全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:新疆医科大学大学生创新性实验计划，建立榆叶合叶子的高效薄层分析方法 (CX2012009)。
通信作者:王艳。
TLC －生物自显影法筛选榆叶合叶子的抗氧化活性
郭金凤 张俊妹 张 芳 张 行 王 艳*
新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011
【摘 要】 目的:建立榆叶合叶子中黄酮类成分的 TLC鉴别方法和运用 TLC －生物自显影鉴别方法，初步筛选榆叶合叶子中的抗氧化
活性成分。方法:以绣线菊苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素为对照品，采用三种薄层展开系统，选出最佳薄层展开系统;喷以 0． 1%的 DPPH
无水乙醇溶液显色，筛选抗氧化活性。结果:榆叶合叶子黄酮类物质的 TLC鉴别的最佳展开系统为乙酸乙酯 －甲酸 －水 (8∶ 1∶ 1);TLC －
生物自显影抗氧化活性筛选中，黄酮类成分的薄层板呈紫色背景黄色斑点。结论:榆叶合叶子药材中黄酮类成分的 TLC 鉴别方法可行，重
复性好，可作为榆叶合叶子药材的薄层鉴别方法;榆叶合叶子药材中的黄酮类成分具有抗氧化活性。
【关键词】 榆叶合叶子;TLC;TLC －生物自显影
【中图分类号】Ｒ286. 0 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2013)24 － 0009 － 02
Using TLC － DPPH to Screen Antioxidant Components in Filipendula ulmari
GUO Jin － feng ZHANG Junmei ZHANG － Fang WANGYan
Pharmacy College，Xinjiang Medical University，Ulumuqi 830011，China
Abstract:Objective To establish the thin － layer chromatography for identifying flavonoids and using TLC － DPPH preliminarily
screen antioxidant components in Filipendula ulmari． Method:Spiraeoside，hyperoside，rutin and quercetin． as reference substance，
using three ordinary organic deployable system and chose the best one，using TLC － DPPH to screen antioxidant active． Ｒesults The
best deployable system ethyl acetate － formic acid － water (8∶ 1∶ 1);the thin layer board of flavonoids ingredients shows purple back-
ground yellow spots． ConclusionThis TLC method is simple，with good reproducible ． It can be utilized as TLC method for Filipendula
ulmari;the flavonoids ingredients of Filipendula ulmari have antioxidant active．
Key words:Filipendula ulmari;sTLC ;TLC － DPPH
榆叶合叶子 (Filipendula ulmaria L．)为蔷薇科蚊子草
属多年生草本植物，榆叶合叶子是新疆哈萨克族民间常用
药材，收载于《哈萨克药志》。榆叶合叶子味微酸涩，性
平。具有收敛，降压等作用，哈萨克族民间应于主治高血
压、高血脂引起的头痛、头晕、耳鸣［1］，具有悠久的哈萨
克医临床用药历史和确切的疗效。此外榆叶合叶子还具有
抗炎、止血、抗溃疡、抗凝血、抗肿瘤、伤口治疗、保肝、
抗糖尿病和健脑等作用［2 － 3］。
TLC －生物自显影法是一种将薄层色谱分离和生物活性
测定相结合的药物筛选方法，现主要用于对具有抗菌 /真
菌，抑制胆碱酯酶以及清除自由基和抗氧化等活性成分的
筛选［4］。榆叶合叶子中主要含有苯酚类、黄酮类和鞣质类
等成分［5 － 6］，本文首先建立了榆叶合叶子中黄酮类物质的
TLC鉴别方法，并采用 TLC －生物自显影法对榆叶合叶子
的黄酮类物质进行抗氧化活性成分的初步筛选。
1 仪器与材料
半自动点样仪 (CAMAG LINOMAT5)，薄层色谱数码
成像系统 (CAMAG ＲEPＲOSTAＲ3)，100μl 微量进样针，
超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公司)，分析天平
(Mettler － Teledo，AB135 － S，d = 0． 01 /0． 1mg)，双槽展
开缸 (20cm × 20cm)。
金丝桃苷对照品 (批号:MUST － 11122003);绣线菊
苷对照品 (批号:00019345 － 104);芦丁对照品 (上海源
叶生物科技有限公司，批号:20120226)，槲皮素对照品
(中国食品药品检定研究院，批号:100081 － 2009907)，1，
1 －二苯基 － 2 －苦肼基自由基乙醇 (2，2 － Diphenyl － pic-
rylhydrazyl，DPPH) (SIGMA) ，榆叶合叶子由新疆医科大
学帕力达教授采集并鉴定。其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 精密称取一定粉碎度的榆叶合叶
子花和全草药材粉末 0. 5g，用 2* 50ml 甲醇索氏提取法提
取，减压蒸发干燥，称重后，残渣用 5ml 甲醇溶解配制成
供试品溶液备用。
图 1 不同展开系统的榆叶合叶子药材非挥发性
成分薄层色谱图
A. 乙酸乙酯 －甲酸 －水 (12∶ 0. 5∶ 0. 5);
B. 醋酸乙酯 －丁酮 －甲醇 －水 (5∶ 5∶ 1∶ 1);
C. 丙酮 －水 －甲酸 (20∶ 0. 5∶ 0. 5);
从左至右分别为:花的样品，全草样品，混标;
混标从上至下分别为:槲皮素，绣线菊苷，金丝桃苷，芦丁
·9·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
2. 2 对照品溶液的制备 分取吸取绣线菊苷、金丝桃苷、
芦丁、槲皮素对照品适量，以甲醇制成每 1ml 含 0. 5mg 的
混标溶液，作为对照品溶液。
2. 3 展开系统的选择 分别吸取榆叶合叶子花和全草供试
品溶液 2μl和对照品溶液 2μl，点于同一薄层板上，以乙酸
乙酯 －甲酸 －水 (12∶ 0. 5∶ 0. 5)、醋酸乙酯 －丁酮 －甲醇 －
水 (5∶ 5∶ 1∶ 1)、丙酮 －水 －甲酸 (20∶ 0. 5 ∶ 0. 5)3 种不同
展开系统展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热 5min
至斑点清晰，紫外光 366nm 下检视，结果见图 1。通过图
中斑点数目、分离度和拖尾情况确定乙酸乙酯 －甲酸 －水
(12∶ 0. 5∶ 0. 5)为最佳展开系统。
图 2 不同检视条件下的榆叶合叶子药材非挥发性成分薄层色谱图
A. 可见光下检视;B. 紫外光 254nm下检视;
C. 紫外光 366nm下检视;
从左至右分别为:花的样品，全草样品，混标;
混标从上至下分别为:槲皮素，绣线菊苷，金丝桃苷，芦丁
图 3 榆叶合叶子黄酮类物质抗氧化活性筛选
从左至右分别为:花的样品，全草样品，混标;
混标从上至下分别为:槲皮素，绣线菊苷，金丝桃苷，芦丁
2. 4 不同检视方式的考察 分别吸取榆叶合叶子花供试品溶
液 2μl、榆叶合叶子全草供试品溶液 2μl和对照品溶液 2μl，
点于同一薄层板上，以乙酸乙酯 －甲酸 －水 (12∶ 0. 5∶ 0. 5)
为展开系统，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热
5min至斑点清晰，分别在可见、紫外光 254nm 和紫外光
366nm下检视，结果见图 2。结果表明，榆叶合叶子药材薄
层色谱图中金丝桃苷、绣线菊苷、芦丁和槲皮素在 3 种检
视条件下均斑点清晰，但在紫外光 366nm下检视效果更佳，
表明此鉴别方法重复性好。
2. 5 TLC －生物自显影法 分别吸取榆叶合叶子花供试品
溶液、全草供试品溶液和对照品溶液 2μl，点于同一薄层板
上，以乙酸乙酯 － 甲酸 － 水 (12 ∶ 0. 5 ∶ 0. 5)为展开系统，
展开，取出，晾干，喷以 0. 1% 1，1 －二苯基 － 2 －苦肼基
自由基乙醇 (2，2 － Diphenyl － picrylhydrazyl，DPPH)无水
乙醇溶液显色，105℃加热 5min 至斑点清晰，105℃加热
5min至斑点清晰，可见光下检视。结果见图 3。薄层板呈
紫色背景黄色斑点，说明榆叶合叶子中黄酮类物质有抗氧
化活性。
3 讨论
本研究首先建立了榆叶合叶子黄酮类物质的 TLC 方
法，并将 TLC －薄层生物自显影法引入到对榆叶合叶子的
抗氧化活性研究中，初步筛选出榆叶合叶子的黄酮类成分
具有抗氧化活性，从筛选结果发现榆叶合叶子中的绣线菊
苷、金丝桃苷、芦丁、槲皮素都具有抗氧化活性，由展开
斑点可初步推断，四种成分的抗氧化能力为槲皮素 ＞芦丁
＞金丝桃苷 ＞绣线菊苷，但进一步的确定还需要进行定量
分析，另外由筛选结果发现榆叶合叶子样品的 TLC －生物
自显影法薄层板上样品的斑点成条带狀，说明榆叶合叶子
中含有丰富的抗氧化活性成分，且其花的抗氧化活性强于
全草的，但是由于榆叶合叶子中的黄酮类成分较多，采用
普通有机展开系统进行分离可以进行较好的薄层鉴别，但
是用于 TLC － 生物自显影法时，不能较好的分离显示斑
点，如何更好的运用 TLC －生物自显影法将样品中的各黄
酮类成分分离的更加清晰是接下来研究的重点。
参考文献
［1］王仁． 哈萨克药志 ［M］． 新疆:新疆科学技术出版社，2009．
［2］E． A． Krasnov，V． A． Ｒaldugin，I． V． Shilova，et al． Phenolic com-
pounds from filliendula ulmaria ［J］． Chemistry of Natural Compounds，2006． 42
(2):148 － 151．
［3］LA Liapina，GA Koval’chuk． A comparative study of the action on the he-
mostatic system of extracts from the flowers and seeds of the meadowsweet (Filipen-
dula ulmaria (L．)Maxim．) ［J］． Seriia Biologicheskaia /Ｒossiiskaia Akademiia
Nauk，1993，4 (7) :625 － 628．
［4］曲建博，娄红祥，范培红． LC 生物自显影技术在药物筛选中的应用
［J］． 中草药，2005，36 (1):132 － 137．
［5］HD Smolarz，A Sokolowska － Wozniak． Chromatographic analysis of phenolic
acids in Filipendula ulmaria (L．)Maxim and Filipendula hexapetala Gilib［J］．
Chemical ＆ Environmental Ｒesearch．，2003，12 (2) :77 － 82．
［6］ Shilova IV，Semenov AA，Suslov NI，et al． Chemical composition and bio-
logical activity of a fraction of meadowsweet extract ［J］． Pharmaceutical Chemistry
Journal，2009，43 (4) :185 － 190．
(收稿日期:2013. 10. 20)
·01·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy