全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2013 年
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第 52卷第 20 期
2013年 10 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 52 No.20
Oct．，2013
收稿日期：2013－07－28
基金项目：国家社会科学基金项目（12XMZ033）；贵州省科学技术基金资助项目［黔科合 J 字 LKM（2011）06 号］
作者简介：何可群（1971－），女，云南云龙人，副教授，硕士，主要从事药用植物学和分析化学研究，（电话）13984334546（电子信箱）
hekequn2004＠163．com。
攀茎耳草（Hedyotis scandens Roxb.）是茜草科
（Rubiaceae）耳草属植物，又名攀援耳草、凉喉茶、理
肺散、接骨丹、小接骨。 多年生攀茎状草质藤本，长
可达 5～10 m。主根发达，圆柱形，多弯曲。茎圆柱形，
有槽及细条纹，具分枝，无毛，具明显托叶鞘。 叶对
生；近无柄或具长 2～3 mm 叶柄；叶片纸质，长椭圆
形或椭圆状披针形，先端渐尖，基部楔形，上面绿
色，下面绿白色，两面平滑无毛，侧脉 3～4对。 全缘。
紫外－可见光分光光度法测定攀茎耳草中总生物碱
何可群 a，李相兴 b，杨 琼 a，卢文芸 a
（贵州民族大学，a．化学与环境科学学院；b． 民族学与社会学学院，贵阳 550025）
摘要：采用碱浸、超声辅助氯仿萃取法提取攀茎耳草（Hedyotis scandens Roxb．）干燥根皮中的总生物碱，
并以小檗碱为对照品，采用紫外分光光度法测定其相对含量。 结果表明，小檗碱对照品在 0～53．33 μg ／ mL
范围内有良好的线性关系（R2＝0．999 4，RSD＝0．253％）。 该方法操作简便、结果可靠，为攀茎耳草开发提供
了一定的科学参考。
关键词：攀茎耳草（Hedyotis scandens Roxb．）；总生物碱；紫外分光光度法
中图分类号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2013）20－5028-03
Determination of Total Alkaloid in Hedyotis scandens Roxb． by UV－Vis
Spectrophotometry
HE Ke－quna，LI Xiang－xingb，YANG Qionga，LU Wen－Yuna
（a．Chemistry and Environmental Science Department；b． Ethnology and Sociology Department， Guizhou Minzu University，Guiyang 550025，China）
Abstract： The content of total alkaloid in Hedyotis scandens Roxb． was determined by ultraviolet visible spectrophotometry
（UV－Vis） based on the standard curve with berberine as the control． The results showed that there was a good linearity （R2＝
0．999 4， RSD＝0．253％） in the range of 0～53．33 μg ／ mL． It was a simple and reliable method for measuring the content of to-
tal alkaloid in Hedyotis scandens Roxb．． It provides a scientific reference for exploiting Hedyotis scandens Roxb．．
Key words： Hedyotis scandens Roxb．； total alkaloid； UV－Vis spectrophotometry
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（责任编辑 赵 娟）
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.20.008
第 20 期
表 1 攀茎耳草水提液生物碱成分预试结果
试剂或反应
碘化铋钾
碘-碘化钾
现象
红棕色沉淀
棕色沉淀
结果
+ +
+ +
聚伞花序顶生，密集；总花梗被柔毛；苞片线形，长
2～3 mm，被毛，花梗长 3～4 mm；花萼漏斗状 ，长 2
mm，先端具 4浅齿，齿间有 2～3枚腺体外凸；花冠白
色，花冠筒长 2 mm，裂片 4，长约 4 mm，反曲，基部
密生曲长柔毛；4 个雄蕊，花药外露，柱头 2 裂，密生
短柔毛。 蒴果球形，直径约 5 mm，黑色，开花期在 8
月［1，2］。攀茎耳草仅分布于在我国云南和国外的喜马
拉雅山脉和缅甸等地［3］。攀茎耳草全株均可入药，具
有清热解毒，润肺止咳，续筋接骨功效，主治肺炎、
支气管炎、口腔炎、肺结核、骨折等，是我国云南白
族、哈尼族、傣族的常用中草药［1，2，4］。现有研究表明，
耳草属植物中的主要功效成分为五环三萜及其苷
类、环烯醚萜类、黄酮类、蒽醌类、生物碱类等，具有
调节免疫、抗诱变、抗肿瘤、抗菌消炎、调节中枢神
经系统等功效［5］。但目前国内外相关研究较少，仅有
齐墩果酸、山柰酚－3－O－β－D－葡萄糖苷、槲皮素、芹
菜素等三萜类及黄酮类化学成分报道 ［6］，而攀茎耳
草生物碱类化学成分还未见报道。 本试验初步分析
了攀茎耳草根皮水提物化学成分，并采用紫外分光
光度法分析了总生物碱的含量。
1 材料与方法
1．1 材料
攀茎耳草购自云南省云龙县，保存于贵州民族
大学化学与环境科学学院药学教研室。
1．2 试剂与仪器
小檗碱对照品（≥98％），购自贵州迪大科技有
限责任公司。
硝酸铋、冰醋酸、盐酸、碘、碘化钾、碳酸钠、浓
氨水、 无水乙醇、 氯仿等均为分析纯， 大孔树脂
D101，购于青岛海洋有限公司。
756PC紫外－可见分光光度计（上海舜宇恒平科
学仪器有限公司）；SG3200HE 超声清洗仪 （上海冠
特超声仪器有限公司）；METTLERAE240 电子分析
天平 （上海天平仪器厂）；BGZ－30 电热鼓风干燥箱
（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；数显恒温水
浴锅 （常州博远实验分析仪器有限公司）；SY－2000
旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1．3 方法
1．3．1 攀茎耳草总生物碱试液的提取 将粉碎的
植物样品约 2 g，加去离子水 20～30 mL，并滴加数滴
盐酸后，于 60 ℃水浴 15 min，过滤，滤液供生物碱预
试试验［7］。 在预试验基础上，以 10％（V ／ V，下同）氨
水浸润、超声辅助氯仿萃取法提取攀茎耳草总生物
碱［8，9］：精确称取干燥、研碎攀茎耳草根皮 5．000 g 于
150 mL具塞锥形瓶中，加入适量 10％氨水浸润 1 h，
加 30 mL 氯仿摇匀，盖上磨口玻璃塞，放置 24 h 后，
超声提取 （40 kHz，150 W）， 共提取 3 次， 每次 15
min，每次用 30 mL 氯仿，提取结束后合并提取液，
用 3％（V ／ V）盐酸水溶液萃取 3 次，每次 30 mL，合
并酸水萃取液， 用体积比 1∶1 的氨水调 pH至 10 左
右，再用氯仿萃取 3 次，每次 30 mL，合并萃取液并
回收氯仿，以适量 50％乙醇溶解，备用。
1．3．2 大孔树脂 D101 纯化攀茎耳草的总生物碱
大孔树脂 D101 按照文献［10，11］进行预处理，将
“1．3．1”所得攀茎耳草总生物碱提取液上柱，流速为
1 mL ／ min，先用水洗 5倍柱体积，再用 10％（V ／ V，下
同）乙醇溶液洗脱 5倍柱体积，流速调为 0．8 mL ／min，
收集 10％乙醇洗脱液， 用 50％乙醇定容至 100 mL，
备用。
1．3．3 小檗碱标准储备液的制备 精确称取小檗
碱 20．00 mg 于 50 mL 容量瓶中， 加 50％乙醇适量，
充分溶解后，定容，配制浓度为 0．400 mg ／ mL 的标准
品储备液。
1．3．4 UV－Vis 光谱的测定 分别取适量浓度的小
檗碱标准溶液及经大孔树脂 D101 纯化后的攀茎耳
草总生物碱提取液适量，以 50％乙醇为空白建立基
线，在 200～500 nm 扫描，得小檗碱对照品及攀茎耳
草紫外吸收光谱。
1．3．5 线性关系的考察 精确吸取小檗碱标准储
备液 0，1．00，3．00，5．00，7．00，10．00 mL 分别置于 6
支 100 mL 比色管中， 准确加入 50％乙醇定容至
75．00 mL， 摇匀 ， 得到浓度分别为 0、5．33、16．00、
26．67、37．33、53．33 μg ／ mL的标准操作液。 以 50％乙
醇为空白，测定 OD270 nm，以 OD270 nm为纵坐标，小檗碱
浓度（μg ／ mL） 为横坐标，绘制标准曲线。
1．3．6 重复性考察 精确称取攀茎耳草根皮样品 5
份，按上述方法测定，计算 RSD。
1．3．7 攀茎耳草总生物碱的测定 取树脂纯化提
取液适量，以 50％乙醇为空白，在 270 nm 下测定攀
茎耳草的 OD270 nm，代入回归方程，计算攀茎耳草的
总生物碱含量（mg ／ g）。
2 结果与分析
2．1 样品中生物碱成分预试验
从表 1 可看出，攀茎耳草根皮乙醇提取液有明
显的生物碱反应。
何可群等：紫外－可见光分光光度法测定攀茎耳草中总生物碱 5029
湖 北 农 业 科 学 2013 年
2．2 小檗碱、攀茎耳草的紫外吸收光谱
图 1、图 2 表明，小檗碱标准溶液和攀茎耳草样
品溶液的紫外吸收光谱在 270 nm处均有较大吸收。
2．3 方法学考察
小檗碱的线性回归曲线见图 3， 其回归方程为
Y＝0．051 6X＋0．114 1，R2＝0．999 4， 结果表明， 在 0～
53．33 μg ／ mL 范围， 小檗碱浓度与吸光度的线性关
系良好。
2．4 样品中总生物碱含量测定
样品中总生物碱含量的测定结果如表 2 所示。
从表 2 可知，5 份样品平均总生物碱含量为 0.952 5
mg/g，RSD为 0.253%，表明重复性良好。
3 小结
本试验研究了攀茎耳草根皮的紫外光谱及总
生物碱含量。 结果表明，攀茎耳草干燥根皮中总生
物碱含量丰富，达到 0．952 5 mg ／ g。 该结果为民族药
攀茎耳草的药用价值开发及化学成分的深入研究
提供了参考。
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（责任编辑 周有祥）
3.000
2.500
2.000
1.500
1.000
0.500
0
吸
光
度
//a
.u
.
200.0 300.0 400.0 500.0
波长//nm
图 2 攀茎耳草总生物碱提取液的 UV－Vis 光谱
图 1 小檗碱标准品的 UV－Vis 光谱
2.500
2.000
1.500
1.000
0.500
0
吸
光
度
//a
.u
.
200.0 300.0 400.0 500.0
波长//nm
表 2 样品中生物碱含量测定结果
序号
1
2
3
4
5
OD270 nm
2.561
2.575
2.569
2.577
2.573
总生物碱含量// mg/g
0.948 4
0.953 8
0.952 7
0.954 6
0.953 1
平均值// mg/g
0.952 5
RSD//%
0.253
图 3 小檗碱标准品的标准曲线
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
吸
光
度
//a
.u
.
0 10 20 30 40 50 60
浓度//μg/mL
5030