全 文 ：桫椤茎中牡荆素的抑菌活性
李书华1，赵琦2，成英1，刘芳1
（1.乐山师范学院化学与生命科学学院，四川乐山 614000；2.成都大学生物产业学院，四川成都 610106）
摘 要：从体外试验的角度观察牡荆素的抑菌作用。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌为供试菌种，采用滤
纸片法和试管内药液 2倍稀释法测定牡荆素的抑菌圈直径和最低抑菌浓度（Minimal inhibitive concentration，MIC）。
牡荆素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有明显的抑制作用，对大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为
100 μg/mL，对金色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）为 25 μg/mL，对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为
100 μg/mL。牡荆素具有良好的体外抑菌作用。
关键词：牡荆素；抑菌作用；最低抑菌浓度
Antimicrobial Activities of Vitexin from Alsophila spinutosa
LI Shu-hua1，ZHAO Qi2，CHENG Ying1，LIU Fang1
（1. Department of Chemistry and Life Sciences，Leshan Normal University，Leshan 614000，Sichuan，China；
2. Institute of Biological Industry ChengDu University，Chengdu 610106，Sichuan，China）
Abstract：To study the antimicrobial activities of vitexin from Alsophila spinutosa. With Staphylococcus
aureus， Escherichia coli and Bacillus sutilis as tested bacterium， the bacteriostatic effects of vitexin from
Alsophila spinulosa were studied by filter paper method and double broth dilution method. The MIC of vitexin on
Escherichia coli was 100 μg/mL， the MIC of vitexin on Staphylococcus aureus was 25 μg/mL， and the MIC of
vitexin on Bacillus sutilis was 100 μg/mL. The vitexin has good bacterostatic action.
Key words：vitexin；bacteriostatic effect；minimal inhibitive concentration
基金项目：四川省教育厅资助科研项目（13ZA0105）；四川省旅游发展研
究中心资助项目（LYM12-36）
作者简介：李书华（1970—），女（汉），副教授，硕士，研究方向：功能
性化学成分。
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.14.002
桫椤（Alsophila spinutosa），又名“树蕨”、“笔筒树”，
属蕨类植物门真蕨亚门水龙骨目桫椤科[1]。桫椤的茎干
可入药，在中药里被称为龙骨风，在民间多用桫椤茎
干治疗皮肤病[2]。弓加文等首次报道桫椤叶甲醇提取
物对大肠杆菌有较好的抑制效果，桫椤茎干甲醇提取
物对枯草芽孢杆菌有较好的抑制效果[3]。为了进一步
明确其抑菌成分，我们对桫椤茎干甲醇提取物的化学
成分进行了研究，结果在其正丁醇萃取物中首次分离
得到了两个黄酮苷和一个有机酸类化合物：牡荆素
（vitexin）、异荭草素（isorientin）和 3，4，6-三羟基-1-环
己烯羧酸[4]。通过薄层层析色谱，发现牡荆素是桫椤茎
干中含量最高的黄酮类化合物。据药理研究表明：牡
荆素具有减轻心肌细胞损伤，保护缺氧复氧心肌细胞
等多种药理活性作用[5-7]，但目前尚未见到牡荆素抑菌
活性的研究报道。为了进一步拓展对牡荆素药理作用
的研究，我们对桫椤茎干中的牡荆素进行了初步的抑
菌作用研究。
1 材料和方法
1.1 材料
样品：牡荆素，从桫椤茎干的甲醇提取物中分离
得到，通过 1H-NMR和 13C-NMR鉴定其结构[4]。
菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球
菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus
sutilis）：乐山师范学院微生物室提供。
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
仪器为 DHP-9052 电热恒温培养箱：中仪国科
（北京）科技有限公司；YX-18HM高压灭菌锅：上海郢
研科学仪器有限公司；SW-CJ-1FD单人单面洁净工作
台：苏州卓越净化设备有限公司；FA2204B分析天平：
上海天平仪器厂；MM720微波炉：美的集团。
基础研究
食品研究与开发
Food Research And Development
2013年 7月
第 34卷第 14期
4
1.2 方法
1.2.1 不同浓度牡荆素溶液的配制
准确称取 500 mg牡荆素转入 50 mL容量瓶中，向
容量瓶中加入 70 %的乙醇 30 mL，充分振摇，使其溶
解，用 70 %乙醇定容。然后从该溶液中取 5.0 mL牡荆
素溶液置于 50 mL容量瓶中，70 %乙醇定容，依法稀
释，配制成 5种不同浓度的牡荆素溶液，即 1.0、10-1、
10-2、10-3、10-4 mg/mL。
1.2.2 供试菌株的活化
按照无菌操作要求，将 3种供试菌株移接入试管
斜面培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）上，在 37 ℃的生化
培养箱中培养 18 h~24 h，重复活化 2次~3次。
1.2.3 菌悬液的制备
用接种环各挑取一环菌体分别放入装有 10 mL
无菌水的试管里，充分振荡 10 min，使其混匀，再从该
液中取 1 mL菌液加入有 9 mL无菌水的试管中，依次
稀释，制备出三种浓度梯度的菌悬液，即稀释成 10倍、
100倍和 1 000倍 3个浓度，备用。
1.2.4 菌悬液浓度的确定
用移液枪精密吸取上述 3种不同浓度的菌悬液
各 4 μL分别滴加于牛肉膏蛋白胨培养基上，涂匀后，
放置于 37℃生化恒温培养箱中培养 36 h。结果发现：
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在稀释
100倍的条件下，生长菌落比较均匀，有利于下一步的
抑菌试验。
1.2.5 抑菌试验
采用滤纸片法测定牡荆素对大肠杆菌、金黄色葡
萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌作用[8]。将直径为 6 mm
的滤纸片灭菌后分别浸泡于 5种不同浓度的牡荆素溶
液中备用，另外用 70 %乙醇浸泡的滤纸片为对照。分
别在牛肉膏蛋白胨培养基表面加 4 μL 各种浓度的
3种菌液，用涂布器均匀涂布在培养基表面，在无菌室
室温放置 2 min~5 min后，在标签的相应位置贴上对应
的不同浓度牡荆素溶液浸泡的滤纸片，每菌每一浓度
重复 3次，置于 37 ℃恒温培养箱中培养 24 h~48 h后，
准确测定其滤纸片周围抑菌圈直径的大小，计算平均
直径，结果以 mm表示。
1.2.6 最低抑菌浓度（MIC）的测定
采用试管内药液 2倍稀释法，即肉汤稀释法 [9]，
配制成 200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5 μg/mL
共 8个药物浓度系列。另做不含药物的生长对照。将上
述试管置于 37 ℃恒温培养箱中培养 24 h。取出试管，
以不含药物的生长对照管有细菌显著生长的时间为观
察和评定MIC的最佳时间，以肉眼观察，药物最低浓度
管无细菌生长者，即为受试菌的最低抑菌浓度（MIC）。
2 结果与分析
2.1 牡荆素对三种菌的抑制作用
根据 1.2.1项下牡荆素溶液的配置方法，得到 5种
不同浓度的牡荆素溶液，即 1.0、10-1、10-2、10-3、10-4mg/mL；
根据 1.2.4项试验确定菌悬液浓度为稀释 100倍；按照
1.2.5项下方法进行抑菌试验，结果如表 1。
从表 1可以看出，对照组对大肠杆菌、金色葡萄
球菌和枯草芽包杆菌有微弱的抑制作用，而不同浓度
的牡荆素对三种菌则表现出明显的抑制作用，随着牡
荆素浓度的增加，其抑菌能力增强，即使在低浓度
10-4 mg/mL时仍表现出较强的抑菌效果。
2.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定
根据 1.2.6项下试验方法，通过肉眼观察试验现
象，发现牡荆素对大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为
100 μg/mL，对金色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）为
25 μg/mL，对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为
100 μg/mL，由此可知金色葡萄球菌对牡荆素更敏感。
3 小结与讨论
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病
原菌，而大肠杆菌和枯草芽孢杆菌则是条件致病菌。
牡荆素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
均有明显的抑制作用，对大肠杆菌的最低抑菌浓度
（MIC）为 100 μg/mL，对金色葡萄球菌的最低抑菌浓度
（MIC）为 25 μg/mL，对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度
（MIC）为 100 μg/mL，金色葡萄球菌对其更敏感，因此，
有必要进一步研究该化合物对金色葡萄球菌的抑菌
机理，为牡荆素的开发利用提供理论依据。
参考文献：
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表 1 牡荆素对菌株的平均抑菌圈直径
Table 1 The diameters of inhibition zone of the strains
李书华，等：桫椤茎中牡荆素的抑菌活性基础研究
项目 大肠杆菌/mm 金色葡萄球菌/mm 枯草芽孢杆菌/mm
10-4 mg/mL 8.1 8.5 8.1
10-3 mg/mL 9.5 9.6 9.6
10-2 mg/mL 9.9 10.3 9.9
10-1 mg/mL 10.0 10.7 10.8
1.0 mg/mL 10.7 11.6 11.2
对照 7.0 7.0 7.0
5
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收稿日期：2013-01-23
酶法合成异VC混合脂肪酸酯及其抗氧化性能
郑大贵1，祝显虹1，余泗莲2，彭化南1，俞飞1，毛刘量1
（1.上饶师范学院江西省普通高校应用有机化学重点实验室，江西上饶 334001；
2.百勤异VC钠有限公司，江西德兴 334221）
摘 要：在 Lipozyme 435脂肪酶催化下，利用异 VC与山茶油、猪油、麻油和菜籽油分别发生酯交换反应，合成异 VC混
合脂肪酸酯，产物用柱层析法分离纯化。以山茶油与异 VC反应为例，详细考察了反应溶剂、反应时间、反应物配比、酶
用量和油脂回收循环使用对反应转化率的影响。优化条件下，反应转化率最高达到 48 %。将合成的异 VC山茶油脂肪
酸酯、异 VC猪油脂肪酸酯、异 VC芝麻油脂肪酸酯和异 VC菜籽油脂肪酸酯应用于新鲜山茶油中，用过氧化值法
（POV）进行抗氧化试验。结果表明，异 VC混合脂肪酸酯是良好的脂溶性抗氧化剂，并表现出明显的剂效关系。
关键词：异VC；脂肪酶；异VC混合脂肪酸酯；油脂；抗氧化性
Lipase-catalyzed Synthesis of D-isoascorbyl Mixed-fatty Acid Esters and Their Antioxidation Activities
ZHENG Da-gui1，ZHU Xian-hong1，YU Si-lian2，PENG Hua-nan1，YU Fei1，MAO Liu-liang1
（1. Key Labortatory of Applied Organic Chemistry，Higher Institutions of Jiangxi Province，Shangrao Normal
University，Shangrao 334001，Jiangxi，China；2. Parchn Sodium Isovitamin C Co.，Ltd.，Dexing 334221，
Jiangxi，China）
Abstract：D -isoascorbyl mixed -fatty acid esters were synthesized with Lipozyme 435 as catalyst by the
transesterification of D-isoascorbic acid with camellia oil， lard， sesame oil and canola oil， respectively. The
effect of factors such as reaction solvent， reaction time， the ratio of reactants， the amount of lipase， and the
recycled oils and fats on the reaction conversion were explored with the synthesis of D-isoascorbyl camellia oil
fatty acid esters as reaction model to optimize the reaction conditions. Under the optimized conditions， the
reaction conversion could reach 48 % . The antioxidation activities of D -isoascorbyl camellia oil fatty acid
esters， D -isoascorbyl lard fatty acid esters， D -isoascorbyl sesame oil fatty acid ester and D -isoascorbyl
rapeseed oil fatty acid ester in camellia oil was tested by POV determination， respectively. The results showed
that all the synthesized D-isoascorbyl mixed-fatty acid esters were excellent fat-soluble antioxidants and that
their antioxidation activities increased with the applied concentration.
Key words：D-isoascorbic acid；lipase；D-isoascorbyl mixed-fatty acid ester；oils and fats；antioxidation
基金项目：江西省普通高校重点实验室科技计划项目（GJJ08523号）；江西省科技条件平台建设项目（2010DTZ01900）
作者简介：郑大贵（1960—），男（汉），教授，主要从事有机食品添加剂的合成及应用研究。
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.14.003
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食品研究与开发
Food Research And Development
2013年 7月
第 34卷第 14期 基础研究
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