全 文 : [文章编号] 1671-587Ⅹ(2012)03-0595-03
[收稿日期] 2011-11-02
[基金项目] 国家科技部支撑计划项目资助课题 (2006BAI06A18-17)
[作者简介] 刘 欣 (1989-),女,辽宁省义县人,医学硕士,主要从事中草药有效成分的研究。
[通信作者] 王广树 (Tel:0431-85648631,E-mail:wgs@jlu.edu.cn)
鸦葱中黄酮成分的提取分离及结构鉴定
刘 欣,张子龙,王 哲,何 琭,彭 诚,王广树,谢冰雪*
(吉林大学药学院生药学教研室,吉林长春130021)
[摘 要] 目的:提取、分离鸦葱中的黄酮成分并鉴定其结构,为开发利用其药用价值提供实验依据。方法:
取鸦葱全草粉末,用70%乙醇提取,提取液经大孔树脂、硅胶、ODS柱、高效液相色谱仪分离纯化,并对分离
的化合物进行结构鉴定。结果:分离得到3个化合物,经光谱学数据分析和理化常数鉴定其分别为:5,7,4′-
三羟基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷、5,7,4′- 三羟基黄酮-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷及
5,7,3′,4′- 四羟基黄酮-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷。结论:3种化合物均为首次从鸦葱中
得到的黄酮苷类化合物。
[关键词] 鸦葱;黄酮苷;提取分离;结构鉴定
[中图分类号] R284.2 [文献标志码] A
Isolation and structure identification of flavonoid
glycosides fromScorzoneraaustriacaWilld
LIU Xin,ZHANG Zi-long,WANG Zhe,HE Lu,PENG Cheng,WANG Guang-shu,XIE Bing-xue*
(Department of Pharmacognosy,School of Pharmacy,Jilin University,Changchun 130021,China)
Abstract:Objective To isolate the flavonoid glycosides fromScorzonera austriaca Willdand identify its structure
and to provide experimental evidences for medicinal values of flavonoid glycosides fromScorzonera austriaca Willd.
Methods The herbs of Scorzonera austriaca Willd was extracted with 70%ethanol,the extractives were purified
with macroporous resin,silica gel,ODS column chromatography and HPLC and the structure of componuds were
identified.Results Three compounds were isolated,and their structures were identifited through spectroscopic
analysis and physico-chemical constants.They were 5,7,4′-trihydroxy-flavone-8-C-β-D-glucopyranoside,5,7,
4′-trihydroxy-flavone-6-C-α-L-arabinosyl-8-C-β-D-glucopyranoside and 5,7,3′,4′-tetrahydroxy-flavone-6-C-α-L-
arabinosyl-8-C-β-D-glucopyranoside.Conclusion Three compounds are al regarded as flavonoid glycosides isolated
fromScorzonera austriaca Willdfor the first time.
Key words:Scorzonera austriaca Willd;flavonoid glycoside;extraction and isolation;structure identification
鸦葱系菊科鸦葱属植物,全属约有175种,主
要分布于欧洲、西南亚及中亚等地。我国约有
29种,主要分布于西北地区[1]。鸦葱在民间作为
传统藏药,全草入药,具有清热解毒,活血消肿等
作用,可消炎接骨、治疗牙龈炎和疔疮痈疽等[2]。
此外,该属植物有很好的经济价值,在很多国家和
地区将其作为食品和动物饲料[3]。迄今为止,鸦葱
中萜类和挥发油成分已有研究[4-5]报道,但关于黄
酮类成分的报道很少,本课题组对鸦葱中黄酮苷类
成分进行研究,旨在为鸦葱新药的进一步开发提供
科学依据和实验数据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器 X-4数字显微熔点测定仪
595
第38卷 第3期
2012年5月
吉 林 大 学 学 报 (医 学 版 )
Journal of Jilin University(Medicine Edition)
Vol.38 No.3
May 2012
DOI:10.13481/j.1671-587x.2012.03.013
(北京泰克公司);HP8453紫外光谱测定仪(美国
惠普公司);FT-IR 5DX Nicolet/Nicolet magana-
IR 560 型 红 外 光 谱 仪; Varian
UNITYINOVA2400核磁共振仪(瑞士 BRUKER
公司);LDII700-TOF-MS激光解吸电离飞行时间
质谱仪;薄层色谱硅胶G(10~40μm)(青岛海洋
化工厂);柱色谱硅胶(200~300目,青岛海洋化
工厂);ODS色谱硅胶(ODS-A 50μm,12nm GH
GEL);SHIMADZU高效液相色谱仪(日本岛津公
司)由LC-10AT双元泵、柱温箱、工作站及SPD-
10A型紫外检测器(UV)组成;分析纯试剂;鸦葱
采自吉林通化,经吉林大学药学院生药学教研室张
静敏教授鉴定为鸦葱。
1.2 化合物的制备 取8kg干燥的鸦葱全草粉
末,用70%乙醇浸提2次,得到500g鸦葱的醇
提取物。将此提取物上预处理过的D101大孔树脂
柱,依次用水和60%乙醇洗脱,得到60%乙醇洗
脱物130g。将此洗脱物反复进行硅胶柱色谱分离,
洗脱剂为CHCl3∶MeOH∶EtoAc∶H2O (2.0∶
2.0∶4.0∶1.0下层)得A、B、C、D、E、F和G
7个组分,将D和F组分经ODS柱色谱进一步分
离,洗脱剂为甲醇-水(1∶6,1∶5,1∶4,1∶3,
1∶2,1∶1),得D3、F1和F2,将此3个组分经
高效液相色谱法进行纯化,色谱条件为色谱柱:
Gemini 5uC18 110A (250×10.00mm 5micron)
检测波长:273nm;流速:3.0mL·min-1;进样
量:50μL;柱温:25℃;流动相为甲醇(A)和1‰
三氟乙酸(B)。洗脱条件(D3:0~15.00min CB
45%,15.00~25.00min CB45%~35%,25.00~
35.00min CB35%~25%;F1、F2:0~35.00min
CB45%),得化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。
2 结 果
2.1 化合物Ⅰ的结构鉴定 该化合物为浅黄色粉
末,盐酸镁粉反应、Molish反应显阳性,AlCl3/
EtOH 溶液在UV 365nm下显黄绿色荧光,说明
该化合物是黄酮苷类化合物。MS m/z:[M-1]-
431。IRvmax(KBr)cm-1:3 350(OH),1675(C=
O),1 600,1 500。1 H-NMR(400 MHz,DMSO-
d6)δ:13.16(1H,s,OH-5),8.02(2H,d,J=
8.0Hz,H-2′,6′),6.89(2H,d,J=8.0Hz,
H-3′,5′),6.77(1H,s,H-3),6.27(1H,s,
H-6),4.69(1H,d,J=6.4Hz,Glu-H-1)。13 C-
NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.9(C-
2),102.4(C-3),182.0(C-4),161.1(C-5),98.2
(C-6),162.7(C-7),104.6(C-8),156.0(C-9),
103.9(C-10),121.6(C-1′),128.9(C-2′),115.8
(C-3′)160.4(C-4′),115.8(C-5′),128.9(C-6′),
73.4(Glu-1),70.8(Glu-2),78.6(Glu-3),70.5
(Glu-4),81.8(Glu-5),61.3(Glu-6)。
2.2 化合物Ⅱ的结构鉴定 该化合物为浅黄色粉
末,盐酸镁粉反应、Molish反应显阳性,AlCl3/
EtOH 溶液在UV 365nm下显黄绿色荧光,说明
该化合物是黄酮苷类化合物。MS m/z:[M-1]+
563。IR max(KBr)cm-1:3 350(OH),1 675(C=
O),1 600,1 500。1 H-NMR(400 MHz,DMSO-
d6)δ:13.7(1H,s,OH-5),8.03(2H,d,J=
8.0Hz,H-2′,6′),6.90(2H,d,J=8.0Hz,
H-3′,5′),6.81(1H,s,H-3),4.73(1H,d,
J=6.4Hz,Glu-H-1)。 13C-NMR (400 MHz,
DMSO-d6)δ(ppm):164.1(C-2),102.6(C-3),
182.3(C-4),158.2(C-5),108.1(C-6),160.1(C-
7),105.1(C-8),155.1(C-9),103.7(C-10),
121.5(C-1′),129.0(C-2′),116.0(C-3′),161.2
(C-4′),116.0(C-5′),129.0(C-6′),78.6(Glu-
1),73.4(Glu-2),70.8(Glu-3),70.5(Glu-4),
81.8(Glu-5),61.3(Glu-6),74.2(Ara-1),73.8
(Ara-2),70.8(Ara-3),70.5(Ara-4),68.4(Ara-
5)。
2.3 化合物Ⅲ的结构鉴定 该化合物为浅黄色粉
末,盐酸镁粉反应、Molish反应显阳性,AlCl3/
EtOH溶液在 UV 365nm下显黄绿色荧光,说明
该化合物是黄酮苷类化合物。MS m/z:[M-1]-
579。IRvmax(KBr)cm-1:3 500(OH),1 650(C=
O),1 600,1 500。1 H-NMR(400MHz,DMSO-
d6)δ:13.67(1H,s,OH-5),7.53(1 H,d,J=
8.0Hz,H-6′),7.48(1 H,s,H-2′),6.67(1H,
s,H-3),6.87(1H,d,J=8.0Hz,H-5′),4.72
(1H,d,J = 9.6 Hz, H-1″)。13 C-NMR
(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.2(C-2),
102.5(C-3),182.2(C-4),158.2(C-5),108.0(C-
6),160.1(C-7),105.0(C-8),155.1(C-9),
103.7(C-10),121.9(C-1′),113.4(C-2′),145.8
(C-3′),149.7(C-4′),115.6(C-5′),119.4(C-
6′),73.2(Glu-1),70.1(Glu-2),78.9(Glu-3),
69.6(Glu-4),82.0(Glu-5),61.5(Glu-6),74.2
(Ara-1),73.8(Ara-2),70.8(Ara-3),70.7(Ara-
4),68.4(Ara-5)。
695 吉林大学学报(医学版) 第38卷 第3期 2012年5月
3 讨 论
化合物Ⅰ的IR谱显示有羰基、羟基和苯环等
功 能 团。1 H-NMR 谱 中 δ8.02 (2H,d,J =
8.0Hz),为黄酮苷B环上2′,6′的氢信号,δ6.89
(2H,d,J=8.0Hz,H-3′,5′)为3′,5′的氢信
号。δ6.77(1H,s),6.27(1H,s)分别为黄酮母
核3位、6位氢的特征信号峰,δ4.69(1H,d,
J=6.4Hz)为糖的端基氢。13 C-NMR 谱中低场
δ166~150处出现5个含氧碳信号,提示该化合物
除去C-2和C-9外连接有3个羟基,分别连于黄酮
母核的C-5、7、4′位上;δ102.4为黄酮母核 C-3
位碳特征信号,δ182.0为C-4位羰基的特征信号;
C-8位的信号出现在δ104.6处,根据黄酮碳苷成
键规律,示8位以碳碳键与糖相连,表明此化合物
是芹菜素8位的碳苷。碳谱中其他信号与葡萄糖碳
苷的信号一致。综上所述,并与文献[6-7]中的13C-
NMR数据比较,鉴定化合物Ⅰ为5,7,4′- 三羟
基黄酮-8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷。
化合物Ⅱ的IR谱显示有羰基、羟基和苯环等
功能团。1 H-NMR谱中δ8.03(2H,d,J=8.0Hz)
为黄酮苷B环上2′,6′的氢信号,6.90(2H,d,
J=8.0Hz,H-3′,5′)为3′,5′的氢信号。δ6.81
(1H,s)为黄酮母核3位氢的信号峰,除此而外,
未见黄酮苷元的其他非活泼氢信号。13 C-NMR谱中
低场δ166~150处出现5个含氧碳信号,提示该化
合物除去C-2和C-9外连接有3个羟基,分别连于
母核的C-5、7、4′位上;δ102.6为黄酮母核 C-3
位碳特征信号,δ182.3为C-4位羰基的特征信号;
C-6和C-8位的信号未出现在δ90~100处,而出
现在δ108.1和105.1处,根据黄酮碳苷成键规律,
C-6和C-8位均以碳碳键与糖相连,表明此化合物
是芹菜素C-6和C-8的双糖链碳苷。进一步分析氢
谱和碳谱数据,并与文献[8-10]中的13 C-NMR数
据比较,鉴定化合物Ⅱ是5,7,4′- 三羟基黄酮-6-
C-α-L-吡喃阿拉伯糖8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷。
化合物Ⅲ的IR谱显示有羰基、羟基和苯环等
功 能 团。1 H-NMR 谱 中 δ6.87 (1H,d,J =
8.0Hz),7.48(1H,s),7.53(1H,d,J =
8.0Hz)分别为黄酮苷B环上5′,2′及6′的氢信
号;δ6.67(1H,s),4.72(1H,d,J=10Hz)分
别为黄酮母核3位氢和糖的端基氢的特征信号峰;
除此而外,未见黄酮苷元的其他非活泼氢信号。
13C-NMR谱中低场δ166~150处出现6个含氧碳
信号,提示该化合物除去C-2和C-9外连接有4个
羟基,分别连于黄酮母核的C-5、7、3′、4′位上;
δ102.5是黄酮母核C-3位碳的信号峰,δ182.2是
C-4位羰基的特征信号;C-6和C-8位的信号未出
现在δ90~100处,而出现在δ108.0和105.0处,
根据黄酮碳苷成键规律,C-6和C-8位均以碳碳键
与糖相连,即该化合物为木犀草素C-6和C-8的双
糖链碳苷。进一步分析氢谱和碳谱数据,并与文献
[11-12]中的13C-NMR数据比较,鉴定化合物Ⅲ为
5,7,3′,4′- 四羟基黄酮-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖
8-C-β-D-吡喃葡萄糖碳苷。
鸦葱作为传统中药,主治五痨七伤和疔疮痈肿
等,本研究首次从鸦葱中分离得到3种黄酮苷类化
合物,其作为菊科鸦葱属植物中药研究的一环,为
鸦葱的药用价值的开发利用提供了可靠的依据。
[参考文献]
[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:
科学出版社,1997,23-25.
[2]曾春萍.桃叶鸦葱抗炎镇痛作用的实验研究[J].天津中医药,
2010,27(6):515-517.
[3]Wu QX,Yang WY,Hu YP.我国西部地区药用植物鸦葱的
结构多样性研究[A].第十届全国药用植物及植物药学术研讨
会论文摘要集[C].2010.
[4]武全香,李 娟,祝 英.藏药鸦葱化学成分的研究[J].
有机化学,2003,23(Sppl 1):446.
[5]赵瑞建,刘玉雪,朱 健,等.华北鸦葱不同部位挥发油化学
成分分析[J].时珍国医国药,2010,21(8):1891-1893.
[6]李洪玉,孙静芸,戴诗文.竹叶化学成分研究[J].中药材,
2003,26(8):563-564.
[7]何文妮,叶 敏,王宝荣,等.浮萍中黄酮类化学成分的分离
与鉴定[J].沈阳药科大学学报,2010,27(11):871-875.
[8]Hu YM,Ye WC,Li Q,et al.C-glycosylflavones from
stelaria media[J].Chin J Nat Med,2006,4(6):420-424.
[9]刘卓伟,阙兆林,叶志文,等.毛鸡骨草地上部分的化学
成分[J].中国天然药物,2008,6(6):415-417.
[10]Renata C,Janete HY,Emerson FQ.On-line identification of
further flavones C-and O-glycosides from sugarcane by HPLC-
UV-MS[J].Phytochem Analysis,2006,17(5):337-343.
[11]Hiler K,Leska M,Rahn I.Structure of the flavonoid C-
glycosides from Astrantia majorl[J].Sci Pharm,1988,
56(3):169-170.
[12]Chen X,Nigel CV,Peter JH,et al.Havone C-glycosides
from viola yedoensis makino[J].Chem Pharm Bul,2003,
51(10):1204-1207.
*吉林大学药学院药学专业2008级
795刘 欣,等 . 鸦葱中黄酮成分的提取分离及结构鉴定