全 文 ：HPLC法测定榆叶合叶子中绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素
王 艳， 张 芳， 姚 军， 张 行， 热 娜， 李新霞*
(新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)
收稿日期:2012-12-07
基金项目:新疆医科大学科研创新基金 (XJC201129)
作者简介:王 艳 (1980—) ，女，副教授，硕士，研究方向:新疆地方药用植物。Tel:18699180222，E-mail:wangyan _ 1060 @
163． com
* 通信作者:李新霞 (1968—) ，女，教授，博士，研究方向:药物分析。Tel:13999918215，E-mail:lxx6668@ 163． com
摘要:目的 用高效液相法同时测定榆叶合叶子中绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素的量。方法 使用 Agilent E-
clipse XDB-C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm，5μm) ;流动相 A为乙腈，B为1 000 mL水 + 55 mL乙腈 + 20 mL醋酸溶液，
梯度洗脱;体积流量为 1. 0 mL /min;检测波长 360 nm;柱温 35 ℃。结果 绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素分别
在 15. 54 ～ 155. 4 μg /mL (r = 0. 999 0) ，5. 18 ～ 51. 8 μg /mL (r = 0. 999 1) ，10. 22 ～ 102. 2 μg /mL (r = 0. 999 3) ，
9. 8 ～ 98 μg /mL (r = 0. 9993)范围内线性关系良好，平均回收率分别为 99. 84%、97. 18%、98. 73%、97. 73%。结
论 建立的方法简便易行，准确性、重复性好，可作为榆叶合叶子中 4 种黄酮成分的定量测定方法。
关键词:榆叶合叶子;绣线菊苷;金丝桃苷;芦丁;槲皮素
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)08-1714-04
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 08． 029
Simultaneous determination of spiraeoside，hyperoside，rutin and quercetin in
Filipendula ulmari by HPLC
WANG Yan， ZHANG Fang， YAO Jun ， ZHANG Hang， RENA， LI Xin-xia*
(Pharmacy College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
KEY WORDS:Filipendula ulmari;spiraeoside;hyperoside;rutin;quercetin
榆叶合叶子即旋果蚊子草，又名欧洲合叶子，
为蔷薇科蚊子草属植物榆叶合叶 Filipendula ulmari
的干燥带花地上部分。榆叶合叶子是新疆哈萨克族
民间常用药材，哈萨克族民间应用榆叶合叶子主治
高血压、高血脂引起的头痛、头晕、耳鸣［1］。现
代药理实验表明榆叶合叶子还具有抗炎、止血、抗
溃疡、抗凝血、抗肿瘤、伤口治疗、保肝、抗糖尿
病和健脑等作用［2-4］，其药理作用广泛且用药历史
悠久［5］，《欧洲药典》 (第 5 版)、《英国草药典》
(1996 年版)、《匈牙利药典》(第 8 版)均收载了
榆叶合叶子。
榆叶合叶子的主要成分包括水杨酸盐类、酚苷
类、酚酸类、黄酮类、鞣质类等［6-7］。黄酮类化合
物是榆叶合叶子的活性成分之一，Pemp 等［8］用
LC-MS法测定了榆叶合叶子中 7 种黄酮的量，Fec-
ka［9］用 HPLC法对榆叶合叶子中的多酚类、黄酮类
和鞣质类进行了定性和定量测定，但由于所检测的
成分较多，从图谱中和试验验证发现其定量测定中
黄酮类化合物的分离度达不到质量标准的要求，本
实验建立的 HPLC 法对榆叶合叶子中的 4 种主要的
黄酮类成分绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素同
时进行测定，结果表明该测定方法准确、灵敏、重
复性好，且 4 种黄酮类成分的分离度较好，以期为
榆叶合叶子质量标准的建立奠定基础。
1 仪器与试剂
日本岛津 LC-20AB高效液相色谱仪;SPD-20A
紫外检测器;Lcsolution色谱工作站。
绣线菊苷对照品 (ChromaDex，Inc．，批号
20229-56-5) ，金丝桃苷对照品 (上海源叶生物科
技有限公司，批号 MUST-11122003) ，芦丁对照品
(上海源叶生物科技有限公司，批号 20120226) ，
槲皮素对照品 (中国食品药品检定研究院，批号
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100081-2009907)。榆叶合叶子由新疆医科大学帕
力达教授采集并鉴定。乙腈为色谱纯，水为重蒸
水，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 贮备液的配制
2. 1. 1 对照品贮备液配制 精密称取对照品绣线
菊苷、金丝桃苷、槲皮素、芦丁适量，分别加甲醇
溶解并稀释，配制成质量浓度分别为 0. 518、
0. 518、0. 511、0. 490 mg /mL 的单一对照品溶液作
为贮备液备用。
2. 1. 2 供试品溶液制备 取榆叶合叶子药材粉末
约 0. 5 g，置具塞锥形瓶中，加入 70% 甲醇溶液
100 mL 超声 (功率 100W)提取 3 次，每次 20
min，室温放冷后，用 70%甲醇补足减失的体积，
滤过，即得，临用前摇匀，过 0. 45 μm的滤膜［9］。
2. 2 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈 (A)-
1 000 mL水 + 55 mL 乙腈 + 20 mL 醋酸溶液 (B) ，
梯度洗脱 (0 ～ 25 min，97% →83% B;25 ～ 45
min，83%→77% B;45 ～ 55 min，77%→10% B) ;
体积流量 1. 0 mL /min;紫外检测波长 360 nm;柱
温 35 ℃;进样量 10 μL。对照品及样品色谱图见
图 1。
1． 芦丁 2． 金丝桃苷 3． 绣线菊苷 4． 槲皮素
1． rutin 2． hyperoside 3． spiraeoside 4． quercetin
图 1 混合对照品 (A)和榆叶合叶子 (B)的液相色
谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances
(A)and Filipendula ulmari (B)
2. 3 线性关系考察 分别精密量取绣线菊苷对照
品贮备液 0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3 mL;金丝
桃苷对照品贮备液 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、
1mL;芦丁对照品贮备液 0. 2、0. 4、0. 8、1. 2、
1. 6、2 mL;槲皮素对照品贮备液 0. 2、0. 4、0. 8、
1. 2、1. 6、2 mL 置于 10 mL 量瓶中，以甲醇定容
至刻度并摇匀。分别取上述系列对照品混合溶液
10 μL进样，按 2. 2 项下色谱条件测定峰面积，以
对照品溶液浓度 X (μg /mL)为横坐标，峰面积 Y
为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，得绣线
菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素标准曲线回归方
程、相关系数以及线性范围分别为:绣线菊苷 Y =
7 694. 5X － 76 152， r = 0. 999 0;金丝桃苷 Y =
174 489X － 33 159，r = 0. 999 1;芦丁 Y = 7 018. 4
X － 22 297，r = 0. 999 3;槲皮素 Y = 10 406 X －
37 093，r = 0. 999 3。结果表明:绣线菊苷在
15. 54 ～ 155. 4 μg /mL 范围内;金丝桃苷在 5. 18 ～
51. 8 μg /mL 范围内;芦丁在 10. 22 ～ 102. 2 μg /mL
范围内;槲皮素在 9. 8 ～ 98 μg /mL 范围内呈良好
的线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，按 2. 2 项下色谱条件，连续进样 6 次，测定
色谱峰面积，绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素
的 RSD 分别为 1. 03%、1. 42%、1. 43%、1. 49%，
表明精密度良好。
2. 5 重复性试验 取同一批样品 (20120305)6
份，按 2. 1. 2 项下方法制备溶液，精密吸取 10 μL
进样分析，测定峰面积，计算绣线菊苷、金丝桃
苷、芦丁和槲皮素的平均质量分数，其 RSD 分别
为 1. 42%、1. 62%、1. 58%、1. 62%。
2. 6 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液
10 μL，在 0、2、4、8、12、24 h 进样分析，测定
峰面积，计算绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素
的 RSD分别为 1. 56%、1. 75%、1. 17%、1. 58%、
表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 7 回收率试验 取 6 份已知含有量的样品
(20120305)约 250 mg，精密称定，分别精密加入
绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素的标准溶液适
量，按 2. 1. 2 项下方法制备溶液，测定峰面积，计
算各成分的量和回收率，结果见表 1。
2. 8 样品测定 取榆叶合叶子药材 0. 5 g，按
2. 1. 2 项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供
试品溶液 10 μL，进样分析，测定峰面积，计算各
成分的量，结果见表 2。
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表 1 回收率测定结果 (n =6)
Tab. 1 Results of recovery tests (n =6)
成分
原有量 /
μg
加入量 /
μg
测得量 /
μg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
RSD /
%
绣线菊苷 572. 50 425. 6 998. 25 100. 04 99. 84 0. 73
574. 79 425. 6 998. 45 99. 55
574. 79 425. 6 996. 27 99. 03
574. 79 425. 6 1 001. 59 100. 28
583. 95 425. 6 1 013. 60 100. 95
577. 08 425. 6 999. 15 99. 17
金丝桃苷 72. 50 77. 7 148. 36 97. 63 97. 18 1. 29
72. 79 77. 7 149. 80 99. 11
72. 79 77. 7 147. 88 96. 64
72. 79 77. 7 148. 80 97. 82
73. 95 77. 7 148. 25 95. 62
73. 08 77. 7 147. 88 96. 27
芦丁 97. 50 102. 2 197. 38 97. 73 98. 73 1. 31
97. 89 102. 2 199. 91 99. 82
97. 89 102. 2 199. 57 99. 50
97. 89 102. 2 199. 89 99. 80
99. 45 102. 2 198. 22 96. 64
98. 28 102. 2 199. 32 98. 86
槲皮素 67. 50 73. 5 139. 71 98. 25 97. 73 1. 18
67. 77 73. 5 139. 69 97. 85
67. 77 73. 5 140. 71 99. 24
67. 77 73. 5 139. 86 98. 08
68. 85 73. 5 139. 30 95. 86
68. 04 73. 5 139. 40 97. 09
表 2 榆叶合叶子中绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素
的测定结果 (n =3)
Tab. 2 Results of content determination of spiraeoside，hy-
peroside，rutin and quercetin in Filipendula ulmari
(n =3)
样品
绣线菊苷 金丝桃苷
平均质量分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
平均质量分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
20120305 2. 29 1. 17 0. 29 0. 52
20120715 2. 08 0. 91 0. 26 1. 42
20120718 1. 21 1. 57 0. 17 1. 19
样品
芦丁 槲皮素
平均质量分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
平均质量分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
20120305 0. 39 1. 39 0. 27 1. 87
20120715 0. 37 1. 94 0. 25 1. 32
20120718 0. 20 1. 42 0. 18 0. 31
3 讨论
3. 1 本实验中曾采用了索氏提取法［10 － 11］和超声提
取法［12］两种提取方法，以绣线菊苷的量作为考察
指标，结果表明超声提取法提取效率高，且简便易
行。又以甲醇、30%、50%、70%的甲醇溶液作为
提取溶剂，超声提取，结果表明 70%的甲醇溶液
作为提取溶剂，提取效率较高，故选择 70%的甲
醇超声提取法作为样品提取方法。
3. 2 对 4 种黄酮类成分的对照品溶液进行紫外扫
描，绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素的最大吸
收波长分别在 360、363、359、370 nm 处，文献
［9］报道采用 280 nm 作为测定波长，因此本实验
选择了 360 nm和 280 nm作为测定波长，采用双波
长紫外检测器对供试品溶液进行测定，发现在 280
nm波长下干扰较多且基线不稳，而在 360 nm波长
下 4 种黄酮成分均有较好的吸收，干扰少，分离度
较好且图谱特征性强，故本实验中选择了 360 nm
作为测定波长。
3. 3 榆叶合叶子中的化学成分较复杂，检测组分
较多，本实验中曾采用 0. 1%磷酸水溶液-乙腈作为
流动相［12］，4 种黄酮成分的分离效果好但绣线菊
苷拖尾严重，尝试调节流动相的 pH 值，仍无法改
善拖尾。采用 0. 2%的甲酸乙腈溶液-0. 2%的甲酸
水溶液作为流动相［9］，分离度不佳。采用乙腈-
1000 mL水 + 55 mL 乙腈 + 20 mL 醋酸溶液流动相
体系，待分离的 4 种黄酮成分分离度良好，且无拖
尾，故选择该流动相体系。
3. 4 黄酮类成分是榆叶合叶子发挥解热、镇痛和
抗炎作用的主要活性成分之一，其中绣线菊苷含有
量较高，且为该药材的专属性成分，金丝桃苷、芦
丁和槲皮素作为多种药材的质控标准，在榆叶合叶
子中的量也较高，本实验建立了用高效液相色谱法
同时测定这 4 种黄酮成分的分析方法，即可作为对
这 4 种成分进行定量测定的方法，又可作为对榆叶
合叶子药材进行质量控制的指标。
参考文献:
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高效薄层色谱法同时测定巴戟天中 3 种寡糖
周 斌， 崔小弟， 李 洁* ， 程 丹， 郑鹏武， 王 平
(江西科技师范大学药学院，江西 南昌 330013)
收稿日期:2012-12-04
作者简介:周 斌 (1970—) ，男，副教授，博士，研究方向:中药活性成分。E-mail:tju_ zhoubin@ 163． com
* 通信作者:李 洁 (1980—) ，女，讲师，博士，研究方向:药物体内代谢。Tel:(0791)83805385，E-mail:dykhmljllc@ yahoo． com． cn
摘要:目的 建立用高效薄层色谱法同时测定巴戟天中 3 种寡糖的量。方法 薄层层析的展开剂为正丁醇-异丙醇-水-
醋酸 (7 ∶ 5 ∶ 2 ∶ 1，v /v) ，展距为 90 mm，温度为室温，显色剂为 α-萘酚-硫酸，烘烤温度为 110 ℃，扫描波长为 577
nm。结果 蔗果三糖的线性范围为 52 ～ 260 ng，r2 = 0. 992 1，精密度 RSD 为 1. 56%;耐斯糖的线性范围为64 ～ 320
ng，r2 = 0. 993 8，精密度 RSD为 1. 47%;1F-果呋喃基耐斯糖的线性范围为 72 ～ 360 ng，r2 = 0. 994 3，精密度 RSD为
1. 38%。结论 本方法操作简单，重复性好，可作为巴戟天药材及其产品中 3 种寡糖的定量分析方法。
关键词:巴戟天;高效薄层色谱;耐斯糖;寡糖
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)08-1717-03
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 08． 030
Simultaneous determination of three oligosaccharides in Morinda officinalis
by HPTLC
ZHOU Bin， CUI Xiao-di， LI Jie* ， CHENG Dan， ZHENG Peng-wu， WANG Ping
(School of Pharmacy，Jiangxi Science and Technology Normal University，Nanchang 330013，China)
KEY WORDS:Morinda officinalis;high performance TLC;nystose;oligosaccharides
巴戟天为茜草科植物巴戟天 Morinda officina-
lis How 的干燥根。具有补肾阳，强筋骨，祛风
湿的功能，主要治疗阳痿遗精，月经不调，风
湿痹痛，筋骨痿软等［1］，是 “四大南药”之一。
主要化学成分包括蒽醌类、环烯醚萜类、寡糖
和多糖等［2-3］。研究表明，巴戟天中低聚寡糖是
其主要的活性物质之一，具有减轻便秘、降低
患骨质疏松和动脉粥样硬化的危险［4］，其结构
由不同果糖单元组成糖链，末端终止于一个葡
萄糖分子［5］，属于菊粉型低聚糖。由于糖类物
质检测方法的局限性以及缺少对照品，导致对
低聚寡糖的定量分析研究较少［6-7］，而采用薄层
色谱法对巴戟天中寡糖进行定量研究尚未见报
道。本实验建立用 TLC 法同时定性定量分析巴
戟天中 3 种寡糖，操作简单，重复性好，可以
用来控制巴戟天及其产品的质量。
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2013 年 8 月
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Vol． 35 No． 8