 ,
一次分析过程可在 30 min内完成 , 方法灵敏准确 ,具有较好
的专属性 , 可作为检查中药降糖制剂中可能非法添加上述化
合药物的初检方法。
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收稿日期:2007-06-20
作者简介:夏克中 ,男 ,助理工程师　　Tel:(0571)88858168-218　　E-mail:dhx1020@sohu.com
鼓槌石斛中抗癌成分毛兰素的含量测定研究
夏克中 ,王增 ,陈立钻(浙江天皇药业有限公司 ,杭州 310012)
摘要:目的　建立测定鼓槌石斛药材中毛兰素含量的高效液相色谱法。方法　采用 AgilentZorbaxEclipseXDB-C18柱(250 mm
×4.6mm, 5 μm);流动相为甲醇-乙腈-水(30∶30∶40);流速为 1.0mL· min-1;检测波长为 232 nm;柱温为 25℃。结果　毛兰
素在 0.093 5 ～ 5.984 μg内呈良好的线性关系(r=1.000 0);平均回收率为 100.4%, RSD=1.14%(n=9)。 结论　此法准确 、
·63·中国现代应用药学杂志 2008年 2月第 25卷第 1期　　　　　　　　　　　　　　　ChinJMAP, 2008February, Vol.25No.1
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2008.01.009
重复性好 , 可作为鼓槌石斛药材的质控方法。
关键词:鼓槌石斛;毛兰素;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R931.6;R979.1　　　文献标识码:B　　　文章编号:1007-7693(2008)01-0063-04
StudyontheDeterminationofAntitumorComponentErianininDendrobiumchrysotoxum
XIAKe-zhong, WANGZeng, CHENLi-zuan(ZhejiangTianhuangMedicinalPlantPharmaceuticalCo., Ltd, Hangzhou
310012, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　TodevelopanHPLCmethodforthedeterminationoferianininDendrobiumchrysotoxumLindl.
METHODS　ThecolumnwasaAgilentZorbaxEclipseXDB-C18(250mm×4.6mm, 5 μm);Themobilephasewasmethanol-acetoni-
trile-water(30∶30∶40), ataflowrateof1.0 mL· min-1;Thedetectionwavelengthwas232 nm;Thecolumntemperaturewasmain-
tainedat25 ℃.RESULTS　Thelinearrangeoferianinwasbetween0.093 5 ～ 5.984 μg(r=1.000 0), andtheaveragerecovery
was100.4%, withRSD=1.14%(n=9).CONCLUSION　Themethodisaccuratewithgoodreproducibilityandcanbeutilizedfor
thequalitycontrolofDendrobiumchrysotoxumLindl.
KEYWORDS:DendrobiumchrysotoxumLindl;erianin;HPLC;contentdetermination
　　鼓槌石斛 DendrobiumchrysotoxumLindl, 商品称为大黄
科 [ 1] , 小瓜黄科 [ 2]作为石斛入药。马国祥等 [ 3]从鼓槌石斛中
分离得到 5个化合物 , 而其中毛兰素(erianin)含量最高为
0.215%, 同时马国祥等 [ 4]又发现对小鼠肝癌以毛兰素的作
用最强 , 其抑瘤率为 62.25%。王源园等 [ 5]对鼓槌石斛指纹
图谱进行了研究 , 但对鼓槌石斛中的抗瘤有效成分毛兰素的
含量测定未见报道。笔者利用 HPLC测定了鼓槌石斛中毛
兰素的含量并进行了方法学研究。研究表明 , 本方法准确 、
重复性好 , 可作为鼓槌石斛药材的质控方法。
1　仪器与试药
美国Agilent1100系列 HPLC(G1322A在线真空脱气机 ,
G1311A四元梯度泵 , G1313A自动进样器 , G1316A柱温箱 ,
G1315BDAD检测器), USB-702B超声波清洗器;甲醇(色谱
纯 , 分析纯), 乙腈(色谱纯), 水(亚沸重蒸), 毛兰素对照品
自制(纯度:98.81%)。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液
取毛兰素对照品适量 , 加甲醇制成浓度为每 1 mL含
0.075mg的溶液 ,摇匀 , 即得。
2.2　供试品溶液
取鼓槌石斛药材粉末(过 3号筛)约 2 g, 精密称定 , 置
100mL锥型瓶中 ,精密加入分析纯甲醇 50 mL, 密塞 , 摇匀 ,
称定重量 , 超声处理(功率:300 W, 频率 50 kHz)15 min, 取
出 , 放冷 ,再称定重量 , 用分析纯甲醇补足减失的重量 , 摇匀 ,
过滤 , 取续滤液即得。
2.3　色谱条件
色谱柱为 AgilentZorbaxEclipseXDB-C18柱(250 mm×
4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇-乙腈-水(30∶30∶40);流速为
1.0 mL· min-1;检测波长为 232 nm;柱温为 25 ℃;进样量为
10 μL。在上述条件下 ,毛兰素色谱峰与相邻峰的分离度大
于 1.5,理论塔板数以毛兰素色谱峰计不低于3 000。见图 1。
图 1　HPLC色谱图
A-对照品;B-鼓槌石斛样品(批号 0703);1-毛兰素
Fig1　HPLCchromatograms
A-referencesubstance;B-Dendrobiumchrysotoxum Lindlsample
(0703);1-erianin
2.4　测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 μL, 注入
液相色谱仪 , 记录峰面积 , 按外标法计算。
2.5　线性关系的考察
精密称定毛兰素对照品 15.14 mg,加甲醇定容至 25 mL
量瓶中 , 摇匀 ,精密吸取 5 mL至 10 mL量瓶中 , 加甲醇定容
至刻度 , 摇匀;同法依次稀释 5次。分别取以上 7份溶液各
10 μL注入液相色谱仪中 , 测定 , 记录峰面积值 , 以峰面积 Y
为纵坐标 , 进样量 X(μg· μL-1)为横坐标 , 进行线性回归 ,
结果表明毛兰素在 0.093 5 ～ 5.984 μg内呈良好的线性关
系 , 回归方程为 Y=25 890X-19, r=1.000 0。 定量限为
·64· ChinJMAP, 2008February, Vol.25 No.1　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2008年 2月第 25卷第 1期
0.004 675μg。
2.6　仪器精密度试验
精密吸取对照品溶液 , 重复进样 6次 , 每次 10 μL, 以毛
兰素峰面积计 , RSD为 0.15%。见表 1。
表 1　精密度测定结果
Tab1　Resultsofprecisiontests
进样次数 峰面积 平均峰面积 RSD/%
1 1 864.8
2 1 869.5
3 1 871.1
4 1 871.8 1 870.2 0.15
5 1 872.0
6 1 872.1
2.7　重复性试验
精密称取 6份样品 , 按 “ 2.2”项下方法制成供试品溶液 ,
进样测定 , 进样量为 10 μL。 结果毛兰素平均含量为
1.616‰, RSD为 0.47%(n=6)。见表 2。
表 2　重复性试验的测定结果
Tab2　Resultsofreproducibilitytests
样品 称样量 /g 药材含量(以干燥品计‰) 平均含量 RSD/%
1 2.015 0 1.619
2 2.004 6 1.605
3 2.013 1 1.620
4 1.990 8 1.608 1.616 0.47
5 1.988 3 1.625
6 2.009 8 1.616
2.8　稳定性试验
取同一份供试品 ,分别在 0, 1, 2, 3, 4 h测定日内稳定性 ,
并连续 5 d测定日间稳定性 , 其日内平均峰面积为 1 540.0,
RSD为 0.34%;日间平均峰面积为 1 526.1, RSD为 0.46%。
见表 3。
表 3　日内 、日间稳定性测定结果
Tab3　Resultsofintra-dayandinter-daystabilitytests
稳定性 峰面积
1 2 3 4 5
平均 RSD/%
日内 1 533.2 1 537.1 1 542.5 1 540.5 1 546.8 1 540.0 0.34
日间 1 533.2 1 516.9 1 529.5 1 520.3 1 530.4 1 526.1 0.46
2.9　加样回收率试验
取同一批已测含量(1.616‰)的样品 9份 , 每份 1 g, 精
密称定 , 3份为一组 ,分别精密加入另配制的毛兰素对照品溶
液(浓度为0.627 25mg· mL-1)2, 2.5, 3 mL,按 “ 2.2”项下方
法制成低 、中 、高 3个浓度的溶液 , 按上述色谱条件测定 , 计
算回收率。平均回收率为 100.4%(n=9), RSD为 1.14%。
见表 4。
表 4　加样回收率试验测定结果
Tab4　Resultsofrecoverytests
样品 样品含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 1.549 8 1.254 5 2.787 0 98.6
2 1.553 0 1.254 5 2.797 2 99.2
3 1.559 8 1.254 5 2.807 0 99.4
4 1.565 6 1.568 1 3.160 1 101.7
5 1.561 7 1.568 1 3.144 6 100.9 100.4 1.14
6 1.548 1 1.568 1 3.115 4 99.9
7 1.591 4 1.881 7 3.508 2 101.9
8 1.550 7 1.881 7 3.452 1 101.0
9 1.560 3 1.881 7 3.453 5 100.6
2.10　样品测定
按照供试品溶液的制备方法和测定方法 , 对多批的鼓槌
石斛药材样品进行了测定 ,结果见表 5。
表 5　样品测定结果(n=2)
Tab5　Resultsofsampledetermination(n=2)
样品批次 产地 含量(以干燥品计 ‰)
0701批 云南景洪 1.65
0702批 云南景洪 1.68
0703批 云南景洪 1.62
0705批 云南景洪 1.64
3　讨论
3.1　测定波长的选择
毛兰素对照品的甲醇溶液 , 经 DAD检测器从 200 ～ 600
nm紫外吸收扫描 , 其最大吸收波长为 207 nm和 279 nm。
207nm处靠近末端吸收 , 279 nm处吸收值偏小。故选择 220
nm和 279nm之间 , ±2nm间响应值差异相对较小的 232 nm
为检测波长 , 并用对照品外标法测定。
3.2　流动相的选择
采用了乙腈-水(50∶50)、甲醇-乙腈-水(30∶30∶40)作为
流动相进行洗脱 ,二者色谱峰都有较好的分离度 , 但是在前
者中 , 毛兰素峰的理论塔板数不高 , 且毛兰素峰的拖尾因子
偏大 , 而在后者中毛兰素峰的峰形较好 ,有较高的理论塔板
数 , 所以选择后者作为流动相。
3.3　超声时间的选择
各取鼓槌石斛药材粉末(过 3号筛)约 2 g,精密称定 ,各
置 100 mL锥型瓶中 , 精密加入分析纯甲醇 50 mL, 密塞 , 摇
匀 , 称定重量 ,超声处理(功率:300 W, 频率 50 kHz), 分别于
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5, 10, 15, 20, 30min各取两份 , 放冷 , 再称定重量 , 用分析纯
甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 过滤 , 取续滤液注入色谱仪 , 记
录峰面积。结果在 5 min时 , 含量相对较低 , 10, 15, 20, 30无
较大区别 , 为保证药材中毛兰素尽可能的提取出来 ,同时也
考虑经济性 , 所以选择 15 min为样品的超声处理时间。
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收稿日期:2006-07-27
基金项目:四川省教育厅资助项目(2004A046)
作者简介:彭腾 ,男 ,博士 ,高级实验师　　Tel:(028)61800231　　E-mail:pengteng1973@sina.com
祛腐壮骨胶囊的质量标准研究
彭腾 ,张旭 ,邓贇(成都中医药大学药学院 ,成都 610075)
摘要:目的　建立祛腐壮骨胶囊的质量标准。方法　采用薄层色谱法对祛腐壮骨胶囊中的补骨脂 、地龙 、土鳖虫 、红花 、紫河
车等五味主要中药进行了鉴别 ,以高效液相色谱法对其主药补骨脂中的补骨脂素进行含量测定。结果　定性鉴别分离度好 ,
专属性强;补骨脂素的含量测定线性范围为 0.066 5 ～ 0.665 μg(r=0.999 9),平均回收率为 98.48%, RSD=1.1%。结论　
所建立之方法可靠 、准确 、专属性强 ,可有效控制祛腐壮骨胶囊的质量。
关键词:祛腐壮骨胶囊;薄层色谱法;高效液相色谱法;补骨脂素;质量标准
中图分类号:R289　　　文献标识码:B　　　文章编号:1007-7693(2008)01-0066-04
StudyonQualityStandardofQufuZhuangguCapsules
PENGTeng, ZHANGXu, DENGYun(ColegeofPharmacy, ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine, Chengdu
610075, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishthequalitystandardforQufuZhuangguCapsule.METHODS　Thin-layerchromatography
(TLC)wasemployedtoidentifyherbaAngelicasinensis, Pheretimaaspergilum, EupolyphagasinensisWalker, Carthamustinctorius
andZiheche, whilehighperformanceliquidchromatography(HPLC)wasappliedforthedeterminationofPsoraleninpsoraleacorylifolia
inShujinzhuangguPil.RESULTS　TheidentificationbyTLCwasdistinctandhighlyspecific.TheassayofPsoralenhadthelinear
rangeof0.0665 ～ 0.665μg(r=0.999 9), Theaveragerecoverywas98.48%, RSDwas1.1%.CONCLUSION　Themethodisre-
liable, accuateandspecificandcanbeusedforqualitycontrolofQufuzhuangguCapsules.
KEYWORDS:QufuZhuanggucapsules;TLC;HPLC;psoralen;qualitystandard
　　祛腐壮骨胶囊由补骨脂 、地龙 、紫河车等 12味中药组成
的新的复方制剂 , 具有祛腐生肌 、补肾壮阳 、强精健骨的功
效。为控制该制剂的内在质量 , 笔者采用薄层色谱法对方中
五味主要中药进行了鉴别试验 ,方以高效液相色谱法对其主
药补骨脂中的补骨脂素进行含量测定。方法专属性强 , 重复
性好 , 可作为该制剂质量控制的依据。
1　实验材料
硅胶 G(青岛海洋化工厂);祛腐壮骨胶囊由成都中医药
大学制剂室提供;补骨脂素 、异补骨脂素对照品(批号分别为
110739-200612, 110738-200309);紫河车 、土鳖虫 、地龙 、红花
对照药材(批号分别为 0872-9802, 120937-200305, 913-8902,
902-8903)购自中国药品生物制品检定所;其他药品与试剂
均为分析纯。
2　薄层色谱法
·66· ChinJMAP, 2008February, Vol.25 No.1　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2008年 2月第 25卷第 1期