全 文 ：药 物 研 究
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作者简介:王亦敏 (1971-), 留日硕士 , 药学专业 , 研究方向:天然药物研究及保健食品研发。 E-mail:lfzhan123@163.com。
明日叶中查耳酮的分离纯化工艺研究
王亦敏
海南蓝地高新科技有限公司 , 海南　海口　570216
【摘　要】　目的:建立明日叶中查耳酮分离纯化的最佳工艺。方法:采用 L9 (34)正交方法设计大孔树脂提取纯化工艺 , 以 4-羟
基德里辛含量为评价指标 , 考察大孔吸附树脂类型 、 洗脱剂种类 、 树脂粒径及流速对结果的影响。结果:采用 AB-8型号大孔树脂 , 蒸馏
水为洗脱剂 , 大孔树脂粒径为 30目 , 洗脱流速为 15ml/min, 即为所要选用的最佳工艺。结论:该工艺为明日叶中查耳酮的最佳提取工艺。
【关键词】　明日叶;查耳酮; 4-羟基德里辛 (4HD);黄腐酚 (XA);正交设计;提取工艺
【中图分类号】R284.2　　　 【文献标识码】A　　　　 【文章编号】 1007-8517 (2011) 01-0053-02
StudyingOnChalconesSeparationAndPurificationProcessOfInAngelicaKeiskeiKoidzumi
WangYiMin
(HainanLandHigh-TechCo., Ltd.HainanHaikou570216)
Abstract:Objective:EstablishmentofchalconesInAngelicaKeiskeiKoidzumitheoptimumseparationandpurification.Meth-
ods:L9 (34)macroporousresindesignedorthogonalextractionandpurificationof4-hydroxyderrcincontentevaluation, studymacro-
porousresintype, eluenttype, resinparticlesizeandflowrateontheresultsofit.Results:TypeAB-8 macroporousresin, distiled
wateraseluent, macroporousresinparticlesizeof30mesh, elutionflowratewas15ml/min, isthebestprocesstobeselected.Con-
clusion:TheprocessforchalconeInAngelicaKeiskeiKoidzumithebestextraction.
Keywords:AngelicaKeiskeiKoidzumi;Chalcones;4-hydroxyderrcin;Xanthoangelol;ExtractionProcess.
　　明日叶中主要成分为查尔酮类和香豆素类化合物 , 其
中以查尔酮类黄色素化合物的含量最高 [ 1] 。明日叶中黄色
素是明日叶中多种水溶性有效成分的混合物 , 属查尔酮类
有效部位群。进一步研究发现 , 明日叶黄色素包括:4-
hydroxyderrcin、 黄腐酚 (xanthoangelol)等查尔酮类组分 ,
此类查尔酮化合物易溶于水 、 稀醇等极性溶剂 , 不溶于无
水乙醇 、 丙酮 、 乙醚和石油醚。 本文针对明日叶中查尔酮
的提取纯化工艺进行研究 , 考察影响明日叶中查尔酮的提
取因素 , 并运用正交设计优化提取条件。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪 (日本岛津)LC-10ATVP、 SPD-
10AVP工作站:N2010色谱工作站 (浙江大学智能信息
工程研究所), 紫外 -可见分光光度计 (UV2265FW, 日
本岛津公司);微型植物试样粉碎机 (FZ102型);电子分
析天平 (梅特勒 -托利多仪器 (上海)有限公司);80-
2型离心机 (上海浦东物理光学仪器厂);pHS-3C型精
密 pH计 , 上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂生产;
黄腐醇对照品 (中国生物制品检定所);明日叶 (采自日
本八丈岛);甲醇为色谱纯 , 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　实验设计
2.1.1　查耳酮提取纯化工艺路线 [ 2, 3]
查耳酮属于黄酮类化合物 , 可以溶解于醇类溶剂中 ,
为了进一步优化明日叶中查耳酮的提取纯化工艺 , 设计采
用大孔吸附树脂对明日叶中 4 -HD的提取纯化工艺进行筛
选 , 考察树脂类型 、 树脂粒径大小 、 洗脱剂以及流速 , 评
价指标为总查尔酮及 4 -HD含量 , 具体实验设计见表 1、
表 2、 表 3。
根据正交结果表和方差分析表可以得知:以 4-HD含
量为评价指标时 , 由极值 R显示 , 各因素作用主次为 A>B
>D>C, 以因素 C为误差所在列 , 进行方差分析 , 结果显
示:A、 B、 D因素对结果的影响有显著性 (P<0.05), C
因素对结果无显著性影响;因此我们确定提取工艺组合以
A1B1D3C2为佳 , 即采用 AB-8型号大孔树脂 , 蒸馏水为洗
脱剂 , 大孔树脂粒径为 30目 , 洗脱流速为 15ml/min, 即是
我们所要选用的最佳工艺。
表 1　查耳酮分离纯化工艺条件筛选 L9 (34)正交设计表
水平
因素
A大孔树脂
类型
B洗脱剂
种类
C流速
(ml/min)
D粒径
大小 (目)
1 AB-8 蒸馏水 10 50
2 D-201 20%乙醇 15 40
3 DM-301 95%乙醇 20 30
表 2　正交结果表
实验号 因素A B C D
评价指标
4-HD(%)
1 1 1 1 1 26.28
2 1 2 2 2 18.07
3 1 3 3 3 23.8
4 2 1 2 3 29.08
5 2 2 3 1 12.94
6 2 3 1 2 10.58
7 3 1 3 2 13.79
8 3 2 1 3 11.39
9 3 3 2 1 5.01
4-HD
(%)
K1 22.717 23.050 16.083 14.743
K2 17.533 14.133 17.387 14.147
K3 10.063 13.130 16.843 21.423
RA=12.654
RB=9.920
RC= 1.304
RD= 7.276
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表 3　方差分析结果表 (4-HD(%))
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 P值
A 285.021 2 324.625 99.000 <0.01
B 202.767 2 230.942 99.000 <0.01
C 0.878 2 1.000 99.000
D 112.095 2 127.671 99.000 <0.01
误差 0.88 2
　　注:检验水准 α=0.05时:F0.05 =19.000;α=0.01时:
F0.01=99.000
2.2　实验结果
本研究工艺中 4-HD的最佳提取工艺为采用 AB-8型
号大孔树脂 , 蒸馏水为洗脱剂 , 大孔树脂粒径为 30目 , 洗
脱流速为 15ml/min, 其得到的 4-HD含量相对较高。
2.3　4-HD方法学考察 [ 4]
2.3.1　色谱条件　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;色
谱柱:迪马 C18 (20μm, 4.6mm×250mm);柱温: 30℃;
甲醇 ～ 0.1%磷酸溶液 (23:77)为流动相;检测波长为
258nm;理论塔板数按 4-HD峰计算不低于 8000。
2.3.2　对照品溶液的制备　精密称取 4-HD对照品适量 ,
加甲醇制成每 1ml含 0.1mg的溶液 , 即得。
2.3.3　供试品溶液的制备　取本品约 10mg, 精密称定 ,
加 40%甲醇 50ml, 称重 , 超声提取 30min, 放冷 , 补重 ,
滤过 , 取续滤液 , 即得。
2.3.4　标准曲线制备　分别量取上述对照品溶液 1、 2、 3、
4、 5ml, 置 10ml量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀备用 ,
在上述色谱条件下 , 分别进样 20μl, 记录色谱图 , 以峰面
积对进样量进行回归 , 求得回归方程为:Y=90650X+
27.034, r=0.99969, 其线性范围为 0.621～ 1.628g。
2.3.5　精密度实验　取 4-HD对照品溶液 20μl, 连续进
样 5次 , 分别测定其峰面积 , RSD为 0.87%, 结果表明仪
器精密度符合要求。
2.3.6　稳定性实验　取供试品溶液 , 分别在 0、 4、 8、 12、
24h进样 , 进行了 24h考察 , 峰面积的 RSD为 0.45%, 表
明供试品溶液在 24h内稳定。
2.3.7　重复性实验　取同一批供试品 , 精密称取约 10mg,
共 6份 , 按供试品溶液制备方法制备 , 测定峰面积 , 结果
表明重复性良好。
2.3.8　加样回收实验　精密称取已知含量的同一供试品约
10mg, 分别精密加入一定量的 4-HD对照品溶液 , 按供试
品溶液制备方法制备 , 进样 20μl, 记录色谱图 , 计算回收
率。结果平均回收率为 99.82%, RSD为 0.19%。
3　讨论
在本实验研究中 , 由于查耳酮属于黄酮类中的一种 ,
但其药理作用独特 , 抗肿瘤等作用突出 , 国内基本无天然
药用植物中查耳酮的提取方法研究。所以采用乙醇可对明
日叶中的查耳酮进行有效提取 , 优点在于存在植物体内的
查耳酮酶在提取时会分解查耳酮 , 使其变为游离态 , 降低
了其水溶性 , 采用乙醇能降低其内酶的活性 , 从而使查耳
酮尽可能的提取完全 , 提高提取率。
参考文献
[ 1] AkihisaT., TokudaH., UkiyaM., IizukaM., SchneiderS., Ogasawara
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医院学报 , 2005, 12 (3):181-184.
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国食品添加剂 , 2007, 01 (04):176-180.
[ 4] PoulakiV., MitsiadesN., RomeroM.E., TsokosM., CancerRes.,
61, 4864-4872(2001).
(收稿日期:2010.11.01)
(上接第 52页)
　　与 4℃比较 , 25℃温度时 10% GS配伍的甘草酸二铵注
射液的浓度显著升高 , 但 37℃温度时 10% GS配伍的甘草
酸二铵注射液的浓度显著下降;37℃比较 25℃温度时 10%
GS配伍的甘草酸二铵注射液的浓度显著下降。
4　讨论
甘草酸二铵注射液临床常与大输液配伍后静脉滴注使
用 , 其稳定性值得探讨 , 且紫外分光光度法测定结果准确
可靠 , 方法简便。
本实验选择常温 24h内对 3种配伍液进行紫外扫描。
在 6h内 , 甘草酸二铵注射液的吸收位置无变化 , 说明甘草
酸二铵在 3种输液中未发生反应。此结果显示 , 在室温时 ,
3种配伍溶液在 6h内的外观 、 性状无明显变化 , 表明其稳
定性较好 , 临床应用甘草酸二铵注射液时 3种常用输液均
可选用 , 但 24h5% GS及 0.9% NS配伍液含量明显降低 ,
不宜选用 , 故甘草酸二铵注射液配伍后不宜长时间存放。
针对温度对配伍输液的影响 , 本实验选择 4℃、 25℃±
1℃及 37℃ 3个温度 , 用 10% GS配伍液进行紫外扫描 , 在
6h内 , 4℃及 25℃配伍的甘草酸二铵的吸收位置无变化 ,
说明此温度下甘草酸二铵未发生反应 , 但 37℃配伍的甘草
酸二铵的吸收度随时间变化而降低 , 且色泽加深 , 24h有少
量絮状沉淀 , 表明甘草酸二铵含量显著下降 , 在 37℃甘草
酸二铵稳定性较差。
临床使用甘草酸二铵注射液时可与 5% GS、 0.9% NS
及 10% GS配伍 , 配伍液尽可能在 6h内用完 , 在炎热的夏
季 , 甘草酸二铵注射液要随用随配 , 避免长时间放置 , 以
取得较好的疗效 , 避免不良反应的发生。
参考文献
[ 1] 刘传道 , 张秀华.提高甘利欣治疗慢性乙型肝炎远期疗效探讨.实用肝
脏病杂志 , 1998, 3(3):169.
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床 , 2006, 9 (4):213 ～ 215.
(收稿日期:2010.11.04)
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