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2.3 对比性实验 见表 4。
表4 对比试验结果
实验项目 最优化条件提取 最优化未加活性剂提取 回流提取
提取率/ % 7.239 6.790 5.666
对比试验结果说明最优化条件提取率高于未加活性剂条
件下的提取率 ,同时远高于回流法 ,高于文献值 6.37%[ 7] , 由此
可见 ,采用表面活性剂法能明显提高黄柏中生物碱的提取率。
3 讨论
从黄柏中提取生物碱的最佳方法为:80%乙醇 , 活性剂为
TW60 ,料液比为 30∶1 ,超声 30 min ,最优先条件提取率高于
未加活性剂条件下的超声提取率 , 同时远高于回流法。
超声波的强烈振动 ,有利于溶剂渗透到药材粉末之中 , 加
速生物碱成分的溶出和扩散 , 对黄柏生物碱提取率有一定的
提高 ,表面活性剂对黄柏生物碱亦有一定的增溶效果 ,两者结
合考虑 , 对生物碱提取率有更大的提高。
关于盐酸小檗碱的含量测定 ,实验中曾取供试品和对照
品溶液在 w aters 液相通过 DAD 多波长检测器检测 , 发现
200 ～ 400 nm 波长范围内 , 两者均在 345 nm 波长处有最大吸
收 , 且为单峰 ,故采用 345 nm 紫外分光光度法定量。
参考文献:
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药科技出版社 , 2010:286～ 287.
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峡药学 , 2008 , 20(6):70～ 71.
(收稿日期:2011-04-01)
兔耳草有效部位的筛选
郭 洁1 , 黄 伟2
(1.陕西中医学院 , 陕西 咸阳 712046;2.陕西国际商贸学院医药学院 , 陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的:筛选兔耳草发挥保肝 、镇痛 、抗炎作用的有
效部位。方法:用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同
的组分 , 通过兔耳草不同组分对 D-半乳糖胺致肝损伤小鼠
的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小
鼠耳肿胀的影响 , 筛选兔耳草发挥保肝 、镇痛以及抗炎作用的
有效部位。结果:兔耳草氯仿提取物和正丁醇提取物为兔耳
草发挥保肝作用的物质基础 , 同时氯仿提取物为兔耳草发挥
镇痛抗炎作用的有效部位。
关键词:兔耳草;有效部位;药理学研究;保肝;镇痛;抗炎
中图分类号:R282.4 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2011)08-0061-02
兔耳草为玄参科植物短管兔耳草(Lagotis brevituba
Max im)的干燥全草 ,为多年生草木植物 , 分布于云南西北部 、
西藏 、四川西北部等海拨 5300 m 的高山草地 。该植物味苦性
寒 , 清热解毒 ,行血调经 , 平逆降压 , 用于治疗肝胆病 、高热 、烦
渴 、肠痧 、炭疽 、疮毒 、伤筋等症。目前 , 藏医用云南兔耳草主
治各种类型的肝炎 , 有较好的疗效[ 1] 。因此推测它有保肝 、镇
痛 、抗炎的作用。目前对于兔耳草药理作用研究很少 ,笔者按
照提取溶剂的不同 , 将兔耳草乙醇提取物分离成兔耳草亲脂
性部位 、兔耳草乙醚提取物 、兔耳草氯仿提取物 、兔耳草正丁
醇提取物 、兔耳草水提物 , 选择小鼠保肝 、镇痛 、抗炎实验 , 比
较各组成分的效果 ,筛选出兔耳草发挥保肝 、镇痛以及抗炎作
用的有效部位。
1 实验材料
1.1 实验动物 ICR雄性小白鼠 , 18 ～ 22 g , 由西安交通大学
实验动物中心提供。合格证书:医动字第 08-004 号。
1.2 实验药物与仪器 将兔耳草亲脂性部位 、兔耳草乙醚提
取物 、兔耳草氯仿提取物 、兔耳草正丁醇提取物 、兔耳草水提
物均用蒸馏水配成 0.5 g(生药)/ mL 。 D-半乳糖胺:由中国
医药集团上海化学试剂公司生产 , 批号:20011211;AS T 、ALT
试剂盒:由中生北控生物科技股份有限公司生产 , 批号
030211;甲醛试剂:西安化学试剂厂生产 , 批号:030410;联苯
双酯 , 由浙江万邦药业有限公司生产 , 生产批号 030402;阿司
匹林 , 由西安制药厂生产 , 批号:030618;二甲苯:西安化学试
剂厂生产 , 批号:20030106;GB-204 电子分析天平 , 瑞士梅特
勒-托利多公司生产;XD811 型生化分析仪 , 上海迅达医疗仪
器中心生产;LD4-2 型低速离心机 , 北京医用离心机厂生产;
CS-3G 型电子计价称 , 抚顺宇辰衡有限公司生产;微量移液
器 、温度计 、恒温水浴锅。
2 实验方法与结果[ 2]
2.1 兔耳草不同组分对 D-半乳糖胺致肝损伤的保护作用
取体重 18 ～ 22 g , ICR种小鼠 80 只 , 雌雄各半 , 随机分为 8
组。分别为模型组 , 空白对照组 , 兔耳草的 5 个不同极性组
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分 , 阳性对照组。模型组和空白对照组每天生理盐水灌胃
0.2 m L/10 g , 其余各组药物每天按表 1 显示剂量灌胃。每天
给药 1 次 , 连续给药7 d , 末次给药1 h 后 ,除空白组外 , 其余各
组动物腹腔注射 D-半乳糖胺 60 mg/ kg造模。 禁食 18 h , 眼
眶取血 , 分离血清 ,用连续检测法测谷丙转氨酶(ALT)和谷草
转氨酶(AS T),结果见表 1。摘取肝脏 , 10%甲醛液固定 ,常规
石蜡包埋 , 切片 ,HE 染色 ,显微镜下观察病理变化。见表 1。
表 1 兔耳草各组分对 D—半乳糖胺引起肝损伤的保护作用(-x ±s)
组别 动物数/只
剂量/
g· kg -1 AST/ U· L
-1 ALT/ U· L-1
模型组 10 — 244.4±93.12 233.9±88.68
空白对照组 10 — 143.7±34.15＊ 72.5±32.25＊＊
石油醚层 10 10 211.4±67.39 146.8±68.15
氯仿层 10 4 160.2±29.73＊ 158±65.03＊
乙酸乙酯层 10 10 222.8±51.52 203.3±130.95
正丁醇层 10 10 184.5±39.59＊ 146.5±52.48＊
水层 10 10 193.5±63.42 214.7±94.03
双环醇组 10 0.01 168.9±34.17＊ 72.5±32.35＊
与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P <0.01
由表 1 可知空白对照组的 AS T 、ALT 水平相对模型组有
显著性差异 , 表明 D-半乳糖胺肝损伤模型建造成功。兔耳
草正丁醇组及氯仿组可使血清 ALT 和 AST 显著降低 , 提示
兔耳草正丁醇部位和氯仿位部位可能为其保肝作用的有效
部位。
2.2 兔耳草不同组分对热板法引起小鼠疼痛的影响 选用
18 ～ 22 g , 雌性 ICR种小鼠进行实验 , 采用热板法 , 热板温度
为(55±0.5)℃, 给药前先测定各鼠的正常痛反应作为基础痛
阈(放入热板至小鼠舔后足时间 ,若小于 5 s 或超出 30 s ,则弃
之),共筛得合格小鼠 70 只 , 将其随机分成 7 组 , 每组 10 只 ,
分别为空白对照组 、兔耳草的五个极性组分 、阿司匹林组。空
白对照组每天生理盐水灌胃 0.2 mL/ 10 g , 其余各组药物每天
按表 2 显示剂量灌胃。每天给药 1 次 , 连续给药 7 d。分别在
末次给药后 30 , 60 , 90 min 时间段用热板仪测定小鼠出现舔
足的时间 , 超过 60 s 不舔足者按 60 s 计。计算给药后痛阈平
均值 , 并与空白对照组比较 , 观察各组的镇痛作用。结果见
表 2。
表 2 兔耳草不同组分对热板法引起疼痛的影响(-x ±s)
组别 动物数/只
剂量/
g · kg-1
痛阈值/S
30 min 60 min 90 min
空白对照组 10 — 29.48±13.97 30.44±9.443 29.05±12.56
石油醚层 10 10 32.39±11.74 37.81±17.66 35.03±10.77
氯仿层 10 4 32.72±12.59＊ 38.74±15.74＊ 35.79±16.32＊
乙酸乙酯层 10 10 35.79±9.515 37.85±18.63 36.82±13.8
正丁醇层 10 10 33.48±9.893 37.5±16.28 34.44±17.41
水层 10 10 32.8±9.303 37.38±9.998 34.02±17.2
阿匹斯林组 10 0.2 41.07±16.6＊＊ 37.28±6.867＊＊ 38.94±12.57＊＊
与空白对照组比较 ,＊ P<0.05 , ＊＊ P<0.01
结果显示 , 兔耳草氯仿提取物可显著性提高小鼠的痛阈。
表明兔耳草氯仿提取物可能为兔耳草产生镇痛作用的有效
部位。
2.3 兔耳草抗炎作用有效部位的药理学筛选 取体重 18 ～
22 g , IC R种小鼠 70 只 , 雌雄各半 , 随机分为 7 组。分别为空
白对照组 、兔耳草的五个极性组分 、阳性对照组。空白对照组
每天生理盐水灌胃 0.2 mL/ 10 g ,其余各组药物每天按表 3 显
示剂量灌胃。各组每日给药一次 ,连续给药 7 天 , 末次给药后
1 h 后 ,每只小鼠右耳廓正反两面用 50 u L微量移液器涂 0.05
m L二甲苯致炎 , 左耳做对照 , 15 min后脱颈处死小鼠 ,沿耳廓
基部剪下两耳 , 用 6 mm 打孔器分别在同一部位打下圆耳片 ,
以电子天平称重 , 两耳重量之差为肿胀度。 观察各组药物对
二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的抑制作用。实验结果见表 3。
表 3 兔耳草不同组分对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响(-x ±s)
组别 动物数/只 剂量/ g 生药· kg -1 肿胀度/ g
空白对照组 10 — 0.015±0.009
石油醚层 10 10 0.012±0.010
氯仿层 10 4 0.005±0.002＊＊
乙酸乙酯层 10 10 0.012±0.008
正丁醇层 10 10 0.016±0.013
水层 10 10 0.019±0.013
阿斯匹林组 10 0.2 0.008±0.005＊
与空白对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P <0.01
小鼠右耳用二甲苯致炎后明显肿胀 , 以肿胀度作为指标 ,
结果显示 , 兔耳草氯仿对小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用 , 选用
耳肿胀度为指标 ,初步筛选出兔耳草抗炎作用的有效部位为
氯仿提取物。
3 讨论
对于兔耳草药理作用研究目前很少 , 笔者根据民间用药
经验 , 确定研究指标 ,将对兔耳草化学成分的研究和药理作用
的研究相结合 , 以药理学研究手段筛选兔耳草的有效部位。
通过实验证实 , 兔耳草氯仿层为兔耳草发挥保肝 、镇痛 、抗炎
作用的有效部位 。其有效成分应从氯仿中进一步分离。至于
有效成分的确定有待进一步研究。
参考文献:
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(收稿日期:2011-04-15)
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