全 文 ：·论　　著·
文章编号:1008-9926(2004)04-0241-05　　中图分类号:R967　　文献标识码:A
芫花根总黄酮对小鼠细胞免疫功能的调节作用①
郑维发② ,王　莉③ ,石　枫 ,崔桂友③
(②徐州师范大学 ,江苏省药用植物生物技术重点实验室　江苏　徐州　221116;③扬州大学生命科学与技术学院　江苏　扬
州　225009)
摘　要:目的　探讨芫花根总黄酮对小鼠细胞免疫功能的调节作用。方法　以小鼠迟发性超敏反应 、小鼠腹腔巨噬细胞 IL-1
的分泌 、小鼠 T淋巴细胞增殖和 IL-2生成 , 以及小鼠 Ts细胞亚群等指标评价芫花根总黄酮对小鼠细胞免疫功能的影响。结果
剂量为 12.5 ～ 50mg·kg-1·d-1的芫花根总黄酮 ,对环磷酰胺诱导的小鼠免疫功能的增强和减弱均有显著的下调和提升作用;浓
度为125 ～ 500μg·ml-1的芫花根总黄酮 , 可促进腹腔巨噬细胞分泌 IL-1;剂量为 3.125 ～ 25mg·kg-1·d-1的芫花根总黄酮 , 可显著
促进Con A 诱导的小鼠 T淋巴细胞增殖 、IL-2的分泌 , 并呈剂量依赖性的量效关系;单独使用 25～ 50mg·kg-1·d-1的芫花根总
黄酮 ,可显著减弱超适量 2 , 4-二硝基氯苯诱导的小鼠的免疫耐受 , 与环磷酰胺合用能增强超适量 2 , 4-二硝基氯苯引起的小
鼠免疫耐受。结论　芫花根总黄酮对小鼠的细胞免疫功能具有调节作用。
关键词:芫花根总黄酮;迟发性超敏反应;T淋巴细胞;白介素-1;白介素-2;TS 细胞亚群;细胞免疫
Modulatory effects on cell immunity of mice by total flavonoids from radix Daphne
genkwa ①
ZHENG Wei-Fa② ,WANG Li③ ,SHI Feng ,CUI Gui-You③
(②Key laboratory on biotechnology for medicinal plants of Jiangsu province , Xuzhou Normal University , Xuzhou 　
221116 , Jiangsu　China)
(③School of Bioscience &Technology ,Yangzhou University ,Yangzhou　225009 , Jiangsu　China)
ABSTRACT:Aim To elucidate the modulatory effects on cell immunity of mice by total flavonoids from radix Daphne
genkwa(TFRD).Methods The effects of TFRD on cell immunity inmice were evaluated by delayed type hypersensitivity
(DTH), IL-1 release by peritoneal macrophages , lymphocyte proliferation and IL-2 release as well as Ts cell subclass vari-
ation.ResultsOral treatment by TFRD at doses between 12.5 ～ 50mg·kg-1·d-1 resulted in significant enhancement to
DTH in immuno-suppressed mice (P <0.01)and obvious reduction to DTH in immuno-enhanced mice (P <0.
01).The promotion on release of IL-1 was detected to be significant between 125 ～ 250μg·ml-1.In vivo enhancement on
proliferation of lymphocytes and release of IL-2 was found to be most prominent at a dose of 25mg·kg-1·d-1 and indicat-
ed duration and dose-dependent manner within 3.125 ～ 25 mg·kg-1·d-1.TFRD ig treated at doses of 25 and 50mg·
kg
-1·d-1 evidently reduced the immune tolerance of mice induced by super optimal dose of 2 , 4-dinitrochlorobenzene
(DNCB),whereas the same doses of TFRD used in combination with cyclophosphamide (CP)dosed at 80mg·kg-1 be-
haved significant increase in the immune tolerance induced by DNCB.Conclusion Adequate dose of TFRD acted not only
as enhancing but modulatory agent in cell immunity of mice.
KEYWORDS:Total flavonoids from the from radix Daphne genkwa ;Delayed type hypersensitivity;T cell proliferation;
Interleukin-1;Interleukin-2;Ts cell;Cell immunity
　　芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc .)为瑞香科
植物 ,广泛分布于我国长江流域各省和黄河流域的
部分地区。芫花根具有消炎 、镇痛 、镇静及抗惊厥等
多种药理作用[ 1] 。芫花根的次生代谢产物主要包括
·241·　解放军药学学报　第 20卷第 4期　　芫花根总黄酮对小鼠细胞免疫功能的调节作用　　　　　　　　　郑维发　　
①
② 作者简介:郑维发(1962-),男 ,安徽南陵人 ,理学博士 ,教授。研究方向:天然药物化学及其药理毒理学。 Tel:(0516)3403179;E-mail:
njzheng2004@126.com
基金项目:教育部科学技术研究重点项目(03049),江苏省教育厅自然科学基金重点项目(02KJA360002),江苏省药用植物生物技术重点实验室开放基金(KJS02114)
香豆素类 、黄酮类 、萜类及苷类化合物 ,其中黄酮类
化合物是芫花根中含量较高的一类活性物质[ 2] 。研
究表明 ,黄酮类化合物具有抗氧化 、抗肿瘤 、抗病毒 ,
免疫调节[ 7]等活性 ,对心血管疾病也有明显的防治
作用[ 3] 。芫花根在临床上作为复方的主要成分用来
治疗自身免疫性疾病—风湿性关节炎[ 4] 。然而 ,作
为芫花根中主要成分的黄酮类化合物的药理活性研
究 ,尤其是免疫调节活性迄今为止未见报道。为揭
示芫花根总黄酮在治疗免疫性疾病中的作用 ,我们
开展了芫花根总黄酮对细胞免疫功能调节活性研
究。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　药品与试剂　RPMI-1640培养液(Gibco)、
胎小牛血清(Hyclone)、24 孔细胞培养板(Nunc)、96
孔细胞培养板(Nunc)、环磷酰胺(江苏恒瑞制药 ,批
号 02091921)、刀豆蛋白 A(Con A , Sigma)、脂多糖
(Lipid polysaccharides , LPS ,Sigma)、3H-胸腺嘧啶(3H-
TdR ,上海核工业研究所)、巯基乙醇酸钠(Sigma)、2 ,
4-二硝基氯苯(上海试剂一厂)、鲎试剂(湛江安度斯
生物试剂有限公司 ,批号 0403211 ,λ=0.25Eu)、无水
乙醇(分析纯 ,上海试剂一厂)、ADS-17大孔树脂(南
开大学化工厂),自制三蒸水。
1.1.2　仪器　光照培养箱(上海一恒科学仪器厂)、
CO2培养箱(SHELBA)、液体闪烁计数仪(西安国营
262厂)、离心机(上海飞鸽离心机厂)、分析天平
(Sartorius)、旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1.1.3　实验动物　昆明小鼠 ,质量 18 ～ 23g , ♀♂各
半(徐州医学院实验动物中心 , 动物合格证号:
SCXK2002-0022)。
1.1.4　实验药材　芫花根采自安徽省南陵县西南
部山区 ,药材系南京中医药大学叶定江教授鉴定。
1.2　方法
1.2.1　芫花根总黄酮乳化液的制备　称取芫花根
10kg ,粉碎后以无水乙醇(固液比1∶4)60℃浸提 24h。
离心除渣后过 ADS-17大孔树脂 ,以去离子水洗涤
除去水溶性杂质 ,再以无水乙醇洗脱得黄色乙醇洗
脱液 ,减压蒸馏后过 200 ～ 300目硅胶柱 ,氯仿-甲
醇(1∶1)洗脱物经浓缩得总黄酮制品。总黄酮经吐
温-80乳化 ,以氯化钠注射液配制成浓度确定的混
悬液 ,备用 。
1.2.2　热源的控制及检测　样品制备过程中所使
用的玻璃器皿及金属器具均在 250℃下烘烤 1h ,氯
化钠注射液以制备时间不超过 12h的三蒸水配制。
在超净台内配制总黄酮的乳化液 。细胞培养基 、小
牛血清及总黄酮乳化液的热源以鲎试剂按文献[ 5]所
述的方法检测。
1.2.3　TFRD对小鼠迟发性超敏反应的影响　取小
鼠 130只 ,随机分为 13组 ,自由取食 、饮水 。其中 6
组 , ip CP80mg·kg-1 ,3d后以50%DNCB致敏 ,形成免
疫增强模型 。另外 6组 50%DNCB 致敏后立即 ip
CP250mg·kg-1 ,形成免疫低下模型。另设一组空白
对照组 ,仅以 DNCB 致敏。芫花根总黄酮按表 1所
示的剂量对免疫增强组和免疫低下组中的 5个组连
续 ig 12d。对照组 ig等体积的生理氯化钠溶液 。第
13d ,以 2.5%的 DNCB涂抹实验小鼠右耳 , 2h后 ,称
重 ,脱颈椎处死 ,以直径 8mm打孔器取左右耳片 ,取
脾脏 、胸腺于分析天平称重 ,计算左右耳片差值 ,并
按文献[ 6]所述方法计算脾脏系数和胸腺系数。
1.2.4　TFRD对小鼠腹腔巨噬细胞生成 IL-1的影响
　取小鼠6只 ,于实验的前 3d ip 0.6%巯基乙醇酸
钠 2ml/只。实验时脱颈椎处死 , ip 8ml Hank s液 ,按
文献[ 6]在24孔板中无菌制备和培养单层巨噬细胞。
TFRD以无血清的 RPMI-1640液配制成15.5 、31.3 、
62.5 、125 、250μg·ml-1 ,分别加入单层巨噬细胞 ,1ml/
孔 。阳性对照为 20μg·ml-1 LPS 的无血清 RPMI-
1640液 ,空白对照为无血清 RPMI-1640 液。按文
献[ 6]制备巨噬细胞培养上清 ,储存于-20℃备用。
另取小鼠6只 ,脱颈椎处死后 ,无菌制备小鼠胸腺细
胞并加入 96孔板中 ,0.1ml/孔 ,含胸腺细胞 1×106
个 。将含有 IL-1的经不同浓度药物作用的培养上
清液用培养液作 1∶40稀释 ,分别加入上述培养孔
中 ,每孔 50μl ,然后每孔加入 Con A 使其终浓度为
1μg·ml-1 ,另设 Con A对照孔 ,按文献[ 6]所述的方法
测定每孔的放射量。根据 IL-1的含量对放射量的
标准曲线测定 IL-1的含量 ,结果以 pg·ml-1表示。
1.2.5　TFRD对小鼠 T淋巴细胞增殖反应的影响　
取 6 ～ 8周龄健康小鼠 72只 ,分为 6组(每组 12只 ,
♂♀各半 ,自由取食 、饮水),1 ～ 5组分别 ig 50 、25 、
12.5 、6.25 、3.125mg·kg-1·d-1剂量的 TFRD ,另设空
白对照组 ,每天 ig 等体积的生理氯化钠溶液 。给药
后的第 5 、10 、15d分别取上述 6组中的 4只小鼠摘
眼球放血 ,脱颈椎处死 ,无菌取脾 ,按文献[ 6]所述的
方法 ,培养 、收集脾淋巴细胞 ,在液体闪烁计数仪中
测定每个孔的放射量。根据放射量对细胞数的标准
曲线计算单位体积的细胞数 。
1.2.6　TFRD对小鼠脾淋巴细胞生成 IL-2的影响　
·242· 　解放军药学学报　2004年 8月　第 20卷　第 4 期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 20　 No 4　Aug2004　　　　　
取6 ～ 8周龄健康小鼠 72只 ,分为 6组(每组 12只 ,
♂♀各半 ,自由取食 ,饮水), 1 ～ 5 组分别 ig 50 、25 、
12.5 、6.25 、3.125mg·kg-1·d-1的 TFRD。另设空白
对照组 ,每天 ig 等体积的生理氯化钠溶液。给药后
的第 5 、10 、15d ,分别取上述 6组中的 4只小鼠摘眼
球放血 ,脱颈椎处死 。无菌制备 、培养脾细胞 ,收集
上清 、离心 、除菌后 ,分别作 1∶2稀释 ,按文献[ 6]测定
稀释液中小鼠胸腺细胞的放射量。根据 IL-2 含量
对放射量的标准曲线测定 IL-2的含量 ,结果以 pg·
ml-1表示 。
1.2.7　TFRD对小鼠 Ts细胞亚群的影响　取小鼠
28只 ,分为 7组(每组 4只 , ♂♀各半),作为供体鼠 。
其中 ,一组为适量免疫组(optimum immune ,OI),即以
50μl的 1%DNCB丙酮-麻油液(1∶1 , v:v)涂于小鼠
腹部致敏 。另 6 组为超适量免疫组(super optimum
immune ,SOI),即用 1%DNCB 300μl涂于小鼠腹部致
敏。适量组与超适量组致敏均在第 2d强化 。超适
量免疫组中的三组 ip 100mg·kg-1的 CP ,以消除超适
量DNCB免疫造成的 Ts细胞抑制。TFRD按表 5所
示的剂量和分组方案对供体鼠连续 ig 至第 5d。另
取小鼠 70只 ,分为 7组 ,每组 10只(♂♀各半),作
为受体鼠。供体鼠末次给药 2h后 ,取脾制成脾细胞
悬液 ,给同系受体鼠尾静脉注射 1×108 个脾细胞 ,
同时用 1%DNCB丙酮-麻油液致敏二次 。受体鼠
致敏的剂量为:适量组 9μl ,超适量组 50μl。末次强
化后的第 4d ,于每鼠右耳涂以 1%DNCB攻击(适量
组4μl ,超适量组 20μl),24h 后脱颈椎处死 ,无菌取
脾 ,按文献[ 7]所述方法培养 、收集脾淋巴细胞 ,用液
闪仪测定放射量 。根据放射量对细胞数的标准曲线
计算单位体积的细胞数。
1.2.8　实验数据处理方法　所有实验数据均采用
x ±s表示 ,组间差异性比较 ,采用 t检验判断。
2　结果
2.1　总黄酮乳化液热源检测　经鲎试剂凝集反应
检测 ,总黄酮乳化液中内毒素含量小于 0.18Eu·
ml
-1 。
2.2　对 DTH 反应的影响　免疫增强模型小鼠和免
疫低下模型小鼠的 DTH 反应与正常小鼠相比均有
显著差异(P <0.05)。免疫增强组中 ,TFRD在 3.
25 ～ 50mg·kg-1·d-1范围内 ,能下调小鼠左右耳片差
值 、脾脏指数及胸腺指数 ,其下调的程度随 TFRD剂
量的加大而增加 。其中 ,25mg·kg-1·d-1的剂量下调
作用最为显著 。免疫低下组中 , 12.5 ～ 50mg·kg-1·
d
-1的 TFRD能显著地上调小鼠左右耳片差值及胸
腺指数 。其上调作用在 3.125 ～ 25mg·kg-1·d-1内呈
剂量依赖性的量效关系 。对免疫低下组小鼠的脾脏
指数没有显著的影响 ,但随剂量增加而呈上升的趋
势 ,见表 1。
表 1　芫花根总黄酮对小鼠 DTH反应的影响( x±s , n=10)
Tab 1　Effects of TFRD on DTH of mice( x ±s , n=10)
组　别 剂 量(mg·kg -1·d-1)
左右耳差值
(Δmg)
脾脏指数
(mg·g -1)
胸腺指数
(mg·g -1)
空白对照 … 1.11±0.04 11.30±1.58 1.52±0.19
免疫增强组
CP对照 … 1.85±0.12b 16.72±1.29b 2.07±0.13b
CP+TFRD1 3.125 1.88±0.17 16.01±1.37 1.98±0.38
CP+TFRD2 6.25 1.60±0.15 15.56±1.80 1.86±0.31
CP+TFRD3 12.5 1.07±0.56f 11.20±0.42f 1.55±0.12f
CP+TFRD4 25.0 0.59±0.64g 9.65±1.68g 1.35±0.19f
CP+TFRD5 50.0 0.77±0.29g 10.33±1.91f 1.40±0.22f
免疫低下组
CP对照 … 0.78±0.55b 10.81±1.21 0.91±0.16b
CP+TFRD1 3.125 0.88±0.33 11.33±2.20 1.11±0.71
CP+TFRD2 6.25 1.01±0.28 12.52±2.91 1.20±0.58
CP+TFRD3 12.5 1.34±0.56j 13.63±1.91j 1.40±0.07j
CP+TFRD4 25.0 1.67±0.33k 14.07±3.76j 1.54±0.67j
CP+TFRD5 50.0 1.52±0.53k 12.07±3.40 1.41±0.22j
　注:与空白对照比较 , bP <0.05;与免疫增强组 CY对照比较 , fP <
0.05 , gP <0.01;与免疫低下组的CY对照比较 , jP <0.05 , kP <0.01
2.3　对小鼠腹腔巨噬细胞生成 IL-1的影响　不同
浓度的 TFRD对小鼠巨噬细胞生成 IL-1有不同的影
响 。TFRD在 62.5μg·ml-1以下时对 IL-1 的生成没
有明显地促进作用 ,而在 125 ～ 500μg·ml-1时对 IL-1
生成的促进作用显著 ,结果见表 2。
表 2　芫花根总黄酮对小鼠巨噬细胞生成 IL-1的影响( x±s , n=6)
Tab 2　Effects of TFRD on release of IL-1 by
macrophages in mice( x±s , n=6)
组别 剂量(μg·ml-1) IL-1生成(pg·ml-1)
空白对照 … 20.13±1.27
LPS 20 28.58±2.61c
TFRD1 31.3 20.07±2.30
TFRD2 62.5 21.19±1.14
TFRD3 125 24.49±2.43b
TFRD4 250 26.18±1.92b
TFRD5 500 27.56±3.06c
　　注:与空白对照比较 , bP <0.05 , cP <0.01
2.4　对小鼠 T 淋巴细胞增殖反应的影响　TFRD对
小鼠脾淋巴细胞增殖反应有显著的促进作用 ,但不
同剂量的起效时间不同 。以 3.125 ～ 6.25mg·kg-1·
d
-1的剂量对小鼠给药 ,10d才观察到促进作用。在
给药的 15d ,其促进作用达非常显著水平(P <0.
01);而以 12.5 ～ 25mg·kg-1·d-1的剂量给药 , 5d便
观察到显著促进作用 ,给药 10 、15d其促进作用达极
·243·　解放军药学学报　2004年 8月　第 20卷　第 4 期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 20　 No 4　Aug2004　　　　　
显著水平(P <0.01 , P <0.001)。随着给药剂量
的进一步增加(50mg·kg-1·d-1),TFRD对小鼠脾淋
巴细胞增殖的促进作用呈下降趋势 。在设定的 5个
剂量中 ,TFRD给药剂量与小鼠淋巴细胞增殖的促进
作用呈钟罩型的量效关系 ,在 3.125 ～ 25mg·kg-1·
d-1的范围内随着剂量增加 ,这种促进作用呈上升趋
势。当剂量增至 50mg·kg-1·d-1时 ,这种促进作用
开始下降 ,见表 3。
表 3　芫花根总黄酮对小鼠脾淋巴细胞增殖反应
影响(1×106个细胞/ml)( x±s , n=12)
Tab 3　Effects of TFRD on the proliferation of T cells in
mice(1×106 个细胞/ml)( x±s , n=12)
给药剂量
(mg·kg-1·d-1)
给药时间(d)
5 10 15
空白对照 … 1.50±0.12 …
3.125 1.50±0.11 2.47±0.18b 2.96±0.33c
6.25 1.51±0.20 3.16±0.94b 3.16±0.29c
12.5 2.41±0.16b 3.58±0.61c 4.40±0.49c
25 4.15±0.37d 5.97±0.44d 6.47±0.93d
50 1.91±0.17b 4.93±0.31c 6.26±0.52d
　　注:与空白对照组比较 , bP <0.05, cP <0.01, dP <0.001
2.5　对小鼠脾淋巴细胞生成 IL-2的影响　不同剂
量的 TFRD对小鼠脾淋巴细胞 IL-2的生成有不同的
影响。低剂量的 TFRD(3.125 ～ 12.5mg·kg-1·d-1)
在给药的前5d内 ,对小鼠脾淋巴细胞生成 IL-2没有
明显的促进作用。而较高剂量的 TFRD(25 ～ 50mg·
kg
-1·d-1)在给药的第5d对小鼠 IL-2的生成则表现
出显著的促进作用(P <0.05)。TFRD对小鼠脾淋
巴细胞生成 IL-2 的促进作用随给药时间的增加而
加强。给药的第 5d ,仅有 25 、50mg·kg-1·d-1二个剂
量对 IL-2的生成表现出促进作用 。给药的第 10d ,5
个剂量的 TFRD对 IL-2的生成都表现出显著的促进
作用 ,而在给药的第 15d ,这种促进作用进一步加
强 ,见表 4。
表 4　芫花根总黄酮对小鼠脾淋巴细胞生成 IL-2
的影响(pg·ml-1)( x±s , n=6)
Tab 4　Effects of TFRD on release of IL-2 by lymphocyte
in mice(pg·ml-1)( x±s , n=6)
给药
天数
剂量(mg·kg -1·d-1)
3.125 6.25 12.5 25 50
空白对照 … … 22.56±3.60 … …
5 18.97 18.41 27.36 35.12 32.22
±3.78 ±3.33 ±4.40b ±7.31b ±4.01b
10 19.14 27.82 37.62 39.84 38.32
±2.99 ±1.90b ±5.61c ±7.77c ±5.94c
15 32.12 33.69 46.00 48.76 47.49
±4.59b ±6.54b ±8.97d ±9.12d ±6.39d
　　注:与空白对照比较 , bP <0.05, cP <0.01, dP <0.001
2.6　对小鼠 TS(T suppressor)细胞亚群的影响　超
适量免疫(SOI)小鼠 T 淋巴细胞的应答水平显著地
低于适量免疫(OI)小鼠(P <0.01),说明小鼠的免
疫耐受造模成功(表 5)。单独使用 25 、50mg·kg-1·
d-1二个剂量的TFRD和 100mg·kg-1的 CP 均能显著
上调超适量的 DNCB所诱导的小鼠 TS 细胞亚群亢
进而引起的免疫耐受 ,其中 25mg·kg-1·d-1的 TFRD
可使小鼠的T 淋巴细胞的免疫功能接近正常应答水
平 。TFRD与环磷酰胺合用可使小鼠 T 淋巴细胞的
应答水平下降 。25 、50mg·kg-1·d-1二个剂量的
TFRD能显著下调由 100mg·kg-1CP提升的小鼠 T淋
巴细胞的应答水平 ,见表 5。
表 5　芫花根总黄酮体内对小鼠 Ts细胞亚群的影响( x±s , n=10)
Tab 5　Effects of TFRD on subclass of Ts cell in mice( x ±s , n=10)
组　　别 剂量(mg·kg-1·d-1)Ts亚群细胞/ 1×106个·ml -1
OI对照 … 1.44±0.07
SOI对照 … 1.02±0.08d
SOI+CP 对照 100 1.41±0.15g
SOI+TFRD1 50 1.36±0.01g
SOI+TFRD1+CP 50+100 1.26±0.16j
SOI+TFRD2 25 1.48±0.11h
SOI+TFRD2+CP 25+100 1.11±0.03k
　　注:与OI 对照比较 , dP <0.001;与 SOI 对照比较 , gP <0.01 , hP
<0.001;与 SOI+CY对照比较, jP <0.05 , kP <0.01
3　讨论
迟发性超敏反应(DTH)是细胞免疫的形式之
一[ 8] 。TFRD能显著下调细胞免疫功能增强小鼠的
DTH反应 , 也能显著地提升免疫功能低下小鼠的
DTH 反应 ,并能提高小鼠脾脏重量。提示 TFRD对
小鼠的 DTH 反应具有调节功能 。
巨噬细胞是 DTH 反应最终的效应细胞 ,也是机
体细胞免疫过程中的重要效应细胞 ,除了吞噬抗原
和死亡的组织碎片外 ,在机体的细胞免疫中起着抗
原呈递细胞的作用 。在 T 淋巴细胞活化过程中 ,巨
噬细胞分泌的 IL-1 、TNF-α(Tumor necrosis factor-α等
细胞因子刺激T淋巴细胞增殖[ 9] 。巨噬细胞的活化
需要刺激和启动两个步骤 ,只有活化的巨噬细胞才
能分泌 IL-1 、TNF-α等细胞因子 , LPS 是常用的巨噬
细胞启动剂[ 10] 。适当浓度的 TFRD(125 ～ 500μg·
ml-1)在体外可以单独诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌
IL-1 ,提示 TFRD 是巨噬细胞活化的启动剂和刺激
剂 。中等浓度的 TFRD(250μg·ml-1)可显著地增强
巨噬细胞分泌 IL-1的活性 ,但高浓度的 TFRD(500μg
·ml-1)反而使这种增强作用有所降低。说明 TFRD
对巨噬细胞分泌 IL-1具有调节作用 。
·244· 　解放军药学学报　2004年 8月　第 20卷　第 4 期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 20　 No 4　Aug2004　　　　　
Con A主要是引起 T 淋巴细胞增殖[ 6] 。中等剂
量的 TFRD可以增强由 Con A诱导的小鼠 T 淋巴细
胞增殖反应 ,但高剂量的 TFRD使这种增强作用下
降。由此可见 ,TFRD对T 淋巴细胞的增殖有着双向
调节作用 。IL-2是刺激 T 淋巴细胞由细胞周期的
G1期向 S期过渡的主要细胞因子 。除了刺激产生
细胞分裂增殖外 ,还作用于邻近的 T 淋巴细胞。 IL-
2还是细胞免疫的效应细胞 CTL (Cytotoxic lympho-
cyte)发育成功能性 CTL 的极为重要的细胞因
子[ 11] 。低浓度的Con A(5 ～ 40μg·ml-1)主要诱导Th
细胞增殖[ 12] ,Th细胞分为 Th1和 Th2二种亚型 ,其
中Th1细胞主要分泌 IL-2及TNF-α和 IFN-γ等细
胞因子[ 13] 。中等剂量的 TFRD可以显著地增强小
鼠T 淋巴细胞分泌 IL-2 ,但较高剂量的 TFRD 使这
种增强作用减弱 ,说明TFRD是 T 淋巴细胞增殖 、IL-
2分泌的调节剂 。
细胞免疫功能的改变与T 细胞总数的变化及辅
助性 T细胞(Th)和抑制性T 细胞(Ts)相对数量的改
变有关[ 14] 。超适量 DNCB引起的免疫耐受 ,可能是
通过 TS 细胞转移给受体鼠 。Ts细胞亚群对细胞免
疫应答的负反馈作用可间接反映机体的细胞免疫状
态。适量的 TFRD对 Ts有显著的抑制作用 ,造成 Ts
数量相对下降 ,机体免疫应答负反馈作用减弱 ,从而
导致机体免疫功能的增强。较低剂量的 TFRD对小
鼠T 淋巴细胞免疫功能的增强有显著的下调作用 ,
进一步证实了 TFRD对小鼠细胞免疫功能具有调节
作用 。
风湿性疾病是变态反应疾病。芫花根作为复方
的主要成分对风湿性疾病如风湿性关节炎有显著的
疗效[ 4] 。黄酮类化合物是芫花根次生代谢产物的主
要成分之一 ,芫花根总黄酮对免疫功能的调节作用
可能是芫花根治疗风湿性疾病的重要物质基础 。
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(收稿日期:2003-12-02;修回日期:2004-05-28)
(本文编辑　宋金斗)
文章编号:1008-9926(2004)04-0245-04　　中图分类号:R962　　文献标识码:A
糖皮质激素对吗啡依赖大鼠海马 c-fos基因表达的影响①
任　波② ,王新华③ ,石学银③
(②中国人民解放军第 302医院 , 麻醉室　北京　100039;③中国人民解放军第二军医大学长征医院 ,麻醉科　上海　200003)
摘　要:目的　观察吗啡依赖大鼠脑内海马区 c-fos mRNA 水平的变化 ,研究糖皮质激素(地塞米松)控制阿片戒断症状的分子
机理。方法　剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型 , 给与地塞米松干预 ,纳洛酮促瘾后观察戒断症状 , 应用原位杂交方
法观察海马区 c-fos mRNA 。结果　吗啡依赖大鼠经地塞米松干预后 ,由纳洛酮催促戒断症状评分明显低于未经地塞米松处理
·245·　解放军药学学报　第 20卷第 4期　　糖皮质激素对吗啡依赖大鼠海马 c-fos基因表达的影响　　　　　任　波　　
①② 作者简介:任　波(1971-), 男 , 河北隆饶人 ,医学硕士 , 主治医师。研究方向:临床麻醉学 、吗啡依赖与戒断的研究。 Tel:(010)
66933277;E-mail:renbo1971@.sina.com
基金项目:国家自然科学基金项目 , No.39870757