全 文 ：第３３卷第５期
２０１４年１０月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．５
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１４
响应面法优化孔石莼多糖提取工艺△
＊
徐翠翠１，孔浩１，郭庆梅１＊，周凤琴１，王中华１，张百霞３，王长云２
（１．山东中医药大学药学院，山东 济南２５０３５５；２．中国海洋大学医药学院，山东 青岛２６６１００；
３．北京中医药大学中药学院，北京１０００２９）
摘　要：目的 以响应面分析法优化孔石莼水溶性多糖提取工艺。方法 以多糖得率为响应值，考察提取温度、
提取时间、料液比对孔石莼多糖提取率的影响。在单因素试验的基础上，利用Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合试验和
响应面分析法，对孔石莼多糖提取工艺参数进行优化分析。结果 孔石莼多糖提取的最优工艺条件为：提取温
度９１℃，提取时间１．１ｈ，料液比１∶２１。提取３次后，多糖得率为１０．１９％。结论 实测值与响应曲面法回归
模型的预测值接近，与模型高度拟合，该工艺简洁，得率较高，可用于孔石莼多糖的提取。
关键词：孔石莼；多糖；响应曲面法；提取工艺
中图分类号：Ｒ９３１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１４）０５－０３７－０６
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ
Ｋｊｅｌｍ．ｕｓｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ
ＸＵ　Ｃｕｉ－ｃｕｉ　１，ＫＯＮＧ　Ｈａｏ１，ＧＵＯ　Ｑｉｎｇ－ｍｅｉ　１＊，ＺＨＯＵ　Ｆｅｎｇ－ｑｉｎ１，ＷＡＮＧ　Ｚｈｏｎｇ－ｈｕａ１，
ＺＨＡＮＧ　Ｂａｉ－ｘｉａ３，ＷＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｙｕｎ２
１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｎａｎ２５０３５５，Ｃｈｉｎａ
２．Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６１００，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．．
Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．ａｓ　ｔｈｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｖａｌｕｅ，
ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｘ－
ｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｗａｔｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ　ｃｅｎｔｅｒ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｒｅ－
ｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　９０．７℃，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　５．１４ｈ，ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ
ｗａｔｅｒ　ｒａｔｉｏ　１∶２１（ｇ／ｍＬ）．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　ｋｊｅｌｌｍ
ｗａｓ　ｕｐ　ｔｏ　１１．１２％ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅｅ－ｔｉｍｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｖａｌｕｅ　ｉｓ　ｃｌｏｓｅｄ　ｔｏ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｈａｓ　ｇｏｏｄ　ｆｉｔｔｉｎｇ　ｄｅｇｒｅｅ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ
ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｆａｓｔ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｙｉｅｌｄ，ｓｏ　ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
＊ △基金项目：国家高技术研究发展计划 （２０１３ＡＡ０９３００１）资助
　作者简介：徐翠翠（１９８７－），女，硕士研究生，研究方向为中药质量控制与资源研究。Ｔｅｌ：１８７６５３１１６３９Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｔｏｕｅｒ＠１６３．ｃｏｍ
＊通讯作者：郭庆梅，女，博士生导师，从事中药质量控制与资源研究方面的工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｍｇｕｏ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
　　收稿日期：２０１４－０３－１３
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2014.05.006
３８　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
　　孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．）为渤海和黄海
最为常见的１种野生绿藻，广泛分布在辽宁、河
北、山东和江苏等沿海［１］。孔石莼化学组分主要
有多糖、脂类、蛋白质等，其中多糖含量较高，具有
降血脂［２］、抗氧化［３］、抗病毒［４］、抗肿瘤［５］、增强免
疫力［６］等作用。据《中国海洋药物辞典》记载，孔
石莼具有软坚散结、利水消肿之功效，可用于治疗
甲状腺肿大、水肿、高血压等症状。目前，孔石莼
多糖的热水提取工艺研究多采用正交试验法［７］，
响应曲面法与以往采用的正交试验方法不同，它
能在给出的整个区域内找到因素和响应值之间的
１个明确的函数表达式即回归方程，从而找到整个
区域内因素的最佳组合和响应值的最优值。本实
验旨在用响应曲面法探讨孔石莼水溶性多糖最佳
提取工艺，为孔石莼多糖的工业化生产及资源合
理开发利用提供依据和参考。
１　材料与试剂
１．１　材料
孔石莼２０１３年１２月采于青岛灵山岛海边，
经山东中医药大学周凤琴教授鉴定，为石莼科植
物孔石莼Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ．的藻体。晒干，粉
碎，备用。
１．２　仪器与试剂
ＵＶ－３０１０Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ紫外可见分光
光度计（ＨＩ－ＴＡＣＨＩ），１０１－（１）Ａ数显式电热恒温
干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司），ＦＡ１１０４型
电子天平（上海天平仪器厂），ＤＥＫＷ－４型恒温水
浴锅（河北黄骅综合电器厂），ＳＨＤ－ＩＩＩ型循环水式
真空泵（上海汗诺仪器有限公司）。苯酚、硫酸等
试剂为国产分析纯。
２　方法
２．１　多糖的提取
精密称取干燥孔石莼粉末１．０ｇ（４０目筛），置
于恒温水浴锅中，按实验方案提取，抽滤，定容至
１００ｍＬ。取２ｍＬ加６ｍＬ无水乙醇进行醇沉，
４℃过夜，３　０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，沉淀挥至无醇
味，加热水溶解，定容至２５ｍＬ容量瓶中，得多糖
提取液。
２．２　标准曲线的制备
将葡萄糖于１０５ ℃干燥至恒重，精密称取
０．２５０　０ｇ至５００ｍＬ容量瓶中，用蒸馏水溶解并
定容至刻度，得质量分数０．５ｍｇ·ｍＬ－１的标准品
母液。分别精密量取对照品溶液０、１．０、２．０、３．０、
４．０、５．０ｍＬ置２５ｍＬ容量瓶中，用蒸馏水稀释并
定容至刻度，得浓度为０、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、
０．１０ｍｇ·ｍＬ－１的标准品溶液，分别精密吸取上
述各浓度的标准品溶液１ｍＬ，分别加入６％苯酚
溶液１ｍＬ、浓硫酸５ｍＬ，混匀，显色２０ｍｉｎ；以蒸
馏水作为空白对照，于４９０ｎｍ处测定吸光度值，
以葡萄糖的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制
标准曲线。
２．３　单因素试验
以多糖得率为考察指标，按照２．１项下方法
提取后按２．２项下方法进行显色测定。分别以不
同提取温度（Ａ）、料液比（Ｂ）、提取时间（Ｃ）考察对
多糖得率的影响。
２．４　响应面优化试验设计
根据响应面分析软件 Ｄｅｓｉｇｎ　Ｅｘｐｅｒｔ　８．０．５
所提供的Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ模型，设提取温度（Ａ）、提
取时间（Ｂ）、料液比（Ｃ）为自变量，多糖得率为响应
值，设计三因素三水平的试验，共１７个试验点的
响应面分析试验，并利用软件对试验数据进行回
归分析。
表１　响应面因素水平编码表
Ｔａｂｌｅ　１　Ｖａｒｉａｂｌｅｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ－ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ－ｌｅｖｅｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｄｅｓｉｇｎ
因素
Ｆａｃｔｏｒｓ
代码
ｃｏｄｅ
编码水平Ｌｅｖｅｌｓ
－１　 ０　 １
提取温度／℃
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
Ａ　 ８０　 ９０　 １００
提取时间／ｈ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ
Ｂ　 ０．５　 １　 １．５
料液比／（ｇ／ｍＬ）
ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｗａｔｅｒ
Ｃ　 １∶１５　 １∶２０　 １∶２５
５期 徐翠翠，等：响应面法优化孔石莼多糖提取工艺 ３９　
３　结果
３．１　标准曲线的绘制
根据测定吸光度值结果得线性回归方程：ｙ＝
７．０６５　７ｘ＋０．００１，Ｒ２＝０．９９９　７，线性关系良好。
结果见图１。
图１　葡萄糖对照品标准曲线
Ｆｉｇ．１　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　Ｇｌｕｃｏｓｅ
３．２　单因素试验结果
单因素试验结果见图２（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）。
图２　单因素试验结果
Ｆｉｇ．２　Ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ
　　由图２（Ａ）可知，固定提取时间１ｈ，料液比
１∶２０，考察提取温度对孔石莼多糖得率的影响，
提取３次后，９０℃时提取率最高，随温度升高，多
糖得率有下降趋势，推测原因可能是在９０℃时藻
体组织被彻底破坏，多糖溶出最多；温度过高可能
会导致孔石莼细胞多种成分产生性质变化，从而
造成多糖难以溶出，也可能是多糖与其他物质结
合导致难以溶出，如糖蛋白的产生［８］；由图２（Ｂ）可
知，提取１ｈ时，多糖得率最高，且随时间延长，得
率变化不大；由图２（Ｃ）可知，液料比为２０∶１时，
多糖得率最高，且随着提取溶剂的增加，提取率增
加不大。综合考虑生产效益，优选出单因素试验结
果为：提取温度９０℃，提取时间１ｈ，液料比２０∶１。
３．３　响应面试验结果与分析
３．３．１　模型的建立与方差分析
利用Ｄｅｓｉｇｎ　Ｅｘｐｅｒｔ软件对实验数据进行二
次多元回归拟合，得到以孔石莼多糖得率为响应
值，提取温度（Ａ）、提取时间（Ｂ）和料液比（Ｃ）为自
变量的二次多元回归模型：多糖得率（％）＝１０．１３
＋０．３０Ａ＋０．２４Ｂ＋０．１６Ｃ＋０．０４２ＡＢ＋０．０５７ＡＣ
＋０．０７０ＢＣ－１．１７Ａ２－０．７２Ｂ２－０．４３Ｃ２。表２为
实验结果。对该模型进行方差分析，结果见表３。
４０　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
表２　响应面分析试验设计及结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ
试验编号
Ｔｅｓｔ　ｎｕｍｂｅｒ
编码水平
Ｌｅｖｅｌｓ
Ｘ１ Ｘ２ Ｘ３
实测值／％
Ａｃｔｕａｌ　ｖａｌｕｅ
预测值／％
Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｖａｌｕｅ
１　 ０　 １ －１　 ９．０３　 ８．９９
２　 ０ －１　 １　 ８．７９　 ８．８３
３　 １　 ０ －１　 ８．５８　 ８．６２
４ －１　 １　 ０　 ８．１６　 ８．１４
５　 ０　 ０　 ０　 １０．０９　 １０．１３
６　 ０ －１ －１　 ８．７１　 ８．６５
７　 １　 １　 ０　 ８．８１　 ８．８２
８　 ０　 ０　 ０　 １０．１５　 １０．１３
９　 １ －１　 ０　 ８．２４　 ８．２６
１０　 ０　 １　 １　 ９．３９　 ９．４５
１１　 ０　 ０　 ０　 １０．１６　 １０．１３
１２ －１　 ０ －１　 ８．０８　 ８．１４
１３　 １　 ０　 １　 ９．１１　 ９．０５
１４ －１ －１　 ０　 ７．７６　 ７．７５
１５ －１　 ０　 １　 ８．３８　 ８．３４
１６　 ０　 ０　 ０　 １０．１８　 １０．１３
１７　 ０　 ０　 ０　 １０．０８　 １０．１３
表３　响应面回归方程的方差分析
Ｔａｂｌｅ　３　ＡＮＯＶＡ　ｆｏｒ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｑｕａｄｒａｔｉｃ　ｍｏｄｅｌ
Ｓｏｕｒｃｅ　 Ｓｕｍ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅｓ　 ｄｆ　 Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ　 Ｆ　Ｖａｌｕｅ　 Ｐｒｏｂ＞Ｆ
Ｍｏｄｅｌ
Ａ
Ｂ
Ｃ
ＡＢ
ＡＣ
ＢＣ
Ａ２
Ｂ２
Ｃ２
Ｒｅｓｉｄｕａｌ
Ｌａｃｋ　ｏｆ　ｆｉｔ
Ｐｕｒｅ　ｅｒｒｏｒ
Ｃｏｒ　ｔｏｔａｌ
１０．９２
０．７０
０．４５
０．２０
７．２２５Ｅ－００３
０．０１３
０．０２０
５．７２
２．２０
０．７７
０．０２８
０．０２１
７．８８０Ｅ－００３
１０．９４
９
１
１
１
１
１
１
１
１
１
７
３
４
１６
１．２１
０．７０
０．４５
０．２０
７．２２５Ｅ－００３
０．０１３
０．０２０
５．７２
２．２０
０．７７
４．０６５Ｅ－００３
６．８５８Ｅ－００３
１．９７０Ｅ－００３
２９８．３５
１７１．２７
１０９．８４
４９．６０
１．７８
３．２５
４．８２
１４０８．２３５
４２．１９
１９０．１９
３．４８
＜０．０００１（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ）
＜０．０００１
＜０．０００１
０．０００２
０．２２４２
０．１１４３
０．０６４１
＜０．０００１
＜０．０００１
＜０．０００１
０．１２９７（ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ）
　　可以看出，Ｆ回归 ＝２９８．３５＞Ｆ０．０１（９，４）＝
１４．６６，Ｐ＜０．０００　１，表明二次多元回归模型极其
显著；Ｆ失拟＝３．４８＜Ｆ０．０５（９，３）＝８．８１，失拟项Ｐ＝
０．１２９　７＞０．０５，模拟失拟度不显著；模拟一次项
ＡＢＣ均具有显著性差异，从Ｆ值可知单因素的影
响顺序为Ａ＞Ｂ＞Ｃ，即提取温度＞时间＞料液比。
利用软件计算得率回归模型的调整系数 Ｒ２＝
０．９９４　１，说明该模型能解释９９．４１％响应值的变
化。因而该模型的拟合程度比较好，可用此模型
进行分析和预测。
３．３．２　响应曲面分析
利用Ｄｅｓｉｇｎ　Ｅｘｐｅｒｔ分析软件得到二次回归
方程的等高线及响应面见图，根据二次模型所得
到的等高线及响应曲面可以评价试验因素之间的
交互作用强度，以确定各因素的最佳水平范围。
５期 徐翠翠，等：响应面法优化孔石莼多糖提取工艺 ４１　
图３　响应面法（提取时间、提取温度）曲面图和相应等高线图
Ｆｉｇ．３　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）３Ｄｓｕｒｆａｃｅ　ｐｌｏｔ
ａｎｄ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｔｏｕｒ　ｐｌｏｔｓ
图４　响应面法（料液比、提取温度）曲面图和相应等高线图
Ｆｉｇ．４　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｗａｔｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）
３Ｄｓｕｒｆａｃｅ　ｐｌｏｔ　ａｎｄ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｔｏｕｒ　ｐｌｏｔｓ
图５　响应面法（提取时间、料液比）曲面图和相应等高线图
Ｆｉｇ．５　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｗａｔｅｒ）３Ｄｓｕｒｆａｃｅ　ｐｌｏｔ
ａｎｄ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｃｏｎｔｏｕｒ　ｐｌｏｔｓ
　　由图３可知，当料液比为１∶２０，提取时间固
定的条件下，提取温度在８０～９０℃时，提取３次
后孔石莼多糖得率急剧增加，并于９０℃附近达到
极大值后缓慢降低；图４可知，当提取时间为１ｈ，
料液比固定的情况下，随提取温度的升高，孔石莼
多糖得率先增加而后缓慢减小，９０℃附近存在极
４２　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
大值；图５可知，当提取温度为９０℃，提取时间固
定的条件下，料液比在由１∶１５变化到１∶２０时，
多糖得率显著增加，并在１：２０附近存在极大值，
而后缓慢降低。
以上３组图均与单因素试验结果吻合。二次
回归方程模拟得到孔石莼多糖最佳提取工艺：提
取温度为９１．３４℃，提取时间为１．０９ｈ，料液比为
１∶２１．０４，多糖得率为１０．１９％。实际操作中，修
正结果：提取温度为９１℃，提取时间为１．１ｈ，料
液比为１∶２１。为检验该方法的可靠性及稳定性，
精密称取３份药材粉末按上述修正后工艺进行验
证，实测值分别为１０．１５％、１０．１９％和１０．１６％平
均为１０．１７％，结果与预测值１０．１９％基本一致，
采用该方法得到的提取条件参数准确可靠，具有
使用价值。
４　结论
本试验通过响应曲面法考察了提取温度、提
取时间及料液比对孔石莼多糖得率的影响。二次
回归方程的模型存在极显著差异，二次方差分析
后的失拟项不显著，说明本试验所建立的二次回
归方程正确反映了所考察因素与响应值之间的关
系，试验设计科学合理。通过优化得到孔石莼多
糖的最佳提取工艺条件：提取温度９１℃，提取时
间１．１ｈ，料液比１：２１。在此条件下，多糖得率为
１０．１９％，验证试验实测得率为１０．１７％，基本接
近，具有参考价值。
响应曲面法虽然试验次数相对较多，但它能
把因素与响应值之间的关系函数化，建立连续变
量曲面模型，考察的因素不仅仅局限于所限制的
水平，比传统正交试验方法更直观、更精确。因
此，该优化提取方法可在孔石莼多糖提取工艺研
究及生产中推广应用。
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