全 文 ：江西农业学报　2011, 23(1):106 ～ 107ActaAgriculturaeJiangxi
应用尖孢镰刀菌培养滤液室内鉴定香石竹品种抗病性初探
彭绿春 1 ,杨秀梅1 ,苏 艳1 ,瞿素萍1＊ ,王丽花1 ,陆 琳2
　 　收稿日期:2010-11-10
作者简介:彭绿春(1981─),女 ,硕士 ,主要从事花卉质量控制与植物繁育技术研究。 ＊通讯作者:瞿素萍。
(1.云南省农业科学院 花卉研究所 、农业部花卉产品质量监督检验测试中心 ,云南昆明 650205;
2.云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 ,云南昆明 650223)
摘　要:采用香石竹尖孢镰刀菌培养滤液 ,在瓶内对 8个香石竹品种的组培苗进行了镰刀菌枯萎病抗性鉴定 , 结果鉴定
出高抗品种 1个 ,中抗品种 4个 ,中感品种 2个 ,高感品种 1个;初步建立起香石竹品种对镰刀菌枯萎病抗性的室内鉴定方法。
关键词:尖孢镰刀菌;香石竹品种;室内抗病性鉴定
中图分类号:S861.5　文献标识码:A　文章编号:1001-8581(2011)01-0106-02
APreliminaryStudyonAsepticIdentificationofResistanceofCarnationVarietiesto
ToxinFiltratefromFusariumoxysporumf.sp.diathi
PENGLu-chun1 , YANGXiu-mei1 , SUYan1 , QUSu-ping1＊ , WANGLi-hua1 , LULin2
(1.FlowerResearchInstitute, YunnanAcademyofAgriculturalSciences;SupervisionandTestingCentreforFlowers, Ministry
ofAgriculture, Kunming650205, China;2.InstituteofQualityStandardandTestingTechnology, YunnanAcademyofAgricultural
Sciences, Kunming650223, China)
Abstract:TheresistanceofeightcarnationvarietiestothetoxinfiltratefromFusariumoxysporumf.sp.diathiwasdetermined
withasepticseedlingsforthefirsttime.Theresultshowedtherewereonehighlyresistantvariety, fourmoderatelyresistantvarieties,
twomoderatelysusceptiblevarieties, andonehighlysusceptiblevariety.Inaddition, weestablishedamethodtoidentifytheresistance
ofcarnationvarietytotoxinfiltratefromF.oxysporumf.sp.diathiwithasepticseedling.
Keywords:F.oxysporum;Carnationvariety;Resistanceidentificationwithasepticseedling
　　香石竹镰刀菌枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusariumox-
ysporumf.sp.diathi)侵染所致的土传病害 ,在全世界所
有香石竹生产区均有分布 。该病在我国各香石竹生产区
普遍发生 ,危害较重 ,防治困难 ,造成了严重的经济损失 。
应用抗病品种和选育抗病品种是控制香石竹镰刀菌枯萎
病的首选措施 ,但常规的抗性鉴定费时费工 ,易受环境条
件的影响。在前人研究尖孢镰刀菌产毒条件 [ 1]的基础
上 ,笔者首次应用尖孢镰刀菌培养滤液 ,对 8个香石竹品
种的组培苗进行了瓶内抗病性鉴定 ,旨在探索出一套快
速 、简便鉴定抗性的方法 ,以缩短选育抗病品种的周期。
1　材料与方法
1.1　试验材料　供试的 8个香石竹品种来自云南省农
业科学院花卉所质检中心组培室 ,为生长正常 、长势一
致 、无污染的组培瓶苗 。
病原菌为从香石竹枯萎病株上分离得到的尖孢镰
刀菌致病菌株 ,并用王继华等 [ 2]的方法经 PCR鉴定和常
规培养技术鉴定 ,于马铃薯(PSA)培养基上保存待用。
1.2　试验方法
1.2.1　毒素滤液的制备　菌株移接在 PSA平板培养基
上 ,于 25℃下培养 1周 ,沿菌落边缘打出直径为 8mm的
菌饼 ,接入装有 200mL查氏培养液的 500 mL三角瓶内 ,
每瓶接 8片 ,置于摇床上 ,在光照、室温下振荡培养 26 ～
29 d[ 1] 。培养滤液先用 4层纱布过滤 ,再用两层滤纸过
滤 ,滤液以 3000r/min的转速离心 30 min;弃去沉淀 ,上
清液煮沸 15 min后 ,作为毒素原液保存于 4 ℃冰箱中
待用 [ 3] 。
1.2.2　鉴定浓度的筛选　分别配制毒素浓度(毒素原液
与培养基体积比)为 0%、20%、40%、60%的香石竹繁殖
培养基:MS+BA0.1 mg/L+NAA0.1mg/L, pH5.8,
高压灭菌 15 min;以香石竹品种 “Master”和 “红云 2号”
为材料 ,将其切至 1 ～ 1.5 cm高 ,接入培养基中 ,每瓶接
15棵 ,每个浓度 5瓶 。
1.2.3　不同品种的抗性鉴定　配制适宜毒素浓度的香
石竹繁殖培养基 ,将 8个香石竹品种的组培苗切至 1 ～
1.5cm高 ,接入培养基中 ,每瓶接 15棵 ,每个品种 5瓶。
每个品种设 1瓶对照 ,对照培养基里不添加毒素滤液。
1.2.4　病情调查及抗性分级标准　接种后 ,观察记录
发病情况 ,并于 1周后统计。病情分级标准见表 1。病
情指数的计算公式为:病情指数(%)=[ ΢(病级苗数 ×
病级)/ (苗数总和 ×发病最重级)] ×100。抗性等级按
样本的平均病情指数进行划分 ,划分标准为:高抗(HR)
≤40,中抗(MR)40.1 ～ 60.0,中感(MS)60.1 ～ 80.0,高
感 (HS)≥80.0。
表 1　病情分级标准
等级 发病情况
0 不发病(与对照相同)。
1 基部切口到第 1轮叶片下枯黄。
2 基部切口到第 1轮叶片枯黄 ,叶片病部不超过 1/4。
3 基部切口到第 1轮叶片枯黄 ,叶片病部超过 1/4。
4 基部切口到第 2轮叶片枯黄 ,第 2轮叶片病部不超过 1 /4。
5 基部切口到第 2轮叶片枯黄 ,叶片病部超过 1/4。
2　结果与分析
2.1　香石竹组培苗室内抗性鉴定的适宜毒素浓度　接
种 1周后 , 2个香石竹品种组培苗在不同毒素浓度处理
的培养基中 ,均表现出从茎基部切口处向上枯萎、叶片枯
萎白化等损伤 ,株高明显低于对照 ,并随着毒素浓度提
高 ,损伤加重。在毒素浓度为 60%的培养基中 ,苗完全
受损 ,枯萎和白化从苗基部蔓延至中上部;当毒素浓度为
40%时 ,苗受损程度和数量约为 50%;当毒素浓度为
20%时 ,苗受损程度和数量少于 20%。借鉴辐射诱变育
种和抗性筛选中的半致死剂量和浓度的原则 [ 4 , 5] ,可见
40%为香石竹组培苗室内抗性鉴定的适宜毒素浓度 。
2.2　8个香石竹品种对镰刀菌毒素的抗性　接种 2 d后
可见香石竹组培苗插于培养基内的茎基部出现干瘪枯
萎 ,随培养天数增加 ,枯萎向上蔓延至茎中上部及叶片 ,
不同品种表现出了不同的受伤程度。接种 1周后统计发
病情况 ,抗性鉴定结果(见表 2)表明:“Dalas”的病情指
数是 37,为高抗品种。 “小白菜 ”、“ YelowLiberty”、
“210162”和 “红云 2号”的病情指数在 40 ～ 60之间 ,为中
抗品种 。 “RedCorse”和 “Master-07”的病情指数在 60
～ 80之间 ,为中感品种。 “Master”的病情指数为 81,为
高感品种。
3　结论与讨论
在本试验中 ,同一品种在不同毒素浓度的培养基
中 ,受损程度不同 ,随毒素浓度提高 ,受损加重;不同品种
在同一毒素浓度的培养基中受损程度也不同 ,其中 , Dal-
las、YelowLiberty、Redcorse、Master的鉴定结果与王继
华等[ 5]进行的田间鉴定结果一致 ,初步说明用镰刀菌培
养滤液在室内鉴定香石竹品种对枯萎病的抗性是可行
的。鉴于本试验只处于初探阶段 ,以后还应增加供试品
种 ,并结合田间鉴定 ,来优化完善室内鉴定技术体系 。
表 2　8个香石竹品种对镰刀菌枯萎病抗性鉴定结果
品种 病情指数 抗性
Dalas 37 HR
小白菜 44 MR
YelowLiberty 47 MR
210162 53 MR
红云 2号 57 MR
Redcorse 68 MS
Master-07 71 MS
Master 81 HS
　　此前国内外关于此方面的研究 ,大多是先提取镰刀
菌粗毒素 ,再用固体粗毒素配制一定浓度的毒素溶液进
行抗性鉴定 。由于提取粗毒素比较费时 ,且产量低 ,每次
提取需要的培养滤液量大 ,因此本研究对前人的方法稍
作改进 ,省去了镰刀菌粗毒素的提取这一步 ,首次直接用
培养滤液作为毒素原液进行鉴定 。当然 ,两种方法各有
优势 ,粗毒素法虽然比较费时 ,工作量大 ,但固体粗毒素
能保存的时间长 ,稳定 ,体积小 ,易保存;培养滤液法省
时、省力 ,但保存时间短 。我们可以根据实际需要来选择
不同的方法 。
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