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不同产地阳春砂仁药材的质量差异研究



全 文 :药物分析
不同产地阳春砂仁药材的质量差异研究
赵红宁1,黄柳芳2,刘喜乐2,曹庆玺2,姬生国2
(广东药科大学 1.药科学院;2.中药学院,广东 广州 510006)
摘要:目的 通过对不同产地的阳春砂仁药材中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的质量分数的比较,发现有效成
分质量分数与生长环境之间的关系,探索影响阳春砂仁质量的生长因素,为阳春砂仁的规范化种植提供
参考。方法 采用气相色谱法测定不同样品中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯有效成分的质量分数,结合样品生
长地区的气候类型、土壤、年降水量、年平均温度、年平均日照时间等数据进行分析。结果 最适合阳春
砂仁成分积累的生长环境为亚热带季风气候、红黄壤土、年降水量约 2 385 mm、温度约 22 ℃、年平均日
照时间2 000 h,这一条件下,樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的平均质量分数分别为(4.89±0.12)、(1.55±0.01)、
(18.57±0.00)mg /g。结论 本研究采用气相色谱法测定阳春砂仁中樟脑、龙脑和乙酸龙脑酯的质量分
数,结合其生长环境对二者关系进行初步研究,为阳春砂仁的质量控制及种植培养提供了参考。
关键词:阳春砂仁;产地;生长环境;质量分数
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1006-8783(2016)02-0176-05
DOI:10.16809 / j.cnki.1006-8783.2015122901
收稿日期:2015-12-29
基金项目:广东省科技计划项目(2009B030801044)
作者简介:赵红宁(1990—),女,2014级硕士研究生,Email:dzyfz_hn@ 163.com;通信作者:姬生国(1967—),男,硕士生导师,从
事中药资源与开发等研究,Email:shengguo_ji@ 163.com。
网络出版时间:2016-04-01 15:48 网络出版地址:http:/ /www.cnki.net /kcms /detail /44.1413.R.20160401.1548.002.html
Study on quality variation of Amomum villosum Lour. from different producing areas
ZHAO Hongning1,HUANG Liufang2,LIU Xile2,CAO Qingxi2,JI Shengguo2
(1.School of Pharmacy;2.School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University,
Guangzhou 510006,China)
Abstract:Objective To explore the relationship between contents and growth environment through
comparing the contents of camphor,borneol and bornyl acetate from different producing areas,thus
providing a reference for the standardization of A. villosum Lour. Methods GC method was used to
determine the contents of camphor,borneol and bornyl acetate. The growth data analysis of regional climate
types of samples,soil,annual precipitation,mean yoitemperature and average sunshine time were analyzed.
Results The most suitable growth conditions for compositions accumulation in A. villousm were as follows:
the subtropical monsoon climate,red yellow loam,2 385 mm annual precipitation,temperature of about
22 ℃ and annual average sunshine time of 2 000 h. The average contents of camphor,borneol,bornyl
acetate were (4.89±0.12),(1.55±0.01)and (18.57±0.00)mg /g,respectively. Conclusion The relations
between the contents of camphor,borneol and bornyl acetate of A. villosum with its growing environment for
Amomum villosum Lour. could provide a scientific reference for quality control and culture.
Key words:Amomum villosum Lour.;producing areas;growing environment;content
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Apr. 2016,32(2)
阳春砂仁为姜科豆蔻属植物阳春砂仁 Amomum
villosum Lour.的干燥成熟果实,味辛、性温,归脾、胃
经,具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎的功效,临床
主要用于治疗湿浊中阻、脘痞不饥、脾胃虚寒、呕吐
泄泻、妊娠恶阻、胎动不安等[1],2005 年被国家质检
总局评审为国家地理标志产品[2],主产于广东省阳
春市、高州市等地,在云南、广西、福建等地亦有引种
栽培[3]。但不同产地栽种的阳春砂仁由于地理生
长环境的差异,其化学成分有所差异。这就导致市
场上阳春砂仁药材质量参差不齐、良莠不一。砂仁
主要化学成分是挥发油,主要含乙酸龙脑酯、樟脑、
龙脑等。砂仁对消化系统、免疫系统和神经系统有
确切的药理活性,还具有抗感染、利胆和镇痛等作
用[4]。本研究以此为出发点,通过对不同产地的阳
春砂仁样品中乙酸龙脑酯、樟脑以及龙脑质量分数
的比较,结合其产地的地理环境因素的分析,对阳春
砂仁的最佳生长环境进行初步研究,为药材的规范
化种植提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器
天美-7890F气相色谱仪(FID 检测器,T2100P
色谱工作站);AY120万分之一型电子天平(日本岛
津公司);1 μL 微量进样器(上海安亭微量进样器
厂);KQ-500DE型超声波清洗仪(500 W,60 kHz,昆
山市超声仪器有限公司);LK-400 手提式高速中药
粉碎机(浙江温岭市创力药材器械厂)。
1.2 试药
对照品樟脑(批号:747-9104)、龙脑(批号:507-
70-0)、乙酸龙脑酯(批号:0759-9001)、水杨酸甲酯
(批号:119-36-8)均购于中国食品药品检定研究院。
无水乙醇(分析纯,天津市致远化学试剂有限公司),
甲醇(分析纯,天津市致远化学试剂有限公司)。
6批阳春砂仁药材分别来自广东省阳春市、广
西崇左市宁明县、福建省漳州市长泰县等 6 个不同
产地,每批各 8份,经广东药科大学中药学院姬生国
教授鉴定为姜科植物阳春砂仁 Amomum villosum
Lour.的干燥成熟果实,信息详见表 1。
表 1 6批阳春砂仁样品信息表
Table 1 Information of 6 batches of Amomum villosum samples
编号 采购日期 产地 厂家 /采集地
1 2015-09 广西崇左市宁明县 广州药材公司中药饮片厂
2 2015-07 云南省西双版纳州 佛鑫药业公司中药傣药饮片厂
3 2015-04 福建省漳州市长泰县 康美药业股份有限公司
4 2015-07 广东省阳江市阳春市 采集自阳春市春湾镇
5 2015-07 广东省湛江市徐闻县 采集自湛江市徐闻县龙塘镇
6 2015-04 广东省江门市新会区 广州致信中药饮片有限公司
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:AT. SE-54 毛细管柱(15 m×0.25 mm,
0.33 μm);载气:高纯 N2,流速:30 mL /min;H2 流
速:40.00 mL /min,Air 流速:400.00 mL /min;气化室
温度:230 ℃,柱温:65 ℃,检测器:250 ℃;分流比:
20 ∶1;进样量:1 μL。
2.2 内标溶液的制备
精密称取水杨酸甲酯 202.60 mg 置于 100 mL
容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,制成质量浓度为
2.026 0 mg /mL的内标溶液。
2.3 混合对照品溶液的制备
分别精密称取樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯对照品
12.56、5.00、50.66 mg,置于 25 mL量瓶中,用无水乙
醇溶解配制成每 1 mL 含樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯分
别为 0.502 4、0.20、2.026 4 mg的混合对照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取阳春砂仁药材粉末 2.0 g,精密称定,置具塞
平底烧瓶中,精密加入无水乙醇 25 mL,密塞,称定
质量,超声处理(功率 300 W,频率 60 kHz)30 min,
放冷,称定质量,用无水乙醇补足减失的质量,摇匀,
过0.45 μm微孔滤膜。精密量取续滤液 3 mL 置于
5 mL容量瓶中,精密加入内标溶液 1 mL,用无水乙
醇定容至刻度,即得。
按“2.1”项下条件测定,内标、混合对照品、内标
+混合对照品、供试品溶液的气相色谱图见图 1。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系的考察 分别精密量取“2.3”项下
混合对照品溶液 1、2、3、4、5、6、7 mL 置 10 mL 容量
771第 2期 赵红宁,等.不同产地阳春砂仁药材的质量差异研究
瓶中,各加入内标溶液 2 mL,精密量取,用无水乙醇
稀释至刻度,摇匀,按“2.1”项下色谱条件进行测定。
以各对照品质量浓度为横坐标,以各对照品峰面积
积分值和水杨酸甲酯的峰面积积分值比值为纵坐标
分别绘制标准曲线,计算得樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯
的回归方程和线性范围见表 2。
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1.樟脑;2.龙脑;3.水杨酸甲酯;4.乙酸龙脑酯。
图 1 内标(A)、混合对照品(B)、内标+混合对照品(C)、供
试品(D)溶液的气相色谱图
Figure 1 Gas chromatogram of internal standard(A),mixed
reference substances (B) ,internal standard + mixed
reference substances (C)and Amomum villosum samples
(D)solution
2.5.2 精密度试验 精密吸取“2.3”项下混合对照
品溶液 1 μL,连续进样 6 次,记录峰面积。结果以
樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯峰面积对内标水杨酸甲酯峰
面积比值计算 RSD 值分别为 0. 87%、2. 09%、
1. 84%,表明仪器精密度良好。
2.5.3 稳定性试验 取同一份供试品溶液,按照
“2.1”项下色谱条件,分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样
测定,记录峰面积,结果以樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯峰
面积对内标水杨酸甲酯峰面积比值计算 RSD 值分
别为 2.64%、2.51%、1.12%,表明供试品溶液在 24 h
内稳定性良好。
2.5.4 重复性试验 取同一批阳春砂仁药材粉末
约 2 g,精密称定,按“2.4”项下方法制备供试品溶
液,平行操作 6份,分别按“2.1”项下色谱条件进样
分析,记录峰面积,结果以樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯峰
面积对水杨酸甲酯峰面积的比值计算 RSD 值分别
为 1. 32%、1. 83%、1. 67%,表明方法重复性良好。
2.5.5 加样回收率试验 取已知樟脑、龙脑、乙酸
龙脑酯质量分数(3 者质量分数分别为 3. 619 6、
1. 336 8、14. 451 7 mg /g)的阳春砂仁约 1. 0 g,共 9
份,精密称定,分别精密加入适量混合对照品溶液,
高、中、低质量浓度各 3 份,分别按“2.4”项下方法制
备供试溶液。分别精密吸取供试品溶液 1 μL,注入
气相色谱仪,依法测定,计算得樟脑、龙脑、乙酸龙脑
酯的平均回收率分别为 98.08%、98.39%、98.11%,
RSD值分别为 1.25%、1.99%、1.58%。见表 3。
2.6 样品的测定
分别取表 1中的 6批样品,各约 2 g,精密称定,
分别按“2. 4”项下方法制备供试品溶液,分别按
“2.1”项下方法,对不同产地阳春砂仁中的樟脑、龙
脑和乙酸龙脑酯进行质量分数测定,结果见表 4。
结果表明:广东阳春的阳春砂仁药材中樟脑、龙
脑和乙酸龙脑酯质量分数均较高,分别为(4. 89 ±
0.12)、(1. 55 ± 0.01)、(18. 57 ± 0. 00)mg /g,与文献
[5]报道的相符。福建长泰县的阳春砂仁药材中樟
脑质量分数最低,为(3.62±0.03)mg /g;云南西双版
纳的阳春砂仁药材中龙脑质量分数最低,为(1.02±
0.04)mg /g;广西宁明县的阳春砂仁药材中乙酸龙
脑酯质量分数最低,为(13.01±0.00)mg /g,结合地
理环境对比分析,这 3 种成分质量分数与该地气候
类型和土壤类型具有一定相关性。
表 2 阳春砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的回归方程及线性范围
Table 2 Regression equation and linear range of of camphor,borneol,bornyl acetate in Amomum villosum (n= 5)
组分 回归方程 相关系数 r 线性范围 /(mg·mL-1)
樟脑 Y= 4.770 8X-0.029 4 0.999 1 0.050 24~0.351 8
龙脑 Y= 4.439 6X-0.010 8 0.999 2 0.020 0~0.140 0
乙酸龙脑酯 Y= 4.213 3X-0.046 1 0.999 9 0.101 3~1.418 5
871 广东药学院学报 第 32卷
表 3 阳春砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的加样回收率试验结果
Table 3 The recovery results of camphor,borneol,bornyl acetate in Amomum villosum
组分 样品量 /mg 样品中的量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
樟脑 1.000 3 3.620 7 2.502 0 6.085 7 98.52 98.08 1.25
1.000 1 3.620 0 2.502 0 6.074 3 98.09
0.999 9 3.619 2 2.502 0 6.023 8 96.11
1.000 0 3.619 6 3.128 0 6.720 0 99.12
1.000 5 3.621 4 3.128 0 6.729 9 99.38
1.000 1 3.620 0 3.128 0 6.735 3 99.59
1.000 3 3.620 7 3.753 0 7.260 6 96.99
0.999 5 3.617 8 3.753 0 7.298 7 98.08
0.999 7 3.618 5 3.753 0 7.251 6 96.81
龙脑 1.000 3 1.337 2 1.000 0 2.328 3 99.11 98.39 1.99
1.000 1 1.336 9 1.000 0 2.294 3 95.74
0.999 9 1.336 7 1.000 0 2.287 1 95.04
1.000 0 1.336 8 1.250 0 2.582 6 99.66
1.000 5 1.337 5 1.250 0 2.572 6 98.81
1.000 1 1.336 9 1.250 0 2.562 9 98.08
1.000 3 1.337 2 1.500 0 2.810 0 98.19
0.999 5 1.336 1 1.500 0 2.828 7 99.51
0.999 7 1.336 4 1.500 0 2.856 8 101.36
乙酸龙脑酯 1.000 3 14.456 0 10.192 0 24.283 4 96.42 98.11 1.58
1.000 1 14.453 1 10.192 0 24.373 1 97.33
0.999 9 14.450 3 10.192 0 24.473 4 98.34
1.000 0 14.451 7 12.740 0 26.727 6 96.36
1.000 5 14.458 9 12.740 0 26.785 4 96.75
1.000 1 14.453 1 12.740 0 26.915 2 97.82
1.000 3 14.456 0 15.288 0 29.69 4 99.67
0.999 5 14.444 5 15.288 0 29.783 4 100.33
0.999 7 14.447 4 15.288 0 29.726 2 99.94
表 4 不同产地阳春砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的质量分数
Table 4 The contents of camphor,borneol and bornyl acetate of Amomum villosum from different producing areas (n= 8)
产地
气候
类型
土壤
类型
年降水量 /
mm
年平均
温度 /℃
年日照时
间 /h
w(樟脑)/
(mg·g-1)
w(龙脑)/
(mg·g-1)
w(乙酸龙脑酯)/
(mg·g-1)
广西宁明县
亚热带季
风气候
砂质壤土 1 200 22.1 1 700 4.29±0.03 1.03±0.02 13.01±0.00
云南西
双版纳
热带季
风气候
砖红壤 1 200~1 900 21 1 700~2 300 3.87±0.03 1.02±0.04 15.01±0.00
福建长泰县
亚热带湿
润季风气候
微酸性红壤 1 550 21 1 892 3.62±0.03 1.34±0.03 14.45±0.09
广东阳春
亚热带季风
气候
红黄壤土 2 385 22 2 000 4.89±0.12 1.55±0.01 18.57±0.00
广东徐闻县
热带和亚热
带季风气候
黄色砖红壤 1 120~1 802 22~23 1 817~2 106 3.97±0.03 1.52±0.01 13.96±0.14
广东新会
南亚热带季
风性气候
赤红壤、砂
页岩赤红壤
1 784.67 21.8 1 731.6 4.09±0.04 1.21±0.02 13.48±0.27
971第 2期 赵红宁,等.不同产地阳春砂仁药材的质量差异研究
3 讨论
参考文献[6-11]以超声提取法为提取方法,考
察了提取溶剂(甲醇和无水乙醇)对分离效果的影
响,结果显示甲醇提取的样品杂峰较多,且影响基线
的平稳,而用无水乙醇超声提取 30 min,所得色谱图
的基线较为平稳、分离效果较好,故采用无水乙醇作
为提取溶剂。
考察了正辛醇、萘、水杨酸甲酯作为内标时样品
的出峰时间和分离效果,经过多次筛选、优化,最终
采用水杨酸甲酯作为内标溶液,在“2.1”条件下基线
平稳,峰形、分离效果较佳,可以对樟脑、龙脑和乙酸
龙脑酯准确定量。
阳春砂仁为姜科豆蔻属植物,该科属植物适合
生长在热带地区,适宜生长在温暖、湿润的气候环
境,生长无休眠期。年平均温度 22 ~ 30 ℃时生长良
好,14~19 ℃时生长缓慢,能忍受 0 ℃的短暂低温,
偶尔有短期霜冻仍能越冬生长,花期气温要求 22 ~
30 ℃,22 ℃以下开花不正常。本研究结果显示,不
同产地阳春砂仁药材样品中樟脑、龙脑和乙酸龙脑
酯这 3 种成分的质量分数有明显差异,3 种成分在
产自于广东阳春的样品中质量分数均较高。推测可
能与阳春市属亚热带季风气候区,地处云雾山脉、天
露山脉的中段与河尾山的八甲大山之间,年平均气
温 22.3 ℃、光照时间长,热量丰富,雨量充沛,季风
活动明显等环境因素有关[12],这对阳春砂仁的主要
挥发性成分积累有利。该地土壤为红黄壤土,年降
水量 2 385 mm、年均温度 22 ℃、年日照时间 2 000 h,
这与适合豆蔻属植物的生长环境最接近,是造成阳
春砂仁质量较好的必要原因。本研究没有涉及阳春
砂仁药材中樟脑、龙脑和乙酸龙脑酯质量分数与植
株的生长年限以及植株个体等生物学特征的相关性
研究,拟在下一步开展。
本研究所建立的同时测定阳春砂仁中龙脑、乙
酸龙脑酯、樟脑质量分数的气相色谱法准确、简便,
可作为控制阳春砂仁质量的方法。阳春砂仁的质量
与生长环境密切相关。本实验对阳春砂仁质量与生
长环境的对比总结,可为科学合理种植阳春砂仁提
供合理的参考。
参考文献:
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2015 年版一
部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:253.
[2]张丹雁,徐志东,欧阳霄妮,等.不同播种期阳春砂种子
的发芽实验研究[J].广州中医药大学学报,2009,26
(4):391-393.
[3]欧阳霄妮.阳春砂资源调查与品质评价研究[D].广州:
广州中医药大学,2010.
[4]胡玉兰,张忠义,林敬明.中药砂仁的化学成分和药理活
性研究进展[J].中药材,2005,28(1):72-74.
[5]柯春文,梁敏.气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含
量[J].今日药学,2010,20(2):16-18.
[6]杨家庆,林燕芳,詹利之,等.青蒿中青蒿素提取工艺的优
化及含量测定[J].广东药学院学报,2012,28(1):40-43.
[7]陈璐,敖慧,叶强,等.阳春砂仁不同部位挥发油成分的
GC-MS分析[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(14):
80-83.
[8]陈琳,梁咏倩,宋粉云.药对广藿香-陈皮的挥发油提取
工艺及其化学成分的 GC-MS 研究[J].广东药学院学
报,2015,31(2):190-197.
[9]隆颖,栗建明.气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含
量[J].中国医药导报,2010,7(19):67-68.
[10]陈卫琳,陈红.福建长泰砂仁中乙酸龙脑酯含量测
定[J].福建中医药大学学报,2010,20(5):57-58.
[11]张小溪,郭星,吴雪缘,等.顶空气相色谱法测定砂仁中
樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量[J].中药材,2009,20
(6):904-906.
[12]张丹雁.阳春砂种质资源研究[D].广州:广州中医药大
学,2008.
(责任编辑:刘晓涵)
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本刊将更名为《广东药科大学学报》
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本校论文的作者单位改为“广东药科大学”。
(本刊编辑部)
081 广东药学院学报 第 32卷