全 文 ：
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收稿日期:2013 － 06 － 25
基金项目:西安市科技计划项目“西安文理学院科研创新基金专项项
目”(编号:CXY 1134 WL 31) ;西安文理学院“大学生创新创
业训练计划”项目(编号:201244)。
作者简介:李 莺(1964 －) ，女，副教授，主要从事植物学及植物组织培
养方面的研究;E-mail:1229337056@ qq． com。
百合黄天霸花丝离体快速繁殖体系的建立
李 莺1， 徐 薇1， 李 星1， 刘 琼2， 李生玲1
(1．西安文理学院生物技术学院， 陕西 西安 710065; 2．西安交大附小南校区， 陕西 西安 710065)
摘要:以百合黄天霸的花丝为外植体，直接诱导不定芽并继代增殖形成丛生芽，再诱导生根从而建立其离体快速繁殖体
系。结果表明:不定芽诱导的较适宜培养基是 MS + 6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 3 mg /L;适合不定芽增殖的培养基是 MS +
6-BA 0． 6 mg /L + NAA 0． 6 mg /L，第 1 代增值系数达 3． 76;适合其生根的培养基是 MS + NAA 0． 1 mg /L，生根率达 100%;
将试管苗在不添加任何激素的 MS培养基上壮苗培养良好，移栽于草炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩 ∶园土 ∶河沙为2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1的基
质中，成活率高达 92%。
关键词: 百合黄天霸;花丝;快速繁殖
中图分类号: S 682． 2 文献标志码: A 文章编号: 1001 － 4705(2013)11-0029-05
Invitro Micropropagation of the Filament by Lilium Manissa
LI Ying1，XU Wei1，LI Xing1，LIU Qiong2，LI Sheng-ling1
(1． College of Biotechnology，Xi’an University of Arts and Science，Xi’an Shanxi 710065，China;
2． Xi’an Jiaotong University，Xi’an Shanxi 710065，China)
Abstract:The filament of Lilium Manissa was used as explants for adventitious buds，roots induction and
established micropropagation system． The results showed that the optimum medium for adventitious buds was
MS + 0． 5 mg /L 6-BA +0． 3 mg /L NAA，and for regeneration adventitious buds was MS + 0． 6 mg /L 6-BA +
0． 6 mg /L NAA，the proliferation rate of shoot was up to 3． 76． The optimum medium for rooting was MS + 0． 1
mg /L NAA，rooting rate was 100% ． The plantlets were better in MS of no hormone． The plantlets were
transplanted in the matrix with mixed sand，and the survival rate was 92% ．
Key words: Lilium Manissa;filament;micropropagation
百合(Lilium． spp)是百合科百合属多年生草本球
根花卉，在世界花卉贸易中，特别是鲜切花贸易中具有
重要的地位，随着我国花卉市场的发展，百合切花的生
产和消费逐渐增加，已成为主要切花种类［1］。百合黄
天霸(Manissa) ，系东方百合与喇叭百合的杂交新品系
·92·
研究报告 李 莺 等:百合黄天霸花丝离体快速繁殖体系的建立
(Oriental × Trumpet，简称 OT 杂种系) ，其花色黄白相
间、花型较大、气味幽香、花茎粗壮、开花早和抗性强，
在鲜切花市场上越来越受到消费者的青睐。传统的繁
殖是采用鳞茎繁殖，但因其生长周期长，消费量大，已
不能满足日益增长的市场需求，组织培养及快速繁殖
技术无疑是解决这一问题的有效途径。
有关百合的组织培养，国内外不少的研究者开展
了大量的实验研究工作［2］。百合离体培养大部分以
鳞片作为外植体，也有少量以花器官为外植体进行组
织培养的报道，关文灵［3］、姚邵嫦［4］、柳玉晶［5］、刘
芬［6］、贾敬芬［7］、姜春华［8］、刘丽敏［9］等分别进行了云
南大百合、亚洲百合、东方百合、兰州百合、西伯利亚百
合、帝伯、铁炮、金百合等花器官为外植体的组织培养
研究。关于百合黄天霸的组织培养方面的研究，仅见
翟彦［10］等以其花器官为外植体进行诱导体细胞胚胎
发生与植株再生，因此，本实验开展百合黄天霸花丝离
体快速繁殖体系的研究，以期为百合黄天霸离体快速
繁殖种苗生产提供理论依据。
1 材料和方法
1． 1 材 料
百合黄天霸的花蕾。
1． 2 方 法
1． 2． 1 外植体消毒
摘取健康的未开放的百合黄天霸花蕾(花蕾约 10
cm大小，即将开放而未开) ，用流水冲洗 30 min，用干
净的纱布蘸取 70%的酒精擦拭其表面，并剥去外轮的
花瓣，将其剩余部分放入无菌瓶中，用 1%的次氯酸钠
消毒 5 min，再用无菌水冲洗 3 ～ 4 次，每次 1 min。
1． 2． 2 培养基的配制及培养条件
以 MS 为基本培养基，附加蔗糖 30 g /L，琼脂粉
5 g /L，调整 pH =5． 8 ～ 6． 0，并设置不同浓度梯度的激
素配比(见表 1)。
表 1 百合黄天霸培养基类型
诱导培养基 激素配比
(1)6-BA 0． 5 mg /L + 2，4-D 0． 3 mg /L
启动培养基 (2)6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 3 mg /L + 2，4-D 0． 3 mg /L
(3)6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 3 mg /L
(4)6-BA 0． 6 mg /L + NAA 0． 4 mg /L
不定芽增殖培养基 (5)6-BA 0． 6 mg /L + NAA 0． 6 mg /L
(6)6-BA 0． 6 mg /L + NAA 0． 8 mg /L
(7)NAA 0． 1 mg /L
生根培养基 (8)NAA 0． 5 mg /L
(9)NAA 1． 0 mg /L
1． 2． 3 诱导培养
将花丝切成约 1． 0 cm 接种到(1)、(2)、(3)号 3
种培养基中，每种处理接种 5 个培养皿，每个培养皿接
种 6 块外植体，进行诱导培养，观察和统计外植体出芽
数和出愈数，计算出芽率和出愈率，出芽率(%)=(出
芽外植体数 /接种外植体数)× 100%;出愈率(%)=
(出愈外植体数 /接种外植体数)× 100%。
1． 2． 4 不定芽的增殖培养
将诱导出的不定芽接种在(4)、(5)、(6)号 3 种培
养基上，进行不定芽的继代增殖培养，观察其生长增殖
状况，45 d统计第 1 代不定芽的数量，然后转接到新配
制的培养基继续进行继代培养，再过 45 d 统计第 2 代
的不定芽的数量并拍照。
1． 2． 5 生根培养
选出生长情况较一致的 90 株，分成 3 组，分别接
种到(7)、(8)、(9)号 3 种培养基上诱导生根，每组接
种 30 瓶，每瓶转接 1 株，观察并统计生根率。生根率
(%)=(生根外植体数 /接种外植体数)× 100%。
1． 2． 6 壮苗、炼苗与移栽
将产生的试管苗移入到不添加任何激素的 MS 培
养基中，进行壮苗培养 45 ～ 60 d，选取生长健壮、生根
良好的试管苗，打开瓶盖，炼苗 3 ～ 5 d，用清水洗净根
表面的培养基，分别移栽到 A、B 两种基质(A 基质为
草炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩 ∶ 园土 = 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1，B 基质为草
炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩 ∶园土 ∶河沙 = 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1)中培
养，基质喷洒 0． 1%的多菌灵溶液进行消毒，置于温室
中培养，空气湿度保持在 70%，观察并统计成活率。
2 结果与分析
2． 1 诱导培养
接种 18 d 后观察，(2)号培养基的花丝最先诱导
出不定芽，同时还观察到花丝在(1)、(2)和(3)号这 3
种培养基均诱导出淡绿色颗粒状的愈伤组织。40 d后
观察，花丝在 3 种培养基中均产生了不定芽，且芽生长
状况良好，并长出叶片(见图 1-A，B，C) ，统计结果见
表 2。
表 2 百合黄天霸花丝的诱导培养
培养基
编号
激素配比
(mg /L) 接种数
出愈率
(%)
出芽率
(%)
(1) 6-BA 0． 5 + 2，4-D 0． 3 25 36． 00 16． 00
(2) 6-BA 0． 5 + 2，4-D 0． 3 + NAA 0． 3 23 69． 56 8． 69
(3) 6-BA 0． 5 + NAA 0． 3 24 50． 00 12． 5
表 2 表明，花丝在这 3 种培养基中既可以诱导出
愈伤组织，同时也可以诱导不定芽。其中出芽率较高
的是(1)号培养基(为 16%) ，但其分化出的不定芽有
轻微玻璃化现象(见图1-A) ，(2)号培养基出愈率较
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第 32 卷 第 11 期 2013 年 11 月 种 子 (Seed) Vol． 32 No． 11 Nov． 2013
表 3 不同浓度 NAA对不定芽增殖的影响
激素配比
(mg /L)
起始
芽的数目
第 1 代
芽的数目
第 1 代
增殖系数
第 2 代
芽的数目
第 2 代
增殖系数
总增殖
系数
6-BA 0． 6 + NAA 0． 4 54 101 1． 87 160 1． 58 2． 95
6-BA 0． 6 + NAA 0． 6 51 192 3． 76 516 2． 69 10． 11
6-BA 0． 6 + NAA 0． 8 50 103 2． 06 185 1． 79 3． 68
注:1．增殖系数 =增殖不定芽总数 /接种不定芽总数;2．总增殖系数 =第 1 代增殖系数 ×
第 2 代增殖系数。
高而出芽率较低(见图 1-B) ，说明这
种培养基的激素配比较适合愈伤组织
的诱导，(3)号培养基出愈率适中，出
芽率适中，且不定芽的生长状态良好
(见图1-C) ，说明这种培养基的激素
配比较适合不定芽的诱导。因此，较
适合诱导花丝产生不定芽的培养基是
(3)号:MS + 6-BA 0． 5 mg /L + NAA
0． 3 mg /L，较适合花丝愈伤组织诱导的培养基是(2)
号 MS + 6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 3 mg /L + 2，4-D 0． 3
mg /L。
2． 2 不定芽的增殖培养
经过继代培养产生了较多的不定芽后，接种在
(4)、(5)、(6)号 3 种培养基上，进行不定芽增殖培养，
在 45 d时观察并统计增殖的不定芽数量，计算第 1 代
增殖系数，然后转接到新配制的培养基中再进行继代
培养，45 d时观察并统计增殖的不定芽数量，计算第 2
代增殖系数，统计结果见表 3。
表 3 表明，这 3 种培养基均可不断分化出芽，形成
芽丛，并长出叶片，其基部形成鳞茎且部分开始生根
(见图 1-D，E，F)。比较这 3 种培养基，当 6-BA 质量
浓度不变时，随着 NAA质量浓度由 0． 4 mg /L增至 0． 6
mg /L时，第 1 代的增殖系数由 1． 87 增至 3． 76，而当
NAA质量浓度再增加到 0． 8 mg /L 时，第 1 代的增殖
系数则下降，第 2 代的增殖系数的变化趋势与第 1 代
相同，只是增殖系数低于第 1 代，这都说明 NAA 较适
合的质量浓度为0． 6，因此，适合不定芽增殖的培养基
是(5)号 MS +6-BA 0． 6 mg /L + NAA 0． 6 mg /L。
2． 3 生根诱导
将生长良好未生根的芽转接到 3 种生根培养基中
进行生根诱导培养，观察 10 d 开始有根萌动，30 d 统
计结果见表 4。
表 4 不同浓度 NAA对生根的影响
NAA浓度
(mg /L)
接种
瓶数
生根
瓶数
生根率
(%)
平均根长
(cm)
平均
根数
0． 1 30 30 100 2． 3 15
0． 5 30 21 70 1． 7 10
1． 0 30 9 30 1． 2 8
表 4 表明，这 3 种培养基均可诱导试管苗生根，其
中(7)号培养基 NAA 为 0． 1 mg /L 时，其生根率最高，
为 100%，平均生根数为 15 条，根的平均长度为 2． 3
cm，根生长状态良好(见图 4-G) ;随着 NAA 浓度的递
增，生根率逐渐下降，且平均生根数目减少，平均根的
长度减短，根的生长状态一般(见图 4-H，I)。说明
NAA在 0． 1 ～ 1． 0 mg /L范围内都可以诱导生根，但低
浓度的生长素更适合根的诱导和生长，因此，适宜的生
根培养基是(7)号:MS + NAA 0． 1 mg /L。
2． 4 壮苗培养、炼苗与移栽
将试管苗移入到不添加任何激素的 MS 基本培养
基中进行壮苗培养，45 d 后观察试管苗的生长状态良
好，植株粗壮，叶片颜色由浅绿色变为深绿色，鳞茎由
小增大明显，并能在其鳞茎的基部自然发出不定根
(见图 1-J，K)。经壮苗培养的试管苗经过 3 ～ 5 d 炼
苗，分别移栽到 A和 B 两种基质中，均成活良好，45 d
后统计成活率及测量相关数据见表 5。
2． 5 炼苗与移栽
经过 3 ～ 5 d 炼苗，分别移栽到 A 和 B 两种基质
中，均成活良好，45 d 后统计成活率及测量相关数据
(见表 5)。
表 5 A和 B两种基质对百合黄天霸试管苗移栽的比较
基质类型
成活率
(%)
叶面积
(cm2)
株高
(cm) 叶片数
鳞茎直径
(cm)
A基质(未掺沙) 63 11． 10 5． 36 3． 95 2． 03
B基质(掺沙) 92 10． 89 4． 78 3． 39 1． 81
表 5 表明，B 基质的成活率很高(见图 1-L) ，达
92%，B基质由于掺了沙子而透气性良好，根系发达，
所以成活率高，虽然沙子具有良好的透气性但对植物
生长不能提供任何营养，因此，在相同体积的 A 和 B
两种基质中，A基质因含有较多的营养而种苗生长好
于 B基质。因此，在 B 基质中移栽成活后，可再移栽
到 A基质中以利于种苗的后期生长。
3 讨 论
植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分
裂、脱分化和再分化的关键性激素。两者同时使用优
于单独使用，当同时使用这两类激素时，两者用量的比
例影响植物细胞的发育方向，生长素用量比细胞分裂
素用量，比值高时，有利于根的分化，抑制芽的形成，比
值低时，有利于芽的分化、抑制根的形成，比值适中时，
·13·
研究报告 李 莺 等:百合黄天霸花丝离体快速繁殖体系的建立
A．(1)号花丝出芽;B．(2)号花丝出芽;C．(3)号花丝出芽;D．起始芽状态;E．不定芽增殖第 1 代;F．不定芽增殖第 2 代;
G．(7)号生根状态;H．(8)号生根状态;I．(9)号生根状态;J．壮苗培养前;K．壮苗培养后;L．移栽苗
图 1 百合黄天霸花丝离体快速繁殖
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第 32 卷 第 11 期 2013 年 11 月 种 子 (Seed) Vol． 32 No． 11 Nov． 2013
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《种子》编委会成员名单
(按拼音顺序排列)
名誉顾问:陶嘉龄
顾 问:毕辛华 刘远坤 许宾生 张庆勤
编 委
陈克贤 陈民生 陈泽辉 董家涛 傅家瑞 樊卫国 甘功勋 黄宗洪 金道超
蒋志谦 李船江 罗继荣 陆作楣 刘作易 彭 义 钱晓刚 荣冶粗 宋培芳
孙世贤 万育麟 徐本美 颜启传 周介雄 张太平 周政贤
主 编:张太平
副主编:钱晓刚 彭 义 周介雄(常务)
促进愈伤组织的生长。本实验在花丝启动培养中第 1
组和第 3 组生长素与细胞分裂素的比值较低，第 2 组
的比值较适中，第 2 组的愈伤组织诱导率较高，为
69． 56%，而出芽率较低，为 8． 69%，第 1 组和第 3 组的
愈伤组织诱导率较低，分别为 36%和 50%，而出芽率
较高，分别为 16%和 12． 5%，同样说明了这一点。虽
然第 1 组和第 3 组的比值相同，第 1 组是 2，4-D 与
6-BA的配合使用，第 3 组是 NAA与 6-BA的配合使用，
第 1 组出芽率比第 2 组稍高，但 2，4-D与 6-BA的配合
使用诱导出的芽有轻微玻璃化现象，而 NAA 与 6-BA
的配合使用诱导出的芽形态正常，因此，认为 NAA 与
6-BA的配合使用优于 2，4-D 与 6-BA，与翟彦［10］等研
究百合黄天霸花丝对生长素的需求规律为 NAA ＞
2，4-D的结论基本一致。
4 结 论
本研究采用百合黄天霸花丝建立了其离体快速繁
殖的技术体系。即将花丝切成约 1 cm 小段接种到
MS +6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 3 mg /L培养基上进行启
动培养，培养 30 d，诱导出不定芽后，将产生的不定芽
转接到MS +6-BA0． 6 mg /L + NAA0． 6 mg /L培养基中
进行继代增殖培养，经过多次的继代增殖产生大量的
丛生芽，同时百合的鳞茎可以自然生根，因此自然生根
的试管苗可以直接转到壮苗培养基中进行壮苗培养，
没有生根的转接到 MS + NAA 0． 1 mg /L培养基中诱导
生根(由于在壮苗过程中可以自然生根，因此，诱导生
根这个环节还可以省去) ，再转接到不添加任何激素
的 MS 培养基中进行壮苗培养 45 ～ 60 d，即可获得大
量试管种苗。
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研究报告 李 莺 等:百合黄天霸花丝离体快速繁殖体系的建立