全 文 ：安徽农业大学学报 , 2006, 33(2):230-233
JournalofAnhuiAgriculturalUniversity
三角紫叶酢浆草组培快繁技术的研究①
王　钰 1 ,阮　龙 2 ,武廷章1 ,吴瑾华 3 ,谢继峰1 ,吴　林 1 ,吴　飞1
(1.安徽大学生命科学学院 , 合肥 230039;2.安徽省农业科学院烟草研究所 ,凤阳 233100;
3.华中科技大学生命科学与技术学院 , 武汉 430074)
摘　要:以 MS为基本培养基 ,附加不同浓度的 IBA、NAA、KT和 BA进行正交试验 L8(4×24),研究酢浆草组织
培养 、快速繁殖和壮苗的技术。结果表明:(1)酢浆草叶片 、叶柄分化的最优培养基为 MS+IBA0.5 mg· L-1 +
NAA0.5 mg· L-1 +KT1.0mg· L-1 ,接种后 40 d芽诱导率可达 40%;(2)酢浆草试管苗快速增殖培养基为 MS+
IBA0.5 mg· L-1 +KT1.0 mg· L-1 +BA1.0 mg· L-1 , 28 d簇生苗新生叶可达 71.0片;(3)酢浆草试管苗壮苗培
养基为 MS+NAA0.5 mg· L-1 , 酢浆草试管苗的叶片最宽达到 2.20 cm, 叶柄最粗达到 1.57 mm, 叶柄最长达到
12.00 cm, 并有根状茎生成。
关键词:酢浆草;组培快繁;正交试验
　　中图分类号:Q943.1 文献标识码:A 文章编号:1672-352X(2006)02-0230-04
TissuecultureandmultiplicationofOxalistriangularis
WANGYu1 , RUANLong2 , WUTing-zhang1 , WUJin-hua3 , XIEJi-feng1 , WULin1 , WUFei1
(1.SchoolofLifeScience, AnhuiUniversity, Hefei230039;　　　　　　　　　　　　　　　　　　
2.AnhuiTobaccoInstitute, AnhuiAcademyofAgriculturalScience, Fengyang233100;
3.SchoolofLifeScienceandTechique, UniversityofScience＆TechnologyofHuazhong, Wuhan430074)
Abstract:Intheexperiment, MSmediumwasusedasbasicmedium, andorthogonaltestofdiferentIBA,
NAA, KTandBAlevelswasdesignedtostudytissueculture, multiplicationandstrengtheningtechniqueofOxalis
triangularis.Theresultshows:(1)TheoptimummediumisMS+IBA0.5mg· L-1 +NAA0.5 mg·L-1 +KT
1.0mg· L-1 forinduction, and40% isinducedafter40daysinoculation;(2)TheoptimummediumisMS+IBA
0.5mg·L-1 +BA1.0 mg·L-1 +KT1.0mg· L-1 formultiplication, andnewlybornleavesoffascicledseedling
canaddupto71.0after28 days;(3)TheoptimummediumforrejuvenationisMS+NAA0.5 mg· L-1 , Oxalis
leaveswidthinvitroreach2.20 cm, petiolethicknessreach1.57 mm, petiolelengthreach12.00 cm, meanwhile,
rootformstemsarealsoobserved.
Keywords:Oxalistriangularis;tissueculture;orthogonaltest
　　三角紫叶酢浆草 (Oxalistriangularis)是酢浆
草科多年生常绿草本 ,原产于热带美洲 ,是一种优良
的地被植物 ,叶丛生 ,具长柄 ,三小叶阔倒三角形 ,顶
端凹缺 ,紫红色;到了晚上叶片合拢 ,独具特色 。与
草坪相比 ,地被植物的应用与生产一直未受到足够
的重视 。酢浆草叶片颜色十分鲜艳 ,国外学者曾研
究过酢浆草叶片中花青素的提取及在食品中的应
用[ 1, 2] 。
酢浆草的繁殖 ,过去一般都采用切分块茎的方
法 ,使每块块茎都具有突起的芽或茎叶 ,带土扦插 ,
但这样的繁殖速度慢 ,远远不能满足市场的需要。
有关植物组织培养和快速繁殖的研究很多 [ 3, 4] , W L
① 收稿日期:2005-08-26
基金项目:安徽省科技攻关项目(03013003)资助。
作者简介:王钰(1957-), 女 ,教授。 E-mail:yuwang800@hotmail.com
DOI :10.13610/j.cnki.1672-352x.2006.02.021
Teng和 李 霖 等 人 曾 报 道 了 紫 叶 酢 浆 草
(OxalisviolaceaL.)的组织培养研究结果 [ 5, 6] 。对三
角紫叶酢浆草组培快繁的研究尚少见报道 ,为此 ,作
者对其组培快繁技术进行系统研究 ,具有一定的生
产和应用价值。
1　材料与方法
1.1　供试材料
三角紫叶酢浆草 (Oxalistriangularis)叶片和
叶柄 。
表 1　3因素的正交试验方案
Table1　Orthogonaltestofthreefactors
试验号
TestNo.
A/mg·L-1
1
B/mg·L-1
2
C/mg·L-1
3
4 5
1 1(0.0∶0.5) 1(0.0) 1(0.0) 1 1
2 1 2(1.0) 2(1.0) 2 2
3 2(0.5∶0.0) 1 1 2 2
4 2 2 2 1 1
5 3(0.5∶0.5) 1 2 1 2
6 3 2 1 2 1
7 4(1.0∶0.5) 1 2 2 1
8 4 2 1 1 2
1.2　试验方法
1.2.1　试验设计　试验按 3因素不等水平的正交
设计进行 ,采用 L8(4×24)混合表 , A因素为 IBA和
NAA的不同配比 ,设 4个水平为(0∶0.5)、(0.5∶0)、
(0.5∶0.5)、(1.0∶1.0);B因素为 KT的两个水平 0、
1.0mg· L-1和 C因素为 BA的两个水平 0、1.0 mg
· L-1。试验方案如表 1。
1.2.2　培养基的配制　以 MS为基本培养基 ,按以
上 8种处理进行配制 。每升培养基加琼脂粉 6.5 g,
蔗糖 25 g, pH值调至 5.8,采用常规灭菌 。
1.2.3　接种　研究酢浆草叶片 、叶柄分化试验的材
料 ,取盆栽紫叶酢浆草叶片与叶柄 ,流水洗净 ,用
70%酒精浸洗 30 s, 无菌水冲洗 1遍 ,再用 0.1%
HgCl2溶液浸泡 4min,无菌水冲洗 6 ～ 8次 ,将叶片
和叶柄切成小段后分别接种在 8种培养基上 ,每个
处理 10管 ,每管接种 1个外植体 。
研究酢浆草试管苗快速增殖及壮苗试验的材
料 ,取生长一致的酢浆草试管苗 ,剪去簇生苗叶片
(便于酢浆草试管苗快速增殖试验中新生叶的统
计),留下簇生苗基部 ,接种在 8种培养基上 ,每个
处理 10瓶 ,每瓶接种 1块材料(残留 10支左右叶柄
的簇生苗基部)。全部试验共做 3次重复 。
1.2.4　培养条件　将接种好的试管及培养瓶移入
培养室 ,培养室温度保持在 25℃左右 ,光强 3 000
lx,光照时间 14 h。
1.2.5　观察记录　统计叶片和叶柄在 8种培养基
上分化出苗的情况和出芽率;簇生苗接种后 28 d统
计试管苗生长情况。数据分析采用 SAS6.0软件。
2　结果与分析
2.1　不同因素处理对叶片 、叶柄生长与分化的影响
将叶片分别接种在 8种培养基上 ,在 1号和 8
号培养基上的叶片颜色渐褪去 , 25 d后 ,从叶片切
口边缘出现白色愈伤组织 , 35 d后开始由愈伤组织
中生出大量根 , 45 d后 8号培养基上长出小苗。在
2号培养基上的叶片只出现愈伤组织 。在 3号 、4号
培养基上的叶片无明显变化。在 5号 、6号 、7号培
养基上的叶片 5 d后颜色变浅 , 20 d开始出现愈伤
组织 , 40 d后开始出现小苗 。 40 d后叶片出芽率见
表 2, 6号出苗率最高为 40%。
表 2　不同因素对酢浆草叶片和叶柄分化出芽率的影响
Table2　Effectsofdiferentfactorsongerminationratesofleav-
esandpetioleofOxalistriangularis
试验号
No.
叶片出芽率 /%
Germinationrate
oftheleaves
叶柄出芽率 /%
Germinationrate
ofthepetiole
1 0 10
2 0 0
3 0 0
4 0 0
5 30 30
6 40 40
7 10 20
8 0 20
　　注:接种后 40d调查的出芽率。
Note:Thegerminationratesaretheresultsof40 daysafter
inoculation.
23133卷 2期 王　钰等　三角紫叶酢浆草组培快繁技术的研究
将叶柄切成小段后接种在 8种培养基上 ,在 1
号 、6号 、8号培养基上的叶柄 15 d后叶柄渐透明 ,
两端膨大 , 25 d后 ,以膨大处为中心 ,生出大量的
根 ,呈放射状分布 ,根的表面有白色绒毛覆盖 ,此白
色绒毛组织即为组培途径中伴随小苗形成过程出现
的愈伤组织 , 40 d后由放射状根部的中心长出小
苗 。在 5号 、7号培养基上的叶柄 20 d后两端长出
愈伤组织 , 40 d后由愈伤组织处长出小苗。在 2号
培养基上的叶柄两端只长出愈伤组织。在 3号 、4
号培养基上的叶柄无明显变化。 40 d后叶柄出芽
率见表 2, 6号出苗率最高为 40%。
由上述结果可见 , A因素中 IBA和 NAA的
(0.5∶0.5)浓度配比与 KT(1.0)配合使用 ,对叶片 、
叶柄诱导长苗的效果都较好 ,出芽率也较高 。
表 3　不同因素对酢浆草快繁各性状的影响
Table3　EfectsofdiferentfactorsonmultiplicationtraitsofOxalistriangularis
试验号
TestNo.
新生叶 /片
Newbornleaves
叶片宽 /cm
Widthofleaves
叶柄粗 /mm
Petiolethickness
叶柄长 /cm
Lengthofpetiole
根状茎 /个
Numberofstemfromroot
1 18.7 2.20 1.57 12.00 3.7
2 61.0 1.57 1.34 6.67 0.0
3 18.7 1.57 1.00 7.33 2.7
4 71.0 1.87 1.24 9.33 0.0
5 61.0 1.73 1.21 11.33 0.0
6 21.7 1.67 0.95 7.33 3.3
7 62.7 1.83 1.21 8.33 0.0
8 28.0 1.53 1.03 7.33 2.7
表 4　不同因素对酢浆草快繁各性状的方差分析
Table4　VarianceanalysisofdiferentfactorsonmultiplicationtraitsofOxalistriangularis
因素
Factors
新生叶 /片
Newbornleaves
因素
Factors
叶片宽 /cm
Widthofleaves
因素
Factors
叶柄粗 /mm
Petiolethickness
因素
Factors
叶柄长 /cm
Lengthofpetiole
A 2 44.8a A 1 1.88a A 1 1.45a A 1 9.33a
　 4 44.3a 　 2 1.72a 　 2 1.12b 　 3 9.33a
　 3 41.4b 　 3 1.70a 　 4 1.12b 　 2 8.33b
　 1 39.8b 　 4 1.68a 　 3 1.08b 　 4 7.83b
B 2 45.4a B 1 1.83a B 1 1.25a B 1 9.75a
　 1 40.3b 　 2 1.66b 　 2 1.14b 　 2 7.67b
C 2 63.8a C 2 1.75a C 2 1.25a C 2 8.92a
　 1 21.8b 　 1 1.74a 　 1 1.14b 　 1 8.50a
　　注:同列数值中带不同上标的字母表示在 0.05水平上差异显著。
Note:Thevalueswithdiferentupperscriptinthesamecolumnindicatethereweresignificantdifferentbetweenthemat0.05levels.
2.2　不同因素对酢浆草快繁及壮苗各性状的影响
将剪去叶柄和叶片的簇生苗基部分别接种在 8
种培养基上 , 28 d后的培养结果(见表 3和表 4)表
明 ,不同因素不等水平的组合对酢浆草快繁各性状
的影响明显不同 。
2.2.1　新叶快速增殖　酢浆草试管苗繁殖速度取
决于新生叶的速度 , A因素的 2、4水平对新叶的快
速增殖明显高于 1、3水平 ,差异达到显著 , 2水平新
生叶平均 44.8片 ,最高为 71.0片;B因素的 2水平
对新叶的快速增殖明显高于 1水平 ,差异达到显著 ,
2水平新生叶平均 45.4片 ,最高为 71.0片;C因素
的 2水平对新叶的快速增殖明显高于 1水平 ,差异
达到显著水平 , 2水平新生叶平均 63.8片 ,最高为
71.0片。
2.2.2　壮苗培养　提高酢浆草试管苗移栽成活率 ,
壮苗培养是关键。
A因素的 4个水平对叶片增宽的培养差异不明
显;对叶柄增粗的培养 , 1水平明显粗于 2、3、4水
平 ,差异达到显著 , 1水平叶柄平均粗 1.45 mm,最
粗达到 1.57 mm;对叶柄增长的培养 , 1、2水平明显
长于 3、4水平 ,差异达到显著 , 1、2水平叶柄平均长
9.33 cm,最长达到 12.00 cm。
232 安 徽 农 业 大 学 学 报 2006年
B因素的两水平对叶片宽的培养差异明显 , 1
水平明显宽于 2水平 ,差异达到显著 , 1水平叶片平
均宽 1.83 cm,最宽达到 2.20 cm;对叶柄粗的培养 ,
1水平明显粗于 2水平 ,差异达到显著 , 1水平叶柄
平均粗 1.25mm,最粗达到 1.57mm;对叶柄长的培
养 , 1水平明显长于 2水平 ,差异达到显著 , 1水平叶
柄平均长 9.75 cm,最长达到 12.00cm。
C因素的两水平对叶片宽的培养差异不明显;
对叶柄粗的培养 , 2水平明显粗于 1水平 ,差异达到
显著 , 2水平叶柄平均粗 1.25 mm, 最粗达到 1.34
mm;对叶柄长的培养差异不明显。
IBA、NAA单独使用可培养出根状茎 , IBA、NAA
和 KT(1.0)配合使用也可培养出根状茎 ,但和 BA
(1.0)配合使用后无根状茎形成。
3　小结与讨论
各因素不同水平的组合中 A3B2C1对酢浆草叶
片 、叶柄的分化效果最好 ,即 IBA0.5mg·L-1 、NAA
0.5mg· L-1和 KT1.0 mg· L-1这个组合为酢浆草
叶片 、叶柄分化的最优组合 ,接种后 40 d芽诱导率
可达 40%。
各因素不同水平的组合中 A2B2C2对酢浆草试
管苗快速增殖培养效果最佳 ,即 IBA0.5 mg· L-1 、
KT1.0mg· L-1和 BA1.0 mg· L-1这个组合为酢
浆草试管苗快速增殖的最优组合 , 28d新生叶最高
可达 71.0片 。
各因素不同水平的组合中 A1B1C1对酢浆草试
管苗壮苗培养效果最佳 ,即采用 NAA0.5 mg· L-1
这个组合为酢浆草试管苗壮苗培养的最优组合 ,酢
浆草试管苗的叶片最宽达到 2.20 cm,叶柄最粗达
到 1.57mm、叶柄最长达到 12.00 cm,并有根状茎生
成 。带有根状茎的试管苗移栽成活率 100%。
本试验以酢浆草的叶片 、叶柄及酢浆草的试管
苗为供试材料 ,采用的 L8(4×24)正交试验研究其
组织培养 、快速繁殖和壮苗的技术 ,结果较好 ,选择
出适宜酢浆草叶片 、叶柄分化培养基 ,快速增殖培养
基 ,以及壮苗培养基 。根据前人研究结果 [ 1] ,试验
中只选取了对酢浆草组织培养中影响较大的 IBA、
NAA、KT和 BA4个因素 , 以及几个经验的水
平[ 2, 3] ,是否还有更适宜的培养基有待进一步试验。
本试验所用试管苗接种材料为 6号培养基中培
养的酢浆草试管苗 ,剪去簇生苗叶柄及叶片是为了
调查的方便 ,是否对试验结果有影响以及其它培养
基中培养的试管苗是否具有同样结果 ,有待于进一
步试验。
参考文献:
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23333卷 2期 王　钰等　三角紫叶酢浆草组培快繁技术的研究