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漏芦水提取物抗脂质过氧化活性分析



全 文 :3 讨 论
本调查显示,煤矿工人的心理异常所占的比例较大。因
此,为减少煤矿事故的发生,对该人群采取必要的干预措施已
刻不容缓。从引起煤矿工人心理健康的主要因素分析须从 3
个方面对其进行心理干预。(1)做好煤矿工人的心理疏导,
构建和谐的邻里、朋友、家人关系。(2)继续改善矿工的劳动
条件,提高劳动保障水平。(3)培训职业技能和维权知识,进
行心理健康教育。通过各种心理健康讲座或训练、帮助矿工
提高自身的心理素质促进自我成长;进行安全心理教育,使其
重视安全生产,珍惜生命;平时对矿工的各种心理问题及心理
困惑进行疏导及调适,防止及减少各种心理疾病及精神疾病
的发生与发展;当矿难突然发生时,及时进行危机干预,帮助
矿工及其家属提高战胜灾难、走出阴影及重新生活的勇气;建
立矿工心理档案,定期对矿工进行心理辅导及随访。这些措
施有利于矿工的身心健康,也有利于矿业的安全生产及发展。
参考文献
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收稿日期:2010-11-20 (宋艳萍编辑 刘铁校对)
* 基金项目:吉林省科技发展计划项目(200705428) ;吉林省中医药
管理局科技项目(08SYS - 105)
作者单位:1. 延边妇幼保健医院儿科,吉林 延吉 133000;2. 延边
大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
作者简介:李勇(1972 -) ,男,朝鲜族,吉林延吉人,主治医师,博
士,研究方向:中药中有效成分药理学。
通讯作者:全吉淑,E-mail:quanjsl@ sina. com
【检验技术】
漏芦水提取物抗脂质过氧化活性分析*
李勇1,金明2,全吉淑2
摘 要:目的 研究祁州漏芦水提取物(RUWE)的抗脂质过氧化活性。方法 以铁还原法检测 RUWE的总抗氧
化能力,以硫代巴比妥酸(TBA)法测定 H2O2、Fe
2 +以及 Fe2 + H2O2 所致肝匀浆丙二醛(MDA)生成量。结果 RUWE
具有较强的总抗氧化能力,其总抗氧化能力随浓度增高而升高,回归方程为 y = 4. 475 9x + 7. 046 3,R2 = 0. 995 8;呈量效
关系。同时,RUWE可浓度依赖性地抑制肝组织脂质过氧化作用,其对 H2O2、Fe
2 +以及·OH诱导的肝匀浆体系脂质过
氧化作用的半数抑制浓度(IC50)分别为 0. 775,0. 886和 1. 99 mg /mL。结论 RUWE具有体外抗脂质过氧化活性。
关键词:祁州漏芦;抗氧化;脂质过氧化
中图分类号:Q 591 文献标志码:A 文章编号:1001-0580(2011)10-1338-02
Anti-lipid peroxidantive effect of Rhaponticum uniflorum water extract LI Yong,JIN Ming,QUAN Ji-shu. Department
of Pediatrics,Yanbian Maternity and Child Care Center,Jilin Province(Yanji 133000,China)
Abstract:Objective To study the anti-lipid peroxidative effect of Rhaponticum uniflorum water extract(RUWE).
Methods The total antioxidant activity was determined with ferric reducing method and the malonyldialdehyde(MDA)
content of H2O2,Fe
2 + or Fe2 + + H2O2-induced liver homogenate was detected with thiobarbituric acid(TBA)method. Re-
sults RUWE exerted a high general antioxidant capacity in a concentration-dependent manner with a regeression equation
of y = 4. 4759x + 7. 0463,R2 = 0. 9958,and concentration-dependently inhibited the lipid peroxidation of liver tissue induced
by H2O2,Fe
2 + and Fe2 + + H2O2 with the median inhibitive concentration(IC50)of 0. 775,0. 886,and 1. 99 mg /mL,respec-
tively. Conclusion RUWE has anti-lipid peroxidative effect in vitro.
Key words:Rhaponticum uniflorum;antioxidation;anti-lipid peroxidation
祁州漏芦为菊科植物 Rhaponticum uniflorum(L)DC. 的
根,主产于华北、东北和西北诸省。祁州漏芦是一味常用中
药,用于乳痈肿痛,痈疽发背,瘰疬疮毒,乳汁不通,湿痹拘
挛〔1〕。近年来文献报道,漏芦具有抗炎、抗疲劳及增强免疫
功能等作用,故广泛引起人们注视〔2〕。本研究探讨漏芦的体
外抗脂质过氧化作用,为开发抗氧化功能食品提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 总抗氧化能力(T - AOC)测试盒、丙二醛(MDA)
和蛋白质测试盒(南京建成生物工程研究所) ,其余为国产分
析纯。主要仪器有 HITACHI himac cp 100α 超速离心机(日
本日立公司)和 U - 2010 型紫外分光光度仪(日本岛津公
司)。
1. 2 方法
1. 2. 1 祁州漏芦水提取物(RUWE)制备 将 2 kg 祁州漏芦
切碎后加水煎煮 4 h,合并滤液,经减压蒸馏和干燥过程即得
RUWE干品 0. 19 kg,得率为 9. 5%。
1. 2. 2 实验动物及动物样品制备 家兔 12 只,4 月龄,体重
2. 0 ~ 2. 5 kg,雌雄不限(延边大学医学部动物科提供)。每次
8331 中国公共卫生 2011 年 10 月第 27 卷第 10 期 Chin J Public Health Oct 2011 Vol. 27 No. 10
随机处死 6 只家兔,迅速取肝,用冷生理盐水清洗后,冰浴中
以 0. 25 mol /L蔗糖制成 10%肝匀浆悬浮液,4 ℃保存备用。
1. 2. 3 总抗氧化能力的测定〔3〕 取 1 mL 肝匀浆悬浮液,加
不同浓度 RUWE溶液 0. 1 mL,混匀,37℃温育 10 min。按试
剂盒操作方法测定吸光度(A520nm) ,计算化学模拟体系中 T -
AOC单位数。每分钟每毫升样品溶液使反应体系的 A520nm
增加 0. 01 定义为 1 个 T - AOC单位(U)。
1. 2. 4 肝组织脂质过氧化的测定 取 1 mL 肝匀浆悬浮液,
加不同浓度 RUWE溶液 0. 1 mL,37 ℃孵育 10 min。按参考文
献〔4〕方法,分别加入 60 mmol /L H2O2 0. 1 mL或 6 mmol /L Fe-
SO4 0. 1 mL或 6 mmol /L FeSO4 0. 1 mL和 60 mmol /L H2O2 40
μL启动肝匀浆的脂质过氧化反应。37 ℃温浴 1 h 后,加入
15%三氯乙酸 1 mL终止反应。最后加 0. 67% 硫代巴比妥酸
(TBA)1 mL,煮沸 15 min,冷却后离心,测上清液在 532 nm
处的吸光度值 A532nm,计算 MDA生成量和抑制率(IR)。MDA
(nmol /mL)= A532 /ε /L × 1000;其中,ε = 155 mL /mol,L = 1
cm。IR(%)=(A模型 - A测定)∕(A模型 - A正常)× 100%。
1. 3 统计分析 用 SPSS 11. 0 统计软件进行方差分析,数据
以 珋x ± s表示。
2 结 果
2. 1 RUWE对肝匀浆总抗氧化能力的影响(图 1) 在化学
模拟体系中,3. 6 mg /mL RUWE的总抗氧化能力为 3. 78 U,是
等浓度维生素 C(VC)的 1. 1 倍,二者总抗氧化能力几乎相
等。在此基础上,本试验主要考察了 RUWE对肝匀浆总抗氧
化能力的影响。在供试浓度范围内,RUWE可明显提高肝匀
浆体系的总抗氧化能力(P < 0. 01) ,且肝匀浆总抗氧化能力
随 RUWE浓度升高而明显增高;呈一定的量效关系。RUWE
浓度 < 5 mg /mL时,回归方程为 y = 4. 475 9x + 7. 046 3,R2 =
0. 995 8;呈明显浓度依赖性。
图 1 RUWE对肝匀浆总抗氧化能力的影响
2. 2 RUWE对肝匀浆脂质过氧化的抑制作用(表 1) 分别
经 H2O2 诱导、Fe
2 +诱导和 Fe2 + + H2O2 联合诱导后,所有模
型组肝匀浆体系的 MDA 生成量均有增高,与正常对照组比
较,差异有统计学意义(P < 0. 01) ,说明 H2O2、Fe
2 +以及 Fe2 +
H2O2 联合产生的·OH 可促使肝匀浆体系中脂质发生过氧
化反应。而在所试浓度范围内,RUWE 明显抑制肝匀浆体系
MDA的生成(P < 0. 01) ,且抑制率随 RUWE 浓度的增加而增
高,呈明显的浓度依赖性。根据回归方程测得,RUWE 对
H2O2、Fe
2 +以及·OH 诱导的肝匀浆体系脂质过氧化作用的
半数抑制浓度(IC50)分别为 0. 775、0. 886 和 1. 99 mg /mL。
表 1 RUWE对 H2O2、Fe
2 +及 Fe2 + + H2O2 诱导的肝匀浆脂质过氧化作用的影响(n =6,珔x ± s)
组 别
浓度
(mg /mL)
H2O2 诱导
MDA(μmol /mL) IR(%)
Fe2 +诱导
MDA(μmol /mL) IR(%)
Fe2 + + H2O2 诱导
MDA(μmol /mL) IR(%)
正常组 1. 75 ± 0. 02 - 1. 70 ± 0. 15 - 1. 92 ± 0. 17 -
模型组 9. 66 ± 0. 06a - 3. 42 ± 0. 30a - 7. 89 ± 0. 68a -
RUWE组 0. 125 8. 75 ± 0. 09b 15. 0 - - - -
0. 25 8. 54 ± 0. 04b 17. 6 - - - -
0. 50 7. 68 ± 0. 11b 28. 3 2. 88 ± 0. 24b 31. 4 6. 85 ± 0. 58b 17. 4
1. 0 4. 53 ± 0. 21b 67. 7 2. 47 ± 0. 19b 55. 5 5. 70 ± 0. 47b 36. 8
2. 0 0. 60 ± 0. 01b 116. 9 1. 71 ± 0. 12b 99. 7 4. 50 ± 0. 36b 56. 7
5. 0 - - 1. 23 ± 0. 07b 127. 6 2. 96 ± 0. 22b 82. 7
10. 0 - - 0. 86 ± 0. 03b 149. 5 1. 15 ± 0. 06b 112. 9
注:与正常组比较,a P < 0. 01;与模型组比较,b P < 0. 01。
3 讨 论
本试验结果表明,RUWE具有的较强总抗氧化能力,同时
可明显抑制 H2O2、Fe
2 +以及·OH 所诱导的肝匀浆脂质过氧
化发生,且呈良好的剂量依赖性。其可能的作用机制之一为
RUWE通过捕捉脂质过氧化链式反应中产生的活性氧,减少
脂质过氧化反应链式反应,阻断或减缓脂质过氧化的进行。
RUWE对 H2O2 和 Fe
2 +所致肝匀浆脂质过氧化作用的半数抑
制浓度均 < 1 mg /mL,以肝匀浆体系中的终浓度来表示,即为
80 μg /mL。肝匀浆体系的 RUWE 达到 150 μg /mL 时,RUWE
可使 H2O2 和 Fe
2 + 所致肝脂质过氧化程度降至正常水平。
RUWE对·OH所致肝匀浆脂质过氧化作用的半数抑制浓度
约为 1. 7 mg /mL,以肝匀浆体系中的终浓度来表示,即为 140
μg /mL,较 H2O2 和 Fe
2 +所致模型稍高一些。漏芦体外具有
良好的抗脂质过氧化作用,本研究为漏芦的开发提供实验依
据。体外抗脂质过氧化的研究只能反映药物抗氧化作用的一
个侧面,不足以全面反映其体内抗氧化作用〔3〕。因此,应结
合其他体内外动物模型,进行较为全面的抗氧化作用评价。
参考文献
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收稿日期:2010-11-20 (宋艳萍编辑 刘铁校对)
9331中国公共卫生 2011 年 10 月第 27 卷第 10 期 Chin J Public Health Oct 2011 Vol. 27 No. 10