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刺山柑提取物的体外抗脂质过氧化作用



全 文 :刺山柑提取物的体外抗脂质过氧化作用
田 卉1,周海洋1,刘 梅2
(1新疆特种植物药资源重点实验室·石河子大学药学院,石河子 832002;2石河子大学医学院,石河子 832002)
摘 要 目的:研究刺山柑提取物对正常小鼠脂质过氧化的影响。方法:小鼠肝匀浆与刺山柑提取物共浴后,以自发产生脂
质过氧化或者分别以自由基诱导剂 CCl4、H2O2 和铁离子-抗坏血酸(Fe
2 + -VitC)激发脂质过氧化作用,以 MDA产生量作为脂质过氧
化作用指标。结果:刺山柑提取物 0. 1 mg /ml组可明显降低小鼠肝组织自发性 MDA的生成,减轻 Fe2 + -VitC诱导所致的肝脏脂质
过氧化反应;刺山柑提取物 0. 5 mg /ml组可减轻 CCl4、H2O2 诱导所致的肝脏脂质过氧化反应。结论 :刺山柑提取物具有良好的抗
脂质过氧化作用。
关键词 刺山柑;脂质过氧化;丙二醛
维药刺山柑果为白花菜科植物刺山柑(Capparis spinosa L)
的果实,维医用于治疗风湿病,有祛风、散寒、除湿和镇痛的作
用[1 ~ 4],是荒漠、半荒漠、干旱、半干旱地区极有栽培价值的灌
木。通过文献查阅未见其抗氧化方面的研究报道。本研究拟采
用体外抗氧化实验法,观察刺山柑提取物对小鼠肝自发性脂质
过氧化及分别由 CCl4、H2O2、Fe
2 + -VitC 诱导小鼠肝脏脂质过氧
化损伤的保护作用[3],对刺山柑功效的作用机理进行初步的探
讨。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 刺山柑果为新疆石河子地区产,经本院生药
学教授王琪鉴定为白花菜科植物 Capparis spinosa L的果实。采
摘阴干后粉碎,按 1:10 95% 乙醇浸泡过夜,超声提取频率
40Hz,常温提取 1h,过滤后滤渣按 1:10 加入 95%乙醇,同条件
提取 30min,过滤,重复一次,过滤。合并三次滤液,静置一夜,
3000rpm离心 5min,浓缩至 1g /ml,放入冰箱备用。
1. 2 动物 昆明种雄性小白鼠,体重 18 ~ 22g,由石河子大学
实验动物中心提供。
1. 3 试剂 四乙氧基丙烷(1,1,3,3-tetraethoxy -propane)为南
京建成生物工程研究所产品;其余为国产分析纯试剂如:硫代
巴比妥酸,三氯醋酸,自由基诱导剂 CCl4、H2O2 和铁离子-抗坏
血酸(Fe2 + -Vit C)等。
1. 4 仪器 Model-680 酶标仪;超低温冰箱:美国 HARRIS 公
司生产;MA-110 型万分之一天平:上海第二天平仪器厂生产。
1. 5 方法[5]
1. 5. 1 对小鼠肝自发性脂质过氧化的影响 小鼠禁食 12 h后
处死,取肝,在 0 ~ 4 ℃下用生理盐水制成 5%肝匀浆。实验分
为对照组(肝匀浆和蒸馏水)和 5 个剂量的刺山柑提取物组(肝
匀浆和刺山柑提取物)。先在各管中分别加入肝匀浆 1. 0 ml,
然后在 5 个剂量组中分别加入 0. 1 mg /ml、0. 5 mg /ml、1 mg /ml、
2 mg /ml和 4 mg /ml提取物 0. 1 ml,对照组加入蒸馏水 0. 1 ml。
将各组 37℃水浴反应 60min(震荡) ,取出,将试管流水冷却,向
各试管加入 20%三氯醋酸(TCA)1ml,0. 67%硫代巴比妥酸
(TBA)1ml,混匀,沸水浴 15min(震荡)取出,流水冷却。然后
3000r /min离心,取上清在 532nm处测吸收值,并计算抑制率。
抑制率(IR)=(对照组 MDA -提取物组 MDA)/对照组 MDA
1. 5. 2 对 CCl4 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响 同法制备 5%
肝匀浆。实验分为对照组(肝匀浆、蒸馏水和 CCl4)和 5 个剂量
的刺山柑提取物组(各剂量的刺山柑提取物、肝匀浆和 CCl4)。
先在各管中分别加入肝匀浆 1. 0 ml,然后在 5 个剂量组中分别
加入 0. 1 mg /ml、0. 5 mg /ml、1 mg /ml、2 mg /ml 和 4 mg /ml 提取
物 0. 1 ml,对照组加入蒸馏水 0. 1 ml。各组在 37℃水浴振荡反
应 30min。取出,流水冷却,向各管中加入 CCl4 20μl,继续温浴
反应 30min,取出。以下步骤同实验 1. 5. 1,在 532nm 处测吸收
值。
1. 5. 3 对 H2O2 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响 同法制备 5%
肝匀浆。实验分为对照组(肝匀浆、蒸馏水和 H2H2)和 5 个剂
量的刺山柑提取物组(各剂量的刺山柑提取物、肝匀浆和
H2O2)。先在各管中加入 5%肝匀浆 1. 0 ml,5 个剂量的提取物
组中分别加入 0. 1 mg /ml、0. 5 mg /ml、1 mg /ml、2 mg /ml 和 4
mg /ml提取物 0. 1 ml,对照组加入同体积蒸馏水。各组 37℃水
浴振荡反应 30min,取出,流水冷却,向各管中加入 1% H2O2 0.
1ml,继续温浴反应 30min 取出。以下步骤同实验 1. 5. 1,最后
在 532nm处测吸收值。
1. 5. 4 对 Fe2 + -Vit C诱导小鼠肝脂质过氧化的影响 同法制
备 5%肝匀浆。实验分为对照组(肝匀浆、蒸馏水、FeSO4·
7H2O和 Vit C)和 5 个剂量的刺山柑提取物组(各剂量的刺山柑
提取物、肝匀浆、FeSO4·7H2O和 Vit C)。先在各管中加入 5%
肝匀浆 1. 0 ml,5 个剂量组中分别加入 0. 1 mg /ml、0. 5 mg /ml、1
mg /ml、2 mg /ml和 4mg /ml刺山柑提取物 0. 1ml,对照组加入 0.
1ml蒸馏水。再向各管加入 50μl 抗坏血酸和 50μl FeSO4·
7H2O (终浓度分别为 1mmol /L 和 1mmol /L)。各组 37℃水浴
振荡反应 60 min,取出。以下步骤同实验 1. 5. 1,在 532nm处测
吸收值。
2 结果
2. 1 刺山柑提取物对肝自发性脂质过氧化的影响 由表 1 可
见,刺山柑提取物对小鼠肝脏自发性脂质过氧化产物 MDA 的
生成有抑制作用,提取物 0. 1 mg /ml、0. 5 mg /ml、1mg /ml组与对
照组比较具有明显显著性差异,随剂量的增大,从提取物 2 mg /
ml组开始与对照组比较有显著性差异,且随提取物含量增加抑
制率呈降低趋势。
96中药药理与临床 2011;27(6)
表 1 刺山柑提取物对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化的影响(珋x ± s)
组别 剂量(mg /ml) MDA (nmol /g) 抑制率 (%)
对照 1. 01 ± 0. 04
刺山柑提取物 0. 1 0. 75 ± 0. 06** 25. 7
刺山柑提取物 0. 5 0. 76 ± 0. 03** 24. 7
刺山柑提取物 1 0. 78 ± 0. 03** 22. 8
刺山柑提取物 2 0. 89 ± 0. 06* 11. 9
刺山柑提取物 4 0. 91 ± 0. 07* 9. 9
与对照组比较 * P < 0. 05,** P < 0. 01(下同)
2. 2 刺山柑提取物对 CCl4 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响
由表 2 可见,不同剂量组的刺山柑提取物对 CCl4 诱导小鼠肝脂
质过氧化 MDA 的含量均低于对照组,提取物 0. 1 mg /ml、0.
5mg /ml、1 mg /ml组与对照组比较具有明显显著性差异,提取物
2 mg /ml1 组,提取物 4mg /ml组有显著性差异,并且从提取物 0.
5mg /ml组开始随着剂量的增大抑制率呈降低趋势。
表 2 刺山柑提取物对 CCl4 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响(珋x ± s)
组别 剂量(mg /ml) MDA (nmol /g) 抑制率(%)
对照 1. 08 ± 0. 05
刺山柑提取物 0. 1 0. 86 ± 0. 04** 20. 4
刺山柑提取物 0. 5 0. 75 ± 0. 03** 30. 6
刺山柑提取物 1 0. 78 ± 0. 04** 27. 8
刺山柑提取物 2 0. 82 ± 0. 05** 24. 1
刺山柑提取物 4 0. 93 ± 0. 02* 13. 9
2. 3 刺山柑提取物对 H2O2 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响 由
表 3可见,刺山柑提取物对 H2O2 诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化
物 MDA的生成有明显的抑制作用,提取物各组与对照组比较就
具有显著性差异,且随提取物含量增加抑制率呈降低趋势。
表 3 刺山柑提取物对 H2O2 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响(珋x ± s)
组别 剂量(mg /ml) MDA (nmol /g) 抑制率 (%)
对照 1. 14 ± 0. 02
刺山柑提取物 0. 1 0. 74 ± 0. 01** 35. 1
刺山柑提取物 0. 5 0. 73 ± 0. 03** 36. 0
刺山柑提取物 1 0. 80 ± 0. 03** 29. 8
刺山柑提取物 2 0. 87 ± 0. 03** 23. 7
刺山柑提取物 4 0. 89 ± 0. 04** 21. 9
2. 4 刺山柑提取物对 Fe2 + -Vit C 诱导小鼠肝脂质过氧化的影
响 由表 4可见,刺山柑提取物对 Fe2 + -Vit C诱导小鼠肝脂质过
氧化的影响 MDA含量明显低于对照组,随剂量的增大,从提取物
0. 1 mg /ml组开始与对照组比较有极显著性差异,表明刺山柑提
取物对 Fe2 + -Vit C诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化产物 MDA的生
成有抑制作用,且随提取物含量增加抑制率呈降低趋势。
表 4 刺山柑提取物对 Fe2 + -Vit C 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响
(珋x ± s)
组别 剂量(mg /ml) MDA (nmol /g) 抑制率 (%)
对照 1. 16 ± 0. 01
刺山柑提取物 0. 1 0. 89 ± 0. 05** 23. 3
刺山柑提取物 0. 5 0. 99 ± 0. 03** 14. 7
刺山柑提取物 1 1. 02 ± 0. 04** 12. 1
刺山柑提取物 2 1. 04 ± 0. 05** 10. 3
刺山柑提取物 4 1. 07 ± 0. 03** 7. 6
3 讨论
自由基过剩可诱发炎症、免疫失调、恶性肿瘤等多种疾病,
亦是机体衰老的机制之一。脂质过氧化是氧自由基损伤组织的
重要方式。LPO大部分由肝细胞产生,其分解也主要在肝脏。
MDA是 LPO的主要降解产物,其含量可反映脂质过氧化的程
度[6]。CCl4、H2O2 和 Fe
2 + -Vit C等自由基引发剂均可激发脂质
过氧化反应,明显增加 MDA的生成量。实验结果表明,刺山柑
提取物可明显降低小鼠肝自发性脂质过氧化产物 MDA 的生
成,并对 CCl4、H2O2 和 Fe
2 + -Vit C 等自由基引发剂诱导的肝脂
质过氧化具有明显的拮抗作用,证明刺山柑提取物具有良好的
抗氧化作用。且实验中发现大剂量时其抗氧化作用减弱,与其
使用中剂量增加毒性和刺激性增强相一致,其相关的机制有待
进一步深入的研究。
参考文献
1 江苏新医学院. 中药大辞典(上册). 上海人民出版社,第 1 版,
1977∶ 843
2 新疆维吾尔自治区卫生厅. 维吾尔药材标准 (上册). 新疆科技卫
生出版社,第 1 版,1993∶ 199
3 任解莉.老鼠瓜单味外用治疗肩周炎 121 例. 新疆中医药,2002;20
(4)∶ 13
4 罗俊,谢阳. 维药刺山柑果治疗痛风风湿病 15 例. 中国民族医药杂
志,1999;5(2)∶ 3
5 田卉,马建慧,张梅,等. 石榴皮的体外抗脂质过氧化作用. 中药药
理与临床,2009;25(6)∶ 69 ~ 70
6 赵保路. 氧自由基和天然抗氧化剂. 科学出版社,1999∶ 81 ~ 82
Anti-lipoperoxidation of Capparis spinosa extracts in vitro
Tian Hui1,Zhou Haiyang1,Liu Mei2
(1 Key Laboratory of Ministry of Education and Province for Medicinal Plants Resources of Xinjiang,/College of Pharmacy,
Shihezi University Shihezi 832000;2 College of Medicine,Shihezi University,Shihezi 832000)
Objective :To the anti-lipoperoxidation of Capparis spinosa extracts in vitro. Methods :Measure the level of the malondialdehyde
(MDA)generated in liver homogenates spontaneously or induced by CCl4,H2O2,Fe
2 + -Vc. Results :The Capparis spinosa extracts(0. 1
mg /ml)significantly inhibited the generation of MDA in rat live homogenates spontaneously formed and reduced the lever by Fe2 + -Vitc in-
duced liver lipid peroxidation ;The Capparis spinosa extracts(0. 5 mg /ml)reduced the lever by CCl4 and H2O2 induced liver lipid peroxida-
tion. Conclusion:The study indicated that the Capparis spinosa extracts is effective on the anti-lipid peroxidation.
Key word Capparis spinosa extract;lipoperoxidation;malondialdehyde
07 中药药理与临床 2011;27(6)