全 文 ：基于析因设计评价芫花－甘草反药组合对小鼠自发活
动的影响＊
陈夏娟１，余果１，宋宏绣１，王梦１，陈艳琰２，钱大玮２，段金廒２，徐立１＊
（１．南京中医药大学药物安全性评价中心，江苏 南京　２１００４６；２．江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏 南京　２１００４６）
摘要：目的　研究芫花与甘草配伍对小鼠自发活动的影响。方法　分别对芫花－甘草配比为１∶３．３的低、高２个剂量组，按芫
花和甘草两因素，采用２×２析因设计进行实验。于给药前及给药后１、３ｈ测定小鼠自发活动数，计算自发活动抑制率。结果
　给药后３ｈ，芫花－甘草反药组合低剂量组小鼠自发活动抑制率仅与相应的甘草组比较有统计学差异（Ｐ＜０．０５），且反药组合
对自发活动抑制率的影响无交互作用；芫花－甘草反药组合高剂量组小鼠自发活动抑制率与对照组及相应的单药组比较均有
统计学意义（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），且反药组合对增加小鼠自发活动抑制率有交互作用。结论　芫花－甘草配比在１∶３．３时，
一定剂量范围内，芫花与甘草反药组合对增加小鼠自发活动抑制率存在交互作用。
关键词：芫花；甘草；反药组合；配伍禁忌；毒性
中图号：Ｒ２８５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１２）－０２４９－０３
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｋｗａ　Ｆｌｏｓ　Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　Ｒａｄｉｘｅｔ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ｏｎ　Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｅ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｆａｃｔｏｒｉａｌ　Ｄｅ－
ｓｉｇｎ
ＣＨＥＮ　Ｘｉａ－ｊｕａｎ１，ＹＵ　Ｇｕｏ１，ＳＯＮＧ　Ｈｏｎｇ－ｘｉｕ１，ＷＡＮＧ　Ｍｅｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｙａｎ－ｙａｎ２，ＱＩＡＮ　Ｄａ－ｗｅｉ　２，ＤＵＡＮ　Ｊｉｎ－ａｏ２，ＸＵ　Ｌｉ　１＊
（１．ＧＬＰ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００４６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｈｉｇｈ　Ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ＴＣＭ　Ｆｏｒｍｕｌａｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００４６，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｋｗａ　Ｆｌｏｓ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　Ｒａｄｉｘｅｔ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ｏｎ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｍｉｃｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｆａｃｔｏｒｉａｌ　ｄｅｓｉｇｎ，ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｐｌａｎｎｅｄ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　Ｇｅｎｋｗａ　Ｆｌｏｓ
ａｎｄ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　Ｒａｄｉｘｅｔ　Ｒｈｉｚｏｍｅ　ｗａｓ　１∶３．３（ｌｏｗ　ｄｏｓａｇｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ｇｒｏｕｐ）．Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｍｅａｓ－
ｕｒｅｄ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　１ｈａｎｄ　３ｈ．Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｃｏｕｎｔｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ　ａｆｔｅｒ　３
ｈ，ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｌｏｗ　ｄｏｓａｇｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　Ｒｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ
Ｒａｄｉｘ　ｅｔ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ；ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｒ－
ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｒｕｇ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｅｘｉｓｔｓ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅｓ　ｒａｔｉｏ　ｉｓ　１
∶３．３ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｉｓ　ｉｎ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｒａｇｅ，ｔｈｅ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｃａｎ　ｂｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｅｘｉｓｔｓ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｇｅｎｋｗａ　Ｆｌｏｓ；Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ　Ｒａｄｉｘｅｔ　Ｒｈｉｚｏｍａ；ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｉｍｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｈｅｒｂｓ；ｉｍｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ；ｔｏｘｉｃ－
ｉｔｙ
　　中药“十八反”作为用药配伍禁忌由来已久，但
历代“十八反”同方配伍的方剂常用于治疗某些痼
疾、险症和急症［１］，且在现代临床应用中也仍能获良
效［２］。在实验研究方面，许多学者对反药组合的药
理、毒理及物质基础等方面进行了大量研究［３］，但一
直未形成统一的判断标准。因此，国家重点基础研
究发展计划将中药“十八反”配伍禁忌理论纳为重大
科学问题，以经典毒理学评价方法为主，结合快速筛
查体系及安全药理学评价方法，对中药“十八反”反
药组合致毒／增毒特点及毒性程度进行系统评价，科
学界定其“反”与“不反”，为进一步回答为什么反和
怎么反的科学内涵提供依据与指引，从而丰富和发
展中药配伍禁忌理论体系，为临床安全用药提供指
导。
本实验室在前期实验研究中发现，芫花－甘草配
比在１∶３．３时实验小鼠出现自发活动抑制现象，包
—９４２—
南京中医药大学学报２０１２年５月第２８卷第３期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦ　ＮＡＮＪＩＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＣＭ　Ｖｏｌ．２８　Ｎｏ．３　Ｍａｙ２０１２
收稿日期：２０１２－０１－０８；修稿日期：２０１２－０３－２０
基金项目：国家重点基础研究发展计划（“９７３”计划）（２０１１ＣＢ５０５３００，２０１１ＣＢ５０５３０３）
作者简介：陈夏娟（１９８７－），女，江苏南通人，南京中医药大学２００９级硕士研究生。＊通信作者：ｘｕｌｉｇｌｐ＠１２６．ｃｏｍ
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2012.03.020
括自发活动减少、行动迟缓、弓背、竖毛。设计此配
比下的２个给药剂量，采用２×２析因设计进行验证
实验，评价该反药组合对小鼠自发活动的影响，验证
其对小鼠自发活动的影响是否存在交互作用，为芫
花－甘草反药组合是否相反以及相反的毒性表征提
供一定的参考。
１　材料
１．１　动物
ＳＰＦ级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量１８～２２
ｇ，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。实验
动物合格证号：ＳＣＸＫ（沪）２００７－０００５。
１．２　试药
芫花产自安徽省六安市吴家店镇，甘草产自宁
夏灵武市美康甘草基地的野生甘草，由南京中医药
大学段金廒教授鉴定，分别为瑞香科植物芫花
Ｄａｐｈｎｅ　ｇｅｎｋｗａ　Ｓｉｅｄ．ｅｔ　Ｚｕｃｃ．的干燥花蕾和豆科
植物甘草Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ　Ｆｉｓｃｈ．的干燥根及
根茎。所有供试品均由南京中医药大学江苏省方剂
研究重点实验室自制。
甘草水提物：生药含量２．７２ｇ／ｍＬ，临用前分别
用无菌水稀释配制浓度为１００ｍＬ含３．９５ｇ、１００
ｍＬ含６２．８３ｇ的甘草低、高剂量组。芫花水提物：
生药含量３．４１ｇ／ｍＬ，临用前分别用无菌水稀释配
制浓度为１００ｍＬ含１．２０ｇ、１００ｍＬ含１８．９０ｇ的
芫花低、高剂量组。芫花－甘草１∶３．３水提液，含量
５．１５ｇ生药／１００ｍＬ、８１．７０ｇ生药／１００ｍＬ分别为
芫花－甘草反药组合低、高剂量组。苦味酸，２５ｇ／
瓶，批号：０９０４２２，汕头市西陇化工厂有限公司。
１．３　仪器
电子天平，型号：ＪＭ１２００１，浙江省纪铭称重校
验设备有限公司；多功能小鼠自主活动仪，型号
ＹＬＳ－１Ａ，山东省医学科学院设备站。
２　方法与结果
２．１　分组与给药
分别对芫花－甘草反药组合的２个剂量，采用２
因素２水平析因设计进行实验，两组共用１个对照
组（甘草０水平，芫花０水平）。实验时取７０只小
鼠，雌雄各半，分性别按照体质量随机分为７组，每
组１０只，分别为对照组、甘草低剂量组、芫花低剂量
组、反药组合低剂量组、甘草高剂量组、芫花高剂量
组、反药组合高剂量组。给药前禁食１２ｈ、不禁水，１
次灌服给药，对照组灌服无菌水，给药体积均为０．
０２ｍＬ／ｇ体质量。给药剂量见表１。
表１　各药组给药剂量表　　ｇ·ｋｇ－１
组别 芫花剂量 甘草剂量 总剂量
对照组 － － －
甘草低剂量组 － ０．７９　 ０．７９
芫花低剂量组 ０．２４ — ０．２４
反药组合低剂量组 ０．２４　 ０．７９　 １．０３
甘草高剂量组 — １２．５５　 １２．５５
芫花高剂量组 ３．７７ — ３．７７
反药组合高剂量组 ３．７７　 １２．５５　 １６．３２
２．２　检测指标
２．２．１　症状观察
观察给药后动物的一般行为表现、姿势、步态，
有无流涎、肌颤及瞳孔变化。
２．２．２　自发活动抑制率
给药当天在给药前将小鼠放入多功能小鼠自主
活动仪，记录５ｍｉｎ内小鼠活动计数作为给药前小
鼠自发活动数，并进行适当调整，使各组中小鼠自发
活动计数均匀分布。并于给药后１ｈ及３ｈ，测定５
ｍｉｎ内小鼠活动计数，作为给药后小鼠自发活动数。
计算每只小鼠自发活动抑制率。
２．３　数据统计处理
数据采用统计软件ＳＰＳＳ１５．０进行处理，用平
均值±标准差（珚ｘ±ｓ）表示，交互作用分析采用两因
素析因设计资料的方差分析，组间多重比较采用单
因素方差分析和秩和检验。
２．４　实验结果
２．４．１　症状观察
给药后，反药组合低、高剂量组中均有小鼠出现
精神萎靡、呼吸急促、腹式呼吸、弓背、行动迟缓的现
象，未观察到其它异常症状。其余组未见异常情况。
２．４．２　析因设计方差分析结果
给药后１ｈ，低剂量组中甘草对小鼠自发活动的
影响有统计学意义（Ｐ＜０．０５），芫花、芫花－甘草反
药组合对小鼠自发活动的影响均无统计学差异；高
剂量组中甘草、芫花、芫花－甘草反药组合对小鼠自
发活动的影响均无统计学差异。
给药后３ｈ，低剂量组中甘草和芫花对小鼠自发
活动的影响均有统计学意义（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），
但芫花－甘草反药组合对小鼠自发活动的影响无统
计学差异；高剂量组中甘草对小鼠自发活动的影响
有统计学意义（Ｐ＜０．０５），芫花对小鼠自发活动的
影响无统计学差异，芫花－甘草反药组合对小鼠自发
活动的影响有统计学意义（Ｐ ＜０．０５），且芫花和甘
草之间存在交互作用。结果见表２和图１。
—０５２— 南京中医药大学学报２０１２年５月第２８卷第３期
表２　小鼠自发活动抑制率的析因设计方差分析结果
验证组 变异来源
Ｆ值
１ｈ ３ｈ
Ｐ值
１ｈ ３ｈ
低剂量组 甘草 ４．４６０　５．２４８　 ０．０４４　０．０３０
芫花 ０．７７７　９．６６６　 ０．３８６　０．００４
甘草×芫花 ２．３１９　０．５９１　 ０．１３９　０．４４８
高剂量组 甘草 ０．０４４　４．５５１　 ０．８３５　０．０４２
芫花 １．９９２　３．６３４　 ０．１６９　０．０６７
甘草×芫花 ０．４４２　６．９５６　 ０．５１２　０．０１３＊
　　注：＊Ｐ＜０．０５表示有交互作用
图１　给药后３ｈ，高剂量组中甘草和芫花的交互效应轮廓图
２．４．３　对小鼠自发活动抑制率影响的比较
给药后１ｈ，芫花－甘草反药组合低、高剂量组小
鼠自发活动抑制率与对照组及相应的单药组比较均
无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。
给药后３ｈ，芫花－甘草反药组合低剂量组小鼠
自发活动抑制率与相应的甘草组比较有统计学差异
（Ｐ＜０．０５），与对照组及相应的芫花组相比无统计
学差异。芫花－甘草反药组合高剂量组小鼠自发活
动抑制率与对照组及相应的单药组比较均有差异
（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），对自发活动抑制率的大小顺
序芫花－甘草反药组合高剂量组＞甘草高剂量组＞
芫花高剂量组。结果见表３。
表３　各组对小鼠自发活动抑制率的影响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量／
（ｇ·ｋｇ－１）
自发活动抑制率／％
１ｈ ３ｈ
对照组 － ３１．８６±３９．１４　１１．６１±１９．２８
甘草低剂量组 ０．７９－１０．０４±３９．４１－１１．３６±２５．２２
芫花低剂量组 ０．２４　２４．４７±３２．９０　２９．１８±１９．３６
反药组合低剂量组 １．０３　１７．６８±９．２３　 １７．７５±２０．５２＃
甘草高剂量组 １２．５５　２２．８０±２８．８１　 ７．４４±２８．６５
芫花高剂量组 ３．７７　１０．３７±１８．３６　 ５．５５±１６．８３
反药组合高剂量组１６．３２　１５．０７±２７．０４　４５．０６±２６．８０＊＃△△
注：芫花－甘草反药组合与对照组比较，＊Ｐ＜０．０５；与相应甘草组比
较，＃Ｐ＜０．０５；与相应芫花组比较，△△Ｐ＜０．０１。
３　讨论
芫花对中枢神经系统有镇痛、镇静及抗惊厥的
作用，而甘草的糖皮质激素样作用对中枢神经系统
有兴奋作用。虽有实验观察到对中枢神经系统的影
响，但少有学者系统的对芫花－甘草反药组合进行中
枢神经系统的药理研究［４］。
本研究结果显示，芫花－甘草１∶３．３配比时，有
小鼠出现自发活动抑制现象，经过析因分析发现，给
药后３ｈ，芫花－甘草反药组合高剂量组对小鼠自发
活动的影响与芫花和甘草的交互作用有关，且小鼠
自发活动抑制率与对照组及相应的单药组比较均有
统计学差异。提示芫花－甘草两药在药典临床用量
高限量配比且剂量较高时，对增加小鼠自发活动抑
制率存在交互作用。芫花－甘草反药组合对小鼠自
发活动产生的抑制作用，是由于对中枢神经系统的
影响，还是对消化系统产生影响造成腹部不适所致，
尚需要进一步的实验研究证明。
参考文献：
［１］范欣生，尚尔鑫，陶静，等．“十八反”同方配伍探讨［Ｊ］．中医杂
志，２０１１，５２（１２）：９９１－９９４．
Ｆａｎ　ＸＳ，Ｓｈａｎｇ　ＥＸ，Ｔａｏ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｎ　ｆｏｒｍｕｌａｅ　ｏｆ　ｅｉｇｈｔｅｅｎ　ｉｎ－
ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｔｒａｄｉｔ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ，２０１１，５２（１２）：
９９１－９９４．
［２］杨明会，李绍旦，高月．从现代临床应用探析中药“十八反”［Ｊ］．
中华中医药杂志，２０１１，２６（１）：１２－１５．
Ｙａｎｇ　ＭＨ，ＬＩ　ＳＤ，Ｇａｏ　Ｙ．Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｅｉｇｈｔｅｅｎ　ｉｎ－
ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｈｅｒｂｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ
ｍｏｄｅｒｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｔｒａｄｉｔ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ　Ｐｈａｒｍ，
２０１１，２６（１）：１２－１５．
［３］宿树兰，段金廒，李文林．基于物质基础探讨中药“十八反”配伍
致毒／增毒机制［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１０，１６（１）：１２３－
１２９．
Ｓｕ　ＳＬ，Ｄｕａｎ　ＪＡ，Ｌｉ　ＷＬ．Ｏｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ／ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｐｏｉｓｏｎ　ｍｅｃｈ－
ａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｅｉｇｈｔｅｅｎ　ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍａｔｅｒｉａｌ
［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｔｒａｄｉｔ　Ｍｅｄ　Ｆｏｒｍ，２０１０，１６（１）：１２３－１２９．
［４］姚宪章．对反药甘草和芫花的动物实验及利用［Ｊ］．动物学杂志，
１９７７（２）：１２－１４．
Ｙａｏ　ＸＺ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｉｍａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｍｅ－
ｄｉｃａｍｅｎｔｓ　Ｒａｄｉｘ　Ｇｌｙｃｙｔｔｈｉｚａｅ　ａｎｄ　Ｆｌｏｓ　Ｇｅｎｋｗａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ
Ｚｏｏｌ，１９７７（２）：１２－１４．
（编辑：董宇）
—１５２—陈夏娟，等：基于析因设计评价芫花－甘草反药组合对小鼠自发活动的影响　第３期