全 文 ：《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.23 No.1(总 91)
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江蓠硫酸酯多糖的体外抗肿瘤和免疫活性研究

刘慧燕 1，赵广才 1，赵谋明 2
（1.广州市体育科学研究所运动营养实验室，广东 广州510650）（2.华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州510640）
摘要：目的：体外实验探讨江蓠硫酸酯多糖的抗肿瘤和免疫调节活性，方法：将离子交换分离得到的硫酸基含量不同的两种多
糖(GTHSP、GTLSP)以不同浓度加入 S-180细胞和脾淋巴细胞培养液中，采用MTT法测定；结果：两种多糖均对 S-180肿瘤细胞生
长无抑制作用，高硫酸酯多糖GTHSP对淋巴细胞有显著增殖作用(P<0.01)；低硫酸酯多糖GTLSP对淋巴细胞增殖无作用。结论：体
外实验结果表明两种多糖均无抗肿瘤活性；GTHSP有免疫活性，其免疫活性与硫酸基含量有关。
关键词：江蓠；硫酸酯多糖；免疫活性
中图分类号：R282.75；文献标识码：A；文章篇号: 1673-9078(2007)01-0028-03
Study on Anti-tumor Activity and Immunomodulating Effects of Sulfated
Polysaccharides from Gracilaria tenuistipitata in Vitro
LIU Hui-yan1, ZHAO Guang-cai1, ZHAO Mou-ming2
（1.Sports nutrition lab of Guangzhou sports science institute, Guangzhou 510650, China）
(2.College of light industry and food science, South China University of technology, 510640 China)
Abstracts：Objective: To study the anti-tumor activity and immunomodulating effects of polysaccharide from Gracilaria tenuistipitata in
vitro. Method: The S-180 cell and spleen lymphocyte were cultured in vitro with different dosage of two polysaccharides (GTHSP and GTLSP)
separated via ion-exchange and tested by MTT method. Result: High sulfate-containing polysaccharide GTHSP could markedly induce
proliferation of spleen lymphocyte (P<0.01), while no such effect was found with low sulfate-containing polysaccharide GTLSP. Additionally,
none of the two samples showed inhibition effect on the growth of S-180 cell. Conclusion: Neither of the tested polysaccharides had anti-tumor
activity. It was also confirmed that the immunomodulaiting effect was related with the content of SO42- in sulfated polysaccharides and the
polysaccharide GTHSP with high SO42- content showed immunomodulaiting effect.
Key words：Gracilaria tenuistipitata; Sulfated polysaccharides; Immunocompetence;

琼胶是食品添加剂中重要的稳定剂，根据其性质
分为琼胶糖（Agarose）和硫琼脂（Agaropectin），其
中琼胶糖硫酸基含量低，凝固性好；硫琼脂硫酸基含
量高，胶凝力弱。含有琼胶的海藻主要是红藻中的石
花菜、江蓠、鸡毛菜、紫菜、海萝及多管藻等，其中
石花菜、江蓠和鸡毛菜为生产琼胶的主要原料。
硫琼脂长期以来被看作是提取琼胶糖的废弃物。
随着对海藻硫酸多糖生物学功能的深入研究，发现江
蓠属硫酸酯多糖在体内外均具有抗凝血作用 、抗病
毒、抗肿瘤等生理活性。多糖具有多方面的生物活性，
诸如抗病毒、抗肿瘤与免疫调节等；而且对机体正常
细胞没有毒副作用，可能成为理想的药物来源。植物
多糖最重要的药理作用为免疫调节作用，这也是多糖
抗肿瘤、抗病毒的机制之一。本文采用MTT法测定
收稿日期：2006-07-10
作者简介：刘慧燕，硕士，从事运动营养研究与保健食品的研发
了纯化分离后的江蓠多糖在体外对小鼠 S-180肿瘤细
胞和小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 研究对象
江蓠多糖分级组分 GTLSP、GTHSP 是从海南文
昌养殖场产细基江蓠（Gracilaria tenuistipitata）中，
通过热水提取和离子交换分离分级得到 2 个多糖组
分，均为半乳聚糖硫酸酯，硫酸基含量分别为 0.65%、
24.1%。
小鼠 S-180肿瘤细胞株购自中山医科大学肿瘤研
究所。
昆明种小白鼠，体重 18~22g，♀♂兼用，购自南
方医科大学实验动物中心。
1.1.2 试剂
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2007.01.009
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四氮唑盐(MTT)、刀豆蛋白 A（ConA），Sigma
公司；DMEM培养基、胰蛋白酶、RPMI-1640细胞培
养液，Gibco公司；2-巯基乙醇（2-ME），Fluka公司；
小牛血清，杭州四季青生物技术材料公司；青霉素、
链霉素、盐酸、谷氨酰胺、异丙醇、磷酸氢二钠、磷
酸二氢钠、DMSO、均为分析纯试剂。
1.1.3 仪器
微量培养板平台振荡机，Cole-Parmer公司；酶标
仪，美国 Bio-Rad；96孔培养板，美国 Corning公司；
CO2培养箱，日本 Sanyo公司；超净工作台，苏州净
化设备公司
1.2 实验方法
将 DEAE-Sepharose 离子交换分离收集得到的不
同组分透析脱盐，浓缩至 1mg/mL，采用 0.2µm滤膜
无菌条件下过滤除菌后待用。
1.2.1 多糖的抑制肿瘤细胞增殖活性测定[1]
S-180肿瘤细胞按每孔3.0×103个接种于96孔板，
调整细胞悬液体积为每孔 190µL，37℃，5%CO2饱和
湿度培养箱中培养，24h后加入不同浓度的多糖样品，
对照孔加 0.9％氯化钠溶液，使每孔体积为 200µL；每
组 6孔，继续培养 48h，加入MTT 20µL/孔（5mg/mL）
后再培养 6h，离心弃上清后加二甲亚砜（DMSO）
150µL，振荡 10min，酶标仪以 570nm 波长测定 OD
值，按抑制率(%)=(1－给药组 OD 值/空白组 OD 值)
×100％计算多糖抗肿瘤细胞增殖活性，重复 3次。
1.2.2 多糖的淋巴细胞转化活性测定[2]
脾细胞悬液制备：无菌取脾，置于盛有适量无菌
Hank’s液的平皿中，用镊子轻轻将脾脏撕碎，制成单
细胞悬液。经 200目筛网过滤，用Hank’s液洗 3次，
每次 1000r/min离心 10min。然后将细胞悬液浮于 1mL
完全培养液中，用台盼蓝染色计数活细胞数，调整细
胞浓度为 2×106个/mL。
淋巴细胞增殖反应：将脾细胞悬液分别加入 96
孔培养板中，每孔 100µL，分别加 20µL 50µg/ml ConA
液，每孔加入不同体积的江蓠多糖GTLSP、GTHSP，
调整体系多糖浓度分别为 500、250、125、62.5、
31.25µg/mL，每组 4个复孔，对照组加完全培养液，
置 5％CO2培养箱 37℃培养。培养 68h后加入MTT（5
mg/ml）20µL/孔，继续培养4h后1500r/min离心10min，
每孔吸取上清液 100µL，加入 DMSO 100µL，震荡
5min，用酶标仪在 570nm测OD值。
2 结果分析
2.1 多糖的抗肿瘤细胞增殖活性
观察加入多糖后的细胞生长情况，进行形态学观
察，发现多糖对肿瘤细胞的培养增殖与对照相比无差
异。多糖对抑制肿瘤细胞增殖效果为阴性。
与其它多糖一样，藻类多糖抗肿瘤作用大致也可
以分为 2 大类[3]：一类是对肿瘤细胞的直接作用，即
多糖直接杀死了肿瘤细胞，包括对肿瘤细胞膜生化特
性的作用、抗自由基作用、诱导分化与诱导凋亡以及
对肿瘤细胞超微结构的影响；第二类是作为生物免疫
反应调节剂，通过增强机体的免疫功能而间接抑制或
杀死肿瘤细胞。有报道江蓠多糖能抑制小鼠体内
S-180 肿瘤细胞，而本实验表明江蓠各组分多糖不能
直接抑制肿瘤细胞活性，体外抑瘤实验为阴性，可能
是多糖提高小鼠免疫系统功能而达到抑制肿瘤的效
果，具体需要进一步研究。
2.2 多糖的淋巴细胞转化活性
MTT法检测淋巴细胞增殖活性，数据结果以均数
±标准差表示，采用 SPSS11.0单因素方差分析对数据
进行处理，组间差异以Dunnett-t检验进行分析。表 1
为多糖的淋巴细胞转化实验结果；表 2为不同浓度多
糖GTHSP对淋巴细胞刺激指数的影响。
表1 多糖的淋巴细胞增殖实验结果
CONC/µg·mL-1 N GTLSP GTHSP
control 5 0.44740±0.01472 0.44740±0.01472
31.25 4 0.34867±0.02676** 0.45675±0.02037
62.5 4 0.44700±0.03487 0.53350±0.01767**
125 4 0.43967±0.01305 0.59300±0.01488**
250 4 0.26533±0.01834** 0.57800±0.01257**
500 4 0.30867±0.02676** 0.56525±0.01255**
与对照组相比，　　P<0.01,　P<0.05
表 1 结果显示，样品 GTLSP 对淋巴细胞增殖无
作用，而样品 GTHSP在 62.5~500µg/mL范围内能显
著刺激脾淋巴细胞增殖（P<0.01）。
表2 不同浓度多糖GTHSP对淋巴细胞刺激指数
多糖浓度/µg·mL-1 31.25 62.5 125 250 500
刺激指数 1.021 1.192 1.325 1.292 1.264
从表 2知，多糖 GTHSP对淋巴细胞的刺激指数
与多糖浓度呈明显的剂量-效应关系（P<0.01）。随多
糖浓度从 31.25µg/mL增加到 125µg/mL，其刺激指数
增加最大值；继续增加多糖浓度至 500µg/mL 其刺激
指数逐渐降低。
海藻多糖作为免疫调节剂已被国内外大多数学
者所认可[4]，其抗肿瘤作用主要是通过激活免疫细胞、
提高机体免疫力，从而达到有效控制癌细胞的增殖。
本实验能验证多糖能否协同有丝分裂原 ConA促进脾
(下转第37页)
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表2 L9（34）正交设计及结果
序号 A B C D 厚朴酚含量/%
1 1 1 1 1 0.4735
2 1 2 2 2 0.4987
3 1 3 3 3 0.4524
4 2 1 2 3 0.4914
5 2 2 3 1 0.4482
6 2 3 1 2 0.5198
7 3 1 3 2 0.4588
8 3 2 1 3 0.5145
9 3 3 2 1 0.4809
K1 1.4246 1.4237 1.5078 1.4026
K2 1.4594 1.4614 1.4710 1.4773
K3 1.4542 1.4531 1.3815 1.4583
R 0.0348 0.0377 0.1263 0.0747
4.3 验证实验结果
取“促生长散”10.00g，加入 65%的乙醇 100mL。
根据筛选得到的最佳提取条件 A2B2C1D2 平行提取 3
次。分别测定厚朴酚的含量。结果见表 3。
表3 验证实验结果
标号 1 2 3
平均吸光度 0.247 0.248 0.246
厚朴酚含量 0.5345% 0.5366% 0.5324%
经验证实验，根据最佳的提取条件所测得的厚朴
酚的含量均大于正交设计中的含量.所得的结果正确。
5 结论
5.1 “促生长散”中醇溶性成分主要来源于厚朴、槟
榔、麦芽等，本实验采用厚朴酚为评价指标，方法简
便，合理可行。
5.2 “促生长散”中醇溶性成分的最佳提取条件为：
超声时间 60（20，20，20）min，超声温度 35℃，乙
醇浓度 65%，固液比 1:10。超声法提取“促生长散”
中醇溶性成分简单方便，提取时间短，提取效果好。
参考文献
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和厚朴酚的含量[J]. 时珍国药研究,1997,8(3):220

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(上接第29页)
淋巴细胞的增殖。结果表明，江蓠多糖经 DEAE-
Sepharose FF离子交换分离得到的不同多糖组分对小
鼠脾淋巴细胞的作用不同。多糖 GTLSP 是制造低电
内渗琼脂糖的原料，其硫酸基含量极低，对淋巴细胞
培养增殖无作用；多糖 GTHSP 含有大量的硫酸基，
是一种阴离子多糖，在 62.5~500µg/ml 浓度范围内对
淋巴细胞有显著增殖作用。总结海藻多糖免疫调节活
性不但与海藻种类、多糖构成、硫酸基的结合状态有
关，而且与多糖中硫酸基含量有极大的关系。
3 讨论
海藻多糖具有较高的免疫调节能力。半叶马尾藻
可以显著抑制 S-180小鼠瘤体生长，提高小鼠血清中
SOD、GSH-PX 的酶活，显示藻多糖可以提高抗氧化
能力和机体免疫功能从而抑制肿瘤生长[5]。活性多糖
的生物学保护作用可通过其抗氧化功能提高免疫防御
和免疫监视，增强器官的抗氧化作用，减少其细胞的
病理变化，保护和维持机体的重要生命活动，提高机
体免疫能力。
本文体外细胞实验分析了江蓠多糖对肿瘤细胞
和脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明江蓠硫酸酯多糖
无直接杀伤肿瘤细胞活性，但对淋巴细胞增殖具有一
定的作用，提示其可作为一种免疫调节功能的活性成
分，调节机体的免疫状况。
参考文献
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