全 文 ：第 35 卷　第 10期 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vo l. 35 No. 10
2007 年 10 月 Journal o f No rthw est A & F Unive rsity(Nat. Sci. Ed.) Oct. 2007
葡萄风信子基因转化受体系统的建立*
许　胜 ,王　飞 ,刘雅莉
(西北农林科技大学园艺学院 ,陕西 杨凌 712100)
[ 摘　要] 　以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种“紫葡萄”(Canta t)的鳞茎和叶片为外植体 , 通过植物组
织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验 , 建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。 结果表明 ,葡萄风信子
的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为 MS +0. 6 mg / L 2 , 4-D +0. 1
mg /L 6-BA , 其诱导频率可达 100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为 MS+3. 0 mg /L 2 , 4-D +0. 3 mg / L 6-BA , 其
诱导频率达 91. 2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为 MS+2. 0 mg / L 6-BA+0. 1 mg /L NAA , 生根最适培养基
为1 /2 MS+1. 0 mg / L 6-BA+0. 1% AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为 60 mg / L , 羧苄青霉素的适宜质量浓度为
300 mg /L 。
[ 关键词] 　葡萄风信子;遗传转化;受体系统;抗生素
[ 中图分类号] 　S682. 2 +9 [文献标识码] 　A [ 文章编号] 　1671-9387(2007)10-0071-06
Construction of gene transformation acceptor
system in Muscari botryoides
XU Sheng ,WANG Fei , LIU Ya-li
(Col leg e o f Hort iculture , Northwest A &F Universi ty ,Y ang lin g , Shaanx i 712100 , Ch ina)
Abstract:In this study , bulbs and leaves of g rape hyacinthus o rientalis “Cantat” were used fo r ex-
plants , a high - frequency regene rat ion sy stem by plant t issue culture w as established , the experiment about
ant ibio tic sensit ivities w ere conducted , and a stably-perfo rming and high-eff iciency accepto r system for the
gene t ransformation of grape hyacinthus o rientalis leaves w ere established. The resul ts show ed abundant
callus could be induced from the bulbs and leaves of g rape hyacinthus o rientalis explants. The optimum me-
dium for inducing callus f rom leaves w as M S+0. 6 mg /L 2 , 4-D + 0. 1mg /L 6-BA , and i ts induction f re-
quency could reach 100%;the combination o f MS+3. 0 mg /L 2 ,4-D +0. 3 mg /L 6-BA was the appropri-
a te medium fo r bulbs forming callus w ith the induction rate 91. 2%. The best medium for inducing advent i-
tious buds f rom callus w as MS+2. 0 mg /L 6-BA +0. 1 mg /L NAA. The medium of 1 /2 M S+1. 0 mg /L 6-
BA +0. 1%AC was sui table for ro oting. Wha ts more , the concentrations of the antibio tics of test-tube pla-
nt lets in thei r culture s w ere also de termined;the quali ty concentration of kanamycin w as 60 mg /L and the
quali ty concentration of carbenicil lin w as 300 mg /L.
Key words:Muscari botryoides;gene t ransformation;acceptor sy stem ;antibio tic
　　葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)属百合 科蓝壶花属植物 ,别名兰壶花 、葡萄百合 ,为多年生
*[收稿日期] 　2006-09-25
[基金项目] 　陕西省科技攻关项目“花卉新品种引进与示范”(2002 k03-G7-4)
[作者简介] 　许　胜(1981 -),男 ,陕西长安人 ,在读硕士 ,主要从事果树生物技术研究。
[通讯作者] 　王　飞(1954 -),女 ,陕西白水人 ,教授,主要从事果树及花卉生理与生物技术育种研究。
E-mail:xnw angfei521@126. com
DOI牶牨牥牣牨牫牪牥牱牤j牣cnki牣jnwafu牣牪牥牥牱牣牨牥牣牥牨牪
草本球根花卉。葡萄风信子花期早 ,开放时间长 ,是
良好的林下地被花卉 ,既适于盆栽观赏与切花 ,又能
在园林绿地中栽培[ 1] 。
现栽培的葡萄风信子多为人工杂交品种 ,由于
花色单一 ,多开白花与紫花 ,远远不能满足人们对葡
萄风信子花颜色多样性的要求 。通过基因工程技术
将已克隆到的红色基因转移到葡萄风信子中 ,可以
得到开红花的葡萄风信子新种质或新品种[ 2] ,而高
效稳定且再生能力强的植物受体系统 ,是实现基因
转化的前提。关于葡萄风信子的组织培养已有相关
报道[ 3-4] ,但是至今未见关于基因转化的高频再生体
系的研究报道。本试验以生产中广泛栽植的葡萄风
信子品种“紫葡萄”(Cantat)为试验材料 ,建立了葡
萄风信子基因转化的受体系统 ,以期为快繁与基因
转化获得花色改良葡萄风信子品种奠定基础 。
1　材料与方法
1. 1　材　料
1. 1. 1　葡萄风信子与农杆菌　供试葡萄风信子品
种为“紫葡萄”(Cantat),由西安植物园赠送。农杆
菌 EHA105由西北园艺植物种质资源与遗传改良
重点实验室保存 ,含有中间表达载体 PR707 质粒 ,
该质粒含有GUS报告基因和 N TP-Ⅱ(新霉素磷酸
转移酶基因)选择标记基因。
1. 1. 2　试　剂　卡那霉素 、羧苄青霉素 、盐酸硫胺
素(B1)、盐酸吡哆素 、(VB6)奈乙酸(NAA)6-苄基
腺嘌呤(6-BA)、2 , 4-二氯苯氧乙酸(2 ,4-D)均购自上
海生工。其他药品为国产分析纯。
1. 2　葡萄风信子叶片与鳞茎愈伤组织的诱导
试验于 2005-05 ～ 2006-08 在农业部西北园艺
植物种质资源与遗传改良重点实验室进行。将葡萄
风信子鳞茎剥开与叶片一起用自来水冲洗2 h ,然后
在超净工作台上用体积分数 70%乙醇浸泡 30 s ,用
无菌水冲洗3次 ,再用 1 g /L 的升汞消毒 10 min ,最
后用无菌水冲洗 5次 。将消毒好的鳞茎与叶片切成
1 cm2 左右的小块 ,叶片背面或鳞茎凸面朝下接种 ,
每瓶接 4 ～ 5块 ,每处理重复 2次 ,每重复接 12瓶。
愈伤组织诱导采用的基本培养基为附加不同质量浓
度的 2 , 4-D(0. 6 ,1. 0 , 1. 5 , 2. 0和 3. 0 mg /L)和 6-
BA(0. 1和 0. 3 mg /L),并加 30 g /L 蔗糖和6. 0 g /L
琼脂的 MS 培养基 , PH 5. 8 ～ 6. 0 。25 ℃暗培养 5
d , 35 d后统计外植体形成的愈伤组织块数。
1. 3　葡萄风信子愈伤组织不定芽的诱导
将大块愈伤组织切成 1 cm3 左右小块 ,接种于
含有 MS 培养基(添加不同质量浓度 6-BA(1. 0 ,
1. 5 ,2. 0 , 3. 0 和 4. 0 mg /L)和 NAA(0. 1 和 0. 3
mg /L))的培养瓶中 ,进行不定芽诱导。每瓶接种
3 ～ 4块 ,每处理重复 3次 ,每重复 10瓶 。于 25 ℃,
光强 3 000 lx 、每天光照12 h条件下培养 ,20 d继代
1次 ,不定期进行观察 ,及时剔除被污染的培养瓶。
1. 4　葡萄风信子叶片的卡那霉素抗性筛选
以筛选出的愈伤组织不定芽诱导培养基为基本
培养基 ,附加不同质量浓度 (0 , 10 , 20 , 30 , 40 , 50 ,
60 ,70和 80 mg /L)的卡那霉素组成筛选培养基 ,将
无菌苗的叶片切成 1 cm2 左右的小块 ,接种在含有
上述筛选培养基的培养瓶中 ,每种卡那霉素浓度设
3个重复 ,每重复 10瓶 ,每瓶接种叶片 4 ～ 6块 。继
续培养 ,不定期观察 ,35 d后统计抗性筛选结果 ,筛
选葡萄风信子愈伤组织对卡那霉素耐受的临界浓
度。
1. 5　葡萄风信子叶片羧苄青霉素的敏感性试验
选取健壮的试管苗叶片 ,切成 1 cm 左右的小
块 ,在农杆菌 EHA105 菌液(OD=0. 4)中浸染 10
min ,用无菌滤纸将叶片表面的菌液吸干 ,接种到
MS+0. 6 mg /L 2 , 4-D +0. 1 mg /L 6-BA 培养基 ,
共培养 3 d ,转入含不同质量浓度羧苄青霉素(0 ,
100 ,200 ,300 , 400 和 500 mg /L)的上述培养基上 ,
每种羧苄青霉素浓度重复 10瓶 ,每瓶接种叶片 6 ～
8块 ,不定期进行观察。
1. 6　葡萄风信子的不定芽生根培养
当分化的葡萄风信子小苗长到 3 cm 左右时 ,将
其切下 ,转入生根培养基中诱导生根 。试验重复 3
次 ,每重复 20株不定芽 。生根培养基为 1 /2MS +1
g /L 活性碳+不同质量浓度 (0. 5和 1. 0 mg /L)的
6-BA 。继续培养 ,不定期观察 ,30 d 后统计生根结
果。
2　结果与分析
2. 1　葡萄风信子叶片愈伤组织的诱导
叶片培养 20 d左右就可产生黄绿色的愈伤组
织 ,随后愈伤组织逐渐长大 ,30 d后愈伤组织的统计
结果见表 1。从表 1可以看出 ,以葡萄风信子叶片
为外植体进行培养时 ,在所有供试培养基上均能诱
导出愈伤组织 ,但是诱导率不同 ,1 号培养基诱导率
最高 ,与其他培养基差异极显著(P <0. 01);2号培
养基的诱导效果也不错 ,诱导率达到了 85. 7%,极
显著高于其他培养基的诱导率(P<0. 01);5号培养
基的诱导率最低 ,只有 55. 2%;1 ～ 5号培养基随着
72 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第 35 卷
2 ,4-D浓度的升高 ,叶片愈伤组织诱导率呈下降趋
势;6 ～ 10号培养基随着 2 , 4-D 浓度升高 ,叶片愈伤
组织诱导率呈先上升后下降的趋势 。叶片诱导愈伤
组织的最适培养基为:MS+0. 6 mg /L 2 , 4-D +0. 1
mg /L 6-BA ,其诱导频率可达 100%。本试验还观
察到 ,在愈伤组织上偶尔有不定芽产生(图 1)。
表 1　不同培养基对葡萄风信子叶片愈伤组织诱导的影响
Table 1　Effec t o f different media on callus induced fr om leaves o f g rape hyacinth
培养基编号
No. of m edia
2 , 4-D /(mg L - 1) 6-BA /(mg L- 1) 接种外植体数
No. of ex plan ts
形成愈伤外植体数
No. of explants
fo rming cal lus
愈伤组织诱导率
Frequen cy of
callu s induct ion
1 0. 6 0. 1 108 108 100 a A
2 1. 0 0. 1 112 96 85. 7 b B
3 1. 5 0. 1 110 80 72. 7 cde CD
4 2. 0 0. 1 108 80 74. 1 cd CD
5 3. 0 0. 1 116 64 55. 2 g F
6 0. 6 0. 3 114 82 71. 9 de CD
7 1. 0 0. 3 114 86 75. 4 c C
8 1. 5 0. 3 108 76 70. 4 e D
9 2. 0 0. 3 100 72 72. 0 d e CD
10 3. 0 0. 3 112 68 60. 7 f E
　　注:同列数据后标不同小写字母者表示差异显著(P<0. 05);标不同大写字母者表示差异极显著(P<0. 01)。下表同。
Note:Dif feren t sm all let ters behind the same colum mean sig ni fican t di ff erence (P<0. 05);dif feren t capital let ters mean ex t remely signifi-
can t dif feren ce (P<0. 05). The same as below tables.
2. 2　葡萄风信子鳞茎愈伤组织的诱导
葡萄风信子鳞茎培养 15 d左右就可产生淡黄
色的结构疏松的愈伤组织(图 2),至 25 d 时愈伤组
织体积迅速增大 。不同培养基对葡萄风信子鳞茎愈
伤组织诱导的影响结果见表 2。
图 1　葡萄风信子叶片形成的愈伤组织
Fig. 1　Callus induced from leaves of g rape hyacinth
图 2　葡萄风信子鳞茎形成的愈伤组织
F ig . 2　Callus induced f rom bulbs o f g rape hyacinth
表 2　不同培养基对葡萄风信子鳞茎愈伤组织诱导的影响
Table 2　Effect o f different media on callus induced f rom bulbs o f g rape hyacinth
培养基编号
No. of m edia
2 , 4-D /(mg L - 1) 6-BA /(mg L- 1) 接种外植体数
No. of ex plan ts
形成愈伤外植体数
No. of explants
fo rming cal lus
愈伤组织诱导率
Frequen cy of
callu s induct ion
1 0. 6 0. 1 120 80 66. 7 f E
2 1. 0 0. 1 96 68 70. 8 e E
3 1. 5 0. 1 116 92 79. 3 cd CD
4 2. 0 0. 1 102 78 76. 5 d D
5 3. 0 0. 1 120 102 85. 0 b B
6 0. 6 0. 3 116 56 48. 3 g F
7 1. 0 0. 3 112 80 71. 4 e E
8 1. 5 0. 3 116 80 69. 0 ef E
9 2. 0 0. 3 118 96 81. 4 c BC
10 3. 0 0. 3 114 104 91. 2 a A
73第 10 期 许　胜等:葡萄风信子基因转化受体系统的建立
　　从表 2可以看出 ,以葡萄风信子鳞茎为外植体
进行培养时 ,所有培养基上均能诱导出愈伤组织 ,但
诱导率不同 ,以 10 号和 5 号培养基的诱导效果较
好 ,诱导率分别达到了 91. 2%和 85. 0%,均极显著
地高于除 9号以外的其他培养基(P <0. 05)。6号
培养基的诱导频率最低 ,仅为 48. 3%。由表 2还可
看出 ,在 6-BA 质量浓度相同的情况下 ,随 2 ,4-D质
量浓度上升 ,鳞茎愈伤组织诱导率呈上升趋势。鳞
茎诱导愈伤组织的最适培养基为:MS +3. 0 mg /L
2 ,4-D+0. 3 mg /L 6-BA ,其诱导频率达91. 2%。
2. 3　葡萄风信子愈伤组织不定芽的诱导
葡萄风信子愈伤组织培养 14 d左右 ,就可观察
到有小的不定芽突起产生 ,30 d就能分化出较多的
不定芽(图 3)。从表 3 可以看出 ,葡萄风信子愈伤
组织在 10种基本培养基上均能分化出不定芽 ,但不
定芽分化率存在明显差异 ,其中以 8号和 3 号培养
基分化率较高 ,分别达到 97. 4%和 90. 0%,且与其
他培养基的分化率均到达极显著差异(P <0. 01)。
1号培养基对葡萄风信子愈伤组织不定芽的分化效
果最差 ,分化率仅为 29. 1%;2和 7号培养基不定芽
分化率差异不显著(P<0. 05),说明当 6-BA 质量浓
度为 1. 5 mg /L 时 , 0. 1 mg /L 的 NAA 和 0. 3 g /L
的 NAA 对不定芽分化没有显著影响 , 1号与 6号
培养基的不定芽的诱导率差异极显著(P<0. 01)。
表 3说明 , 6-BA 和 NAA这两种植物生长调节剂是
影响葡萄风信子不定芽分化的关键因素 。愈伤组织
分化不定芽的最适培养基为 MS+2. 0 mg /L 6-BA
+0. 1 mg /L NAA 。
表 3　不同培养基对葡萄风信子愈伤组织分化不定芽的影响
Table 3　Effect of different media on adventitio us buds induced fr om callus o f gr ape hyacinth
培养基编号
No. of media
6-BA /(mg L - 1) NAA /(m g L - 1)
接种的愈伤
组织数
No. of explants
形成不定芽的
愈伤组织数
No. of explants
forming bud s
不定芽分化率 /%
Dif ferent iation
rate
1 1. 0 0. 1 117 34 29. 1 f E
2 1. 5 0. 1 114 60 52. 6 d C
3 2. 0 0. 1 120 108 90. 0 b A
4 3. 0 0. 1 117 87 74. 4 c B
5 4. 0 0. 1 108 46 42. 6 e D
6 1. 0 0. 3 120 50 41. 7 e D
7 1. 5 0. 3 120 65 54. 2 d C
8 2. 0 0. 3 117 114 97. 4 a A
9 3. 0 0. 3 120 85 70. 8 c B
10 4. 0 0. 3 120 44 36. 7 e DE
图 3　葡萄风信子愈伤组织分化的不定芽
Fig . 3　Adventitious buds induced from
callus o f g rape hyacinth
2. 4　卡那霉素临界浓度的确定
结果显示 ,在培养的前 15 d 内 ,葡萄风信子叶
片未见异常变化 ,培养 20 d后叶片逐渐出现褐化现
象 ,随着卡那霉素浓度的升高褐化也越明显 ,最后外
植体逐渐死亡 。由表 4可以看出 ,随卡那霉素质量
浓度的升高 ,葡萄风信子叶片愈伤组织的诱导率逐
渐降低 ,当卡那霉素的质量浓度达到 50 mg /L 时 ,
愈伤组织诱导率仅为 5%,当卡那霉素质量浓度达
到 60 mg /L时 ,诱导率为 0 ,叶片的愈伤组织全部褐
化死亡(图 4)。而在没有添加卡那霉素的培养基
上 ,葡萄风信子叶片均能正常产生愈伤组织(图 5)。
因此 ,确定卡那霉素的临界质量浓度为 60 mg /L。
图 4　60 mg /L 卡那霉素对葡萄风信子的筛选结果
Fig . 4　Selcttio n re sults o f 60 mg /L kan-resistant
against g rape hyacinty
74 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第 35 卷
表 4　卡那霉素对葡萄风信子愈伤组织诱导的影响
Table 4　Effect of different concentration o f kanamycin on fo rming ca llus
卡那霉素浓度 /(mg L- 1)
C on cen t rat ion of kanamy cin
外植体数
No. of explants
形成愈伤的外植体数
No. of exp lan ts forming callus
愈伤组织诱导率 /%
Frequency of ex plan ts indu ct ion
0 42 42 100
10 43 36 83. 7
20 38 20 52. 6
30 43 11 25. 6
40 40 5 12. 8
50 40 2 5
60 42 0 0
70 40 0 0
图 5　0 mg /L 卡那霉素对葡萄风信子的筛选结果
Fig. 5　Selection results of 0 mgoL - 1 kanamycin-r esistant
against g rape hyacinth
2. 5　羧苄青霉素临界浓度的确定
结果表明 ,在没有加羧苄青霉素的培养基上 ,叶
片在 EHA105菌液中浸泡 8 min ,周围均有大量农
杆菌菌斑将整个叶片包埋(图 6A);在羧苄青霉素质
量浓度为 100和 200 mg /L 的培养基上 ,菌斑大小
均明显比未添加羧苄青霉素的小 ,数量也少(图 6B ,
C);在羧苄青霉素质量浓度为 300 mg /L 的培养基
上 ,叶片周围没有农杆菌菌斑 ,并且愈伤组织未出现
褐化现象(图 6D);当羧苄青霉素的质量浓度≥400
mg /L 时 ,虽然叶片周围没有农杆菌长出 ,但是叶片
开始出现褐化 ,最后停止生长 , 慢慢死亡(图 6E)。
因此 ,葡萄风信子叶片作为农杆菌介导的基因转化
材料时 , 羧苄青霉素的临界质量浓度应为 300
mg /L。
图 6　葡萄风信子愈伤组织和农杆菌的影响
A ～ E.羧苄青霉素的质量浓度分别为 0 , 100 , 200 , 300和 400 mg /L
Fig . 6　Effect of ag r obacte rium and callus o f gr ape hyacinth
A - E. The quality concent rat ion of carbenicillin i s 0 , 100 , 200 , 300 and 400 mg /L , respectively.
75第 10 期 许　胜等:葡萄风信子基因转化受体系统的建立
2. 6　葡萄风信子不定芽的诱导生根
由表 5可知 ,6-BA 对葡萄风信子的生根具有良
好地促进作用 ,当 6-BA 的质量浓度为 1. 0 mg /L
时 ,葡萄风信子的生根率达到 81. 7%,而且根长得粗 、
壮 ,平均每棵不定芽生根数达到 6 ～ 8条。生根最适
培养基为 1 /2 MS+1. 0 mg /L 6-BA +0. 1%AC
表 5　IBA 对葡萄风信子试管苗生根的影响
Table 5　Effect o f IBA on the ro otag e of test-tube plantlets o f g rape hyacinth
培养基编号
No. of m edia
6-BA /(mg L - 1)
不定芽数
No. of adven tit ious
buds
生根芽数
No. of rootage
b uds
生根率 /%
Rootage rate
每株生根数
No. of root s
per sh oot
根的长势
Grow th
situation
1 0. 5 60 25 41. 7 1～ 2 细 ,短
2 1. 0 60 49 81. 7 6～ 8 粗 ,壮
3　讨　论
以愈伤组织为再生体系建立的基因转化受体系
统与直接分化受体系统相比 ,其外植体细胞经历了
脱分化和再分化两个过程 ,使已分化的细胞均回复
到脱分化的分生细胞水平 ,易于接受外源基因 ,因此
转化率较高。王关林等[ 5] 认为 ,用于基因转化的受
体系统应该具有 80%～ 90%以上的再生频率 ,并且
每块外植体上必须能再生出丛生芽 ,其芽数量越多
越好 。在葡萄风信子的离体再生过程中 ,叶片和鳞
茎很容易诱导获得胚性愈伤组织 ,进而分化出不定
芽 ,这就为葡萄风信子的遗传转化奠定了基础。王
飞等[ 3] 对葡萄风信子叶片离体再生进行了研究 ,取
得了理想的结果 , 但芽的再生频率较低 , 只有
27. 3%。Cumming 等[ 4] 以葡萄风信子的鳞茎为外植
体 ,获得了不定芽 ,但再生频率只有 26. 5%,远远达
不到遗传转化的要求。本研究通过反复试验 ,使葡
萄风信子的叶片和鳞茎愈伤组织诱导率分别达到了
100%和 91. 2%,不定芽分化率达到了 97. 4%,为其
遗传转化奠定了基础 。
葡萄风信子属于单子叶植物 ,在对其进行愈伤
组织和不定芽诱导时 ,常在培养基中添加 2 ,4-D 、6-
BA 和 NAA 。这是因为低质量浓度的 2 , 4-D 有利
于胚状体的分化 , NAA 有利于单子叶植物的分
化[ 6] , 6-BA对茎芽的形成有很好的效果 。丁路明等
发现[ 7] ,在禾本科植物早熟禾的组织培养中使用 2 ,
4-D和 6-BA ,愈伤组织诱导率比单独使用 2 ,4-D时
高 ,而且出现淡黄色 、易分化的不定芽颗粒状愈伤组
织的比率也较高 。本试验以 0. 6 mg /L 2 ,4-D配合
0. 1 mg /L 6-BA ,使葡萄风信子叶片的愈伤组织诱
导率达到了 100%, 确定了葡萄风信子叶片愈伤组
织诱导的最佳培养基为 MS+0. 6 mg /L 2 ,4-D +
0. 1 mg /L 6-BA ,鳞茎愈伤组织诱导的最佳培养基
为 MS+3. 0 mg /L 2 ,4-D +0. 3 mg /L 6-BA ,不定
芽诱导的最佳培养基为 MS +6-2. 0 mg /L BA +
0. 1 mg /L NAA 。
本试验还发现 ,葡萄风信子较容易生根 ,当不定
芽分化并长至 2 ～ 3 cm 时就已经有根长出 ,进而对
其进行诱导生根 ,根生长健壮。生根时采用无机盐
减半的 1 /2M S+1. 0 mg /L 6-BA+0. 1%活性炭培
养基的效果好 ,有利于根的生长。
对于大多数单子叶植物来说 ,依靠农杆菌介导
的遗传转化 ,虽然在某些植物上取得了成功[ 8-11] ,但
因农杆菌对单子叶植物不敏感 ,仍存在转化率低和
转化不稳定的问题 ,需进一步改进。本试验对单子
叶植物葡萄风信子的遗传转化进行了初步研究 ,无论
是从愈伤组织和不定芽的诱导频率 ,还是不定芽诱导
生根来看 ,均取得了较理想的效果 ,试验证明了葡萄
风信子依靠农杆菌介导的遗传转化是可行的。
[参考文献]
[ 1] 　北京林业大学园林系花卉教研组.花卉学[ M] .北京:中国林业
出版社 , 1990:376.
[ 2] 　王关林 ,方宏筠.植物基因工程原理与技术[ M] . 北京:科学出
版社 , 1998:52.
[ 3] 　王　飞 ,许　胜 ,牛秀玲.葡萄风信子叶片 ,鳞茎不定芽再生体
系的建立[ J] .西北农业学报 , 2006 , 15(3):149-152.
[ 4] 　C umming B G , Peck D E. Tissue cu lture of G rape hyacinth[ J] .
Hort S cience ,1984 , 19(5):723-724.
[ 5] 　王关林 ,方宏筠.植物基因工程[ M] . 2版.北京:科学出版社 ,
2002:345-347.
[ 6] 　曹孜义 ,刘国民.实用植物组织培养技术教程[ M ] . 兰州:甘肃
科学技术出版社 , 2003:14-15.
[ 7] 　丁路明 ,龙瑞军 ,朱铁霞. 2 , 4-D 和 6-BA 对早熟禾愈伤组织诱
导的影响[ J] .草原与草坪 , 2003(1):34-37.
[ 8] 　刘石泉, 余沛涛. 农杆菌介导高等植物基因转化的影响因
素[ J] .科技进展 , 2003 , 25(1):16-21.
[ 9] 　Langeveld S A ,Gerrit s M M , Anton F L M , et al. Transforma-
t ion of Lily by agrobacterium[ J] . Eu phytica , 1995 , 85:97-100.
[ 10] 　Hoshi Y , Kondo M , Mori S , et al . Produ ction of t rans genic
Li ly plants by agrobacterium-m ediated transformation[ J ] .
Plant Cel l Rep , 2004 , 22:359-364.
[ 11] 　唐东芹 ,钱虹妹 ,唐克轩 ,等.根癌农杆菌介导半夏凝集素基因
pBIXPTA 对百合的转化[ J] . 上海交通大学学报:农业科学
版 , 2004 , 22(2):135-137.
76 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第 35 卷