全 文 ：基金项目：新疆维吾尔自治区科技计划项目 （２０１１３０１０５－２）
作者简介：王　艳（１９８０－），女，副教授，博士，研究方向：新疆地方药用植物的研究。
作者简介：热娜˙卡斯木女，女（维吾尔族），博士，教授，博士生导师，研究方向：新疆特色中药资源的开发与利用研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｒｅｎａｋａｓｉｍｕ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
榆叶合叶子黄酮类成分的微乳薄层色谱鉴别
王　艳，张俊妹，郭金凤，李新霞，热娜·卡斯木
（新疆医科大学药学院，乌鲁木齐　８３００１１）
摘要：目的　建立榆叶合叶子黄酮类成分的微乳薄层色谱鉴别方法。方法　以十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）－正丁
醇－正庚烷－水组成的微乳体系为展开剂，对榆叶合叶子的全草和花的提取物进行薄层层析，考察微乳薄层中的微乳
液类型、酸度等因素对黄酮类物质分离效果的影响。结果　含水量７５％（Ｏ／Ｗ）的微乳液－甲酸（９∶１）为适宜展开
剂，与传统有机溶剂展开剂相比，分离得到的斑点数目更多，更加清晰，分离度更好。结论　黄酮类成分的微乳薄
层鉴别方法简便易行，重复性好，可作为榆叶合叶子药材的薄层鉴别方法。
关键词：榆叶合叶子；微乳；薄层色谱
中图分类号：Ｒ９１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１５）０１－００６１－０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１５．０１．０１５
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏ　ｉｎ　Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ　ｕｌｍａｒｉ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ
ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＷＡＮＧ　Ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｊｕｎｍｅｉ，ＧＵＯ　Ｊｉｎｆｅｎｇ，ＬＩ　Ｘｉｎｘｉａ，Ｒｅｎａ　Ｋａｓｉｍｕ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ　ｕｌｍａｒｉ　ｂｙ
ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｎｄ　ｈｅｒｂａｌｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ
ｕｌｍａｒｉ　ｗｅｒｅ　ｅｌｕｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ　ｏｆ　ＳＤＳ－ｎ－Ｃ４Ｈ９ＯＨ－ｎ－Ｃ７Ｈ１６－Ｈ２Ｏ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉ－
ｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ａｃｉｄｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｅｎｔｉｒｅｌｙ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　７５％ （Ｏ／Ｗ）ｏｆ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｒｓ，ｍｏｒｅ　ｓｐｏｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎ－
ｔｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｍａｒｋｅｄｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗａｓ　ｅａｓｉｌｙ　ａｄｏｐｔｅｄ，ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ　ｕｌｍａｒｉ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ　ｕｌｍａｒｉ；ｍｉｃｒｏ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ；ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
　　微乳薄层色谱是对传统薄层色谱方法的提高和
改进，采用微乳作为展开剂，聚酰胺薄膜为固定相。
微乳是由表面活性剂、助表面活性剂、油和水按适当
比例形成的无色透明、各向同性、低黏度的热力学稳
定体系，因此微乳具有更大的增溶量和超低界面张
力，更有利于提高色谱的分离效率［１］。榆叶合叶子
（Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ　ｕｌｍａｒｉａ　Ｌ．）为蔷薇科蚊子草属多年
生草本植物，国内主要分布于新疆阿勒泰地区，国外
主要分布于英国、波兰、土耳其、苏联等国［２－３］。由
于合叶子生长和分布的地域特色，其即是英国、印
度、法国和俄罗斯等国的著名草药，也是新疆哈萨克
族民间常用药材。现代药理研究表明榆叶合叶子的
药理作用广泛，具有抗炎、止血、抗溃疡、抗凝血、抗
肿瘤、伤口治疗、保肝、抗糖尿病和健脑等作用［４－５］，
其主要化学成分为酚苷类和黃酮类成分［６－７］。《欧
洲药典》（第７版）、《匈牙利药典》（第８版）均收载了
合叶子，采用薄层色谱法鉴别其酚苷类成分，但未见
对其黄酮类成分的薄层鉴别方法。另外《欧洲药典》
采用合叶子的花作为药用部位，而《哈萨克族药志》
　第３８卷　第１期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３８　Ｎｏ．１
　２０１５年１月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊａｎ．２０１５
收载及民间应用均为榆叶合叶子的干燥带花地上部
分。本研究运用微乳薄层色谱法对榆叶合叶子的黄
酮类成分进行薄层色谱鉴别研究，并且分别取榆叶
合叶子的花和全草进行鉴别。
１　仪器与材料
半自动点样仪（ＣＡＭＡＧ　ＬＩＮＯＭＡＴ５），薄层
色谱数码成像系统（ＣＡＭＡＧ　ＲＥＰＲＯＳＴＡＲ３），
１００μＬ微量进样针，超声波清洗仪（昆山市超声仪
器有限公司），分析天平（Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｅｌｅｄｏ，ＡＢ１３５－Ｓ，
ｄ＝０．０１／０．１ｍｇ），双槽展开缸（２０ｃｍ×２０ｃｍ），硅
胶Ｇ高效板（购自青岛海洋化工厂），聚酰胺薄膜
（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂出品）。
金丝桃苷对照品（上海源叶生物科技有限公司，
批号 ＭＵＳＴ－１１１２２００３），绣线菊苷对照品（Ｃｈｒｏｍａ－
Ｄｅｘ，Ｉｎｃ．，批号２０２２９－５６－５），芦丁对照品（上海源
叶生物科技有限公司，批号２０１２０２２６），槲皮素对照
品（中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院，批 号 １０００８１－
２００９９０７），其余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　微乳展开剂的配置［８－９］　在保证ＳＤＳ－正丁醇－
正庚烷质量比为２７∶６３∶１０的条件下，改变水量，
配置系列微乳。按上述质量比取ＳＤＳ、正丁醇、正庚
烷后，加入适量水，超声５ｍｉｎ使溶解，静置２４ｈ备
用，各微乳液的成分配比及结构见表１。
２．２　对照品溶液的制备　取金丝桃苷、绣线菊苷、
芦丁、槲皮素对照品，以甲醇制成每１ｍＬ含０．５ｍｇ
的混标溶液，作为对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　分别称取榆叶合叶子花
和全草药材粉末约０．５ｇ，量取５０ｍＬ甲醇经索氏
提取法提取，减压蒸发干燥，称重后，残渣用５ｍＬ
甲醇溶解配制成供试品溶液备用。
表１　微乳液的成分配比及结构（总量：１００ｇ）
含水量／％
成分配比
ＳＤＳ 正丁醇 正庚烷 重蒸水
微乳液结构
５０　 １３．５　 ３１．５　 ５．０　 ３０．０ Ｗ／Ｏ－Ｏ／Ｗ
６５　 １７．５　 ４１．０　 ６．５　 ３５．０ Ｏ／Ｗ
７０　 ８．１　 １８．９　 ３．０　 ７０．０ Ｏ／Ｗ
７５　 ６．８　 １５．７　 ２．５　 ７５．０ Ｏ／Ｗ
８０　 ５．４　 １２．６　 ２．０　 ８０．０ Ｏ／Ｗ
９０　 ２．７　 ６．３　 １．０　 ９０．０ Ｏ／Ｗ
２．４　薄层层析方法　用半自动点样仪吸取榆叶合
叶子花供试品溶液２μＬ、榆叶合叶子全草供试品溶
液２μＬ和对照品溶液２μＬ，于聚酰胺薄膜上点样，
以表１中的各微乳为展开剂于室温上行法展开。展
距约８ｃｍ，取出晾干，喷以５％三氯化铝无水乙醇
溶液显色，晾干，置３６６ｎｍ紫外灯下检视并拍照。
２．５　展开剂含水量对薄层展开效果的影响　以配
制的６种不同含水量的微乳为展开剂进行展开，薄
层展开结果见图１。由图可知，含水量越多，展开时
间越短。含水５０％的微乳液所需展开时间偏长，效
果欠佳 （图１Ａ）；含水７５％的微乳所需时间适中，展
开斑点较多，且比较清晰，效果较理想，故选择含水
７５％的微乳作为展开剂 （图１Ｄ）。
　 　 　 　 　
Ａ：５０％微乳－甲酸
（９∶１）
　
Ｂ：６５％微乳－甲酸
（９∶１）
　
Ｃ：７０％微乳－甲酸
（９∶１）
　
Ｄ：７５％微乳－甲酸
（９∶１）
　
Ｅ：８０％微乳－甲酸
（９∶１）
　
Ｆ：９０％微乳－甲酸
（９∶１）
（从左至右分别为花的样品、全草样品、混标；混标从上至下分别为芦丁、金丝桃苷、绣线菊苷、槲皮素）
图１　不同含水量的微乳的薄层展开情况
２．６　展开剂酸度对薄层展开效果的影响　采用含
水７５％的微乳作为展开剂，为了改善黄酮类化合物
的拖尾现象，采用８５％的甲酸调节酸度，分别考察
了７５％微乳－甲酸（９∶１）、７５％微乳－甲酸（９∶２）的
展开剂，不同酸度的微乳的薄层展开情况见图２。
结果表明，微乳酸度对展开效果有一定的影响，７５％
微乳－甲酸（９∶１）的配比能有效改善拖尾，使展开效
果达到最佳（图２Ｂ）。
２．７　微乳展开与传统有机溶剂展开比较　微乳展
开以７５％微乳液－甲酸（９∶１）为展开剂，传统有机
溶剂展开以乙酸乙酯－甲酸－水（１２∶０．５∶０．５）为展
开剂，分别对榆叶合叶子的花和全草的提取液进行
２６ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３８卷　
薄层层析。各薄层色谱层析结果见图３，传统有机
溶剂系统乙酸乙酯－甲酸－水（１２∶０．５∶０．５）分离出
９个斑点，各成分分离效果好，但斑点较模糊 （图
３Ａ）。微乳展开分离出１５个斑点，斑点明亮、清晰，
各成分分离效果较好 （图３Ｂ）。可见，对榆叶合叶
子黄酮类成分而言，微乳展开系统较传统有机溶剂
展开系统分离的斑点数目更多、更加清晰，具有一定
的优越性。
　　 　　　　　　 　　　
Ａ：７５％微乳－甲酸
（９∶１）
　 　
Ｂ：７５％微乳－甲酸
（９∶２）
　　　　　　
Ａ：展开剂为乙酸乙酯－
甲酸－水（１２∶０．５∶０．５）
Ｂ：展开剂为 ７５％
微乳－甲酸（９∶１）
　
从左至右分别为花的样品、全草样品、混标；混标从上至
下分别为芦丁、金丝桃苷、绣线菊苷、槲皮素
图２　不同酸度的微乳的薄层展开情况
　
　　
从左至右分别为花的样品、全草样品、混标；Ａ混标从上至下
分别为槲皮素、绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁；Ｂ混标从上至下分
别为芦丁、金丝桃苷、绣线菊苷、槲皮素
图３　传统有机溶剂系统与微乳展开系统薄层分离结果
３　讨论
实验中采用传统有机系统作为展开剂时，曾尝
试过使用不同比例的乙酸乙酯－甲酸－水、醋酸乙酯－
丁酮－甲醇－水、丙酮－水－甲酸作为展开剂，结果发现，
由于榆叶合叶子中黄酮类成分复杂，且各成分间差
别较小，采用传统有机溶剂作为展开剂时，斑点模
糊，分离效果不好，特别是金丝桃苷与绣线菊苷很难
分开，只有采用乙酸乙酯－甲酸－水（１２∶０．５∶０．５）
作为展开剂时效果较好，但是与７５％微乳液－甲酸
（９∶１）展开系统比较，微乳薄层展开较之具有明显
的优势，采用微乳溶液作为展开剂要比传统有机溶
剂系统作为展开剂得到的斑点数目更多，且更加清
晰，分离度更好。这是由于微乳体系较胶束体系具
有更大的增溶量和超低界面张力，更有利于提高色
谱的分离效率［１］，并且微乳薄层还具有明显的荧光
增强增敏效应，因此微乳薄层是榆叶合叶子黄酮类
物质定性鉴别的较理想的展开系统。
榆叶合叶子的花和全草采用相同的提取方法和
相同的点样量，经普通有机系统和微乳展开剂展开，
层析结果显示，２种样品的斑点数目相同，表明榆叶
合叶子的花和全草中的黄酮类成分相同；此外，花的
样品中除了绣线菊苷和槲皮素的展开斑点较全草样
品中的相应斑点大外，其他黄酮类成分的斑点大小
几乎相同，由此初步推断榆叶合叶子的花和全草中
各黄酮类成分的含量相差不大，但花中的绣线菊苷
和槲皮素的含量要稍高于全草中的，其具体的含量
差异还需通过 ＨＰＬＣ法定量分析。
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［收稿日期：２０１３－１２－２７］
（本文编辑　施洋）
３６　第１期 王　艳，等：榆叶合叶子黄酮类成分的微乳薄层色谱鉴别