全 文 ：北方园艺２０１２（０３）：１２５～１２７ ·生物技术·
第一作者简介：杨冬业（１９７６－），男，广西昭平人，硕士，讲师，现主
要从事细胞工程研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｙｓｘｋ＠１２６．ｃｏｍ。
收稿日期：２０１０－１０－２２
百香果组织培养及植株再生
杨 冬 业１，张 丽 珍２，徐 淑 庆３
（１．桂林医学院，广西 桂林５４１００１；２．桂林师范高等专科学校，广西 桂林５４１００１；３．钦州学院生化系，广西 钦州５３５０００）
摘 要：以ＭＳ为基本培养基，百香果茎段为外植体，进行百香果组织培养及植株再生的研
究。结果表明：ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ适合丛生芽诱导，诱导率达１００％；ＭＳ＋６－ＢＡ １～１．５ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ适合继代增殖培养；１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ适合生根诱
导，诱导率达１００％。
关键词：百香果；植株再生；组织培养
中图分类号：Ｓ ６６７．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）０３－０１２５－０３
百香果又称鸡蛋果，学名西番莲，营养丰富，有“果
汁之王”的美称，属多年生热带藤本植物，其果汁可散发
出番石榴、菠萝、香蕉等１０多种水果的浓郁香味。据科
学预测，其果实含有人体所需的１７种氨基酸、多种维生
素和类胡萝卜素以及微量元素。可溶性固形物占５％～
１６％，总酸量为３．８％～４％，甜酸适中；营养价值很高。
用它为原料，加工制成果汁、果露、果酱、果冻，风味独特。
果皮可作饲料和提取果胶，根、茎、叶均可入药，有消炎
止痛、活血强身、滋阴补肾、降脂降压等疗效。近年来，
国际市场对西番莲果汁的需求以每年１５％～２０％的速
度增长，大有供不应求之势［１］。百香果的繁殖方法主要
有２种，一是用种子直接播种繁殖，二是用蔓条扦插繁
殖。由于不加选择地随意压藤繁殖，加快了品种的退
化，病害增加，特别容易感染茎腐病，产量大大降低［２］。
该研究通过对百香果组织培养的研究，旨在为百香果的
产业发展开辟一条新的捷径。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
紫果西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓ）。
１．２ 试验方法
１．２．１ 培养基的配制 用ＭＳ培养基为基本培养基，加
３％ 的蔗糖和０．７％的琼脂，调ｐＨ至５．８～６．０，在不同
的培养阶段再加入不同的植物生长调节剂。培养基分
装到２００ｍＬ的培养瓶中，在１２１℃、０．１～０．１５ＭＰａ压
力下灭菌２０ｍｉｎ。
１．２．２ 外植体的消毒 晴好天气的中午或下午在健壮
无病害的植株上剪取外植体，将材料祛除不要的部分，
在搅匀的已经加入适量洗衣粉的水中浸泡３～５ｍｉｎ，再
用自来水流水冲洗１ｈ，再使用０．１％的升汞溶液灭菌
１０～１２ｍｉｎ，用无菌水冲洗３～５次，备用。
１．２．３ 丛生芽诱导培养 在超净工作台上将准备好的
材料接种到诱导分化培养基中，每瓶接种２～３个外植
体，注意不要插入培养基太深。将接种好的培养瓶放在
光照２ ０００ｌｘ、温度２５℃的培养室中培养。
１．２．４ 继代增殖培养 把初代培养形成的丛生芽从基
部切下，转接入继代增殖培养基中进行增殖培养，第２５
天统计结果。
１．２．５ 生根诱导培养 待不定芽长至２～３ｃｍ高时，将
其从基部切下，接种到生根培养基中进行生根诱导。第
２５天统计结果。
１．２．６ 再生植株的移栽 当植株根长至２～３ｃｍ时，进
行驯化移栽。首先将瓶口打开，锻炼２～３ｄ，然后取出
植株，小心洗净根部培养基，移栽于营养钵中。
２ 结果与分析
２．１ 不同部位外植体对诱导丛生芽的影响
通过采用不同的百香果部位，在培养基营养成分相
同的情况下，附加２．５ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ，温度和光照条件均
相同的条件下培养，观察其出芽率，结果表明，叶片较难
诱导出芽，茎段的出芽诱导率为１００％（表１）。
表１ 不同部位外植体对诱导丛生芽的影响
外植体 叶 茎
接种数／块 ３０ ３０
出芽率／块 ５ ３０
出芽率／％ １７ １００
２．２ 不同消毒时间对百香果组织培养的影响
由表２可看出，先用酒精消毒３０ｓ后，再用０．１％升
汞消毒１０ｍｉｎ时，效果最好，出芽率最高。随着消毒时
间的增加，对细胞的穿透力增强，所以杀伤增高，使细胞
坏死变黄。而消毒时间太短则会引起消毒不完全，细菌
滋生，使外植体变黄坏死。
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·生物技术· 北方园艺２０１２（０３）：１２５～１２７
表２ 不同消毒时间对百香果组织培养的影响
升 汞（０．１％）
酒精（７０％）＋升汞
（先用酒精消毒３０ｓ后再用升汞消毒）
升汞消毒
时间／ｍｉｎ
６ ８ １０ １２ １６ ６ ８ １０ １２ １６
接种数／块 ３０ ３０ ３０ ３０ ３０ ３０ ３０ ３０ ３０ ３０
出芽率／块 １２ ２５ ２９ ２６ ５ １５ ２８ ３０ ２２ ４
出芽率／％ ４０．０ ８３．３ ９６．７ ８６．７ １６．７ ５０．０ ９３．３ １００．０ ７３．３ １３．３
２．３ 植物激素对百香果丛生芽诱导的影响
为了筛选合适的细胞分裂素，设计表３试验，３０ｄ
后观察。由表３可知，６－ＢＡ更适合用于丛生芽的诱导。
为了确定适合的６－ＢＡ浓度，进一步作诱导试验，接种
３０ｄ后观察，结果见表４。接入５种不同浓度６－ＢＡ的茎
段，在其它条件不变的情况下出芽率的高低取决于６－ＢＡ
的绝对量。浓度较低时，出芽率较低且趋于平缓，随着
浓度的增大，出芽率也增高，在６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ时最高，
随着浓度的增大，出芽率会下降，因为浓度升高，愈伤组
织就不能分化出苗，变黄坏死。
表３ 不同细胞分裂素对百香果丛生芽诱导的影响
细胞分裂
素种类
浓度
／ｍｇ·Ｌ－１
诱导出
芽率／％
平均出芽
个数／棵
芽的特征
６－ＢＡ ２．０ ９２．７ ５．２
芽颜色嫩黄或淡绿，健壮，同
一外植体所出的芽大小相似
ＫＴ ２．０ ３７．３ １．４
芽淡黄偏白，瘦小，同一外植
体所长芽大小不均
ＺＴ ２．０ ５６．３ ２．５
黄色，细小，嫩弱所长的芽大
小不均
不加激素 ——— 未发现出芽 ——— ———
注：接种数均为３０。
表４ 不同浓度６－ＢＡ对百香果丛生芽诱导的影响
６－ＢＡ浓度／ｍｇ·Ｌ－１ ０．５ １．０ １．５ ２．０ ２．５
接种数／块 ３０ ３０ ３０ ３０ ３０
出芽率／块 ７ １５ ２４ ３０ ２５
出芽率／％ ２３．３ ５０．０ ８０．０ １００ ８３．３
２．４ 继代增殖培养
将诱导获得的丛生芽从其基部切下，接种在下列培
养基中，通过芽生芽途径进行增殖，接种后５～７ｄ，基部
膨大，１５ｄ长出一些细小的丛生芽，２５ｄ左右小芽长大，
变成一簇丛生芽。由表５可知，进行继代培养时，遵循
激素浓度递减原则进行［５］，这样既可获得较高的增殖系
数，同时获得的苗也比较健壮。其中附加６－ＢＡ １～１．５
ｍｇ／Ｌ与ＩＢＡ ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ配合使用比较利于壮苗。
表５ 不同激素浓度组合下无根苗生长情况
ＩＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
０．０５ ０．１ ０．２ ０．５
１．０
苗嫩绿色，大小
均匀
苗绿色，
较粗壮
苗绿色，
粗长
苗深绿色，较高
１．５
苗嫩绿色，长得
均匀
苗绿色，
健壮
苗嫩绿色，
健壮
苗绿色，比较高大
２．０
苗小而均匀，淡
黄色或嫩绿色
苗小，
淡黄色
苗绿色，
大小不一
苗深绿色，比较高，
出现愈伤组织
２．５
苗、很幼小，淡
黄色
苗幼小，
淡黄色
苗小，
淡黄色
苗小黄色，基部有
较明显的愈伤组织
２．５ 生根培养
生根培养是组织培养快速繁殖的重要环节，是快速
繁殖种苗的有力保证。把丛生状的幼苗切割成单株小
苗，接入不同生根培养基，２５ｄ后观察，由表６可知，生根
培养基最好为１／２ＭＳ附加０．１ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ和ＩＢＡ。
在此培养基上诱导的根粗壮，数目多，生长良好。
表６ 不同无机盐以及不同激素组合
对百香果生根的影响
激素
培养基
ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ
＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ
１／４ＭＳ
平均根数为１～２根，
细弱，叶色发黄老化
平均根数为３根，粗
大，叶色稍老化，变黄
根数约为３～５根，平均
长度２～３ｃｍ根部有愈
伤组织
１／２ＭＳ
平均根数为３～４根，
细长
根数平均为４～５根，
２～３ｃｍ长，粗大
根数约为５～８根，平均
长度３～４ｃｍ，较粗大
ＭＳ
根少，为１～２根，较
细长
根数为３～４根，粗
大，２～３ｃｍ长
根数约为３根，有１～２
根较粗，平均长度为
２ｃｍ
２．６ 移栽
待根长到２～３ｃｍ时，将培养瓶从培养室移入温
室，打开盖子，在自然光下锻练２～３ｄ。锻练过程中注
意瓶温，避免过强阳光灼伤幼苗。经过锻练的幼苗用镊
子轻轻地取出，放入清水中洗去附着于根部的培养基，
栽入带营养土的营养杯中。栽植好后，浇足定根水，放
置于带有遮阳网的塑料大棚内，注意遮荫、保湿、通气。
移栽后１０～１５ｄ就可长出新根与新叶，移栽成活率可达
９５％以上。
３ 讨论
从理论上讲，生物体的每一个细胞都包含有该物种
所特有的全套遗传物质，即该物种的全套遗传信息［３］。
处于离体状态的植物细胞、组织、器官在一定的营养物
质、激素和其它外界条件下，表现出其全能性，发育成完
整的植株，在人工条件下实现这一过程就是植物的组织
培养［６］。６－ＢＡ、ＫＴ等细胞分裂素类物质对诱导出芽一
般具有重要作用［４］。根据试验观察，百香果茎段丛生芽
诱导培养并不难，但试验中容易出现污染，成为百香果
组培失败的主要因素。造成污染的因素有很多，包括前
期的清洗不干净，培养基的分装、灭菌过程中造成污染，
取材过程的疏忽，净台操作过程中的人为因素造成污染
和培养过程中出现内生菌等。采取流水冲洗１ｈ后，先
用酒精消毒３０ｓ后，再用０．１％升汞消毒１０ｍｉｎ时效果
最好，出芽率最高。
在外植体的选择上，以叶为外植体重复Ｏｔａｈｏｌａ Ｖ
等［７］的试验，但效果都不佳。以芽生芽的方式建立再生体
系是最快捷的途径，以百香果茎段为外植体诱导丛生芽，
诱导率为１００％，增殖系数为５～６／月，移栽成活率在９５％
以上。百香果试管苗培养的成功，将为百香果试管苗工厂
化生产扫清了障碍，并有助于百香果产业的发展。
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北方园艺２０１２（０３）：１２７～１２９ ·生物技术·
第一作者简介：郝爱平（１９７９－），女，硕士，讲师，现从事植物分子生
物学的教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｗｘｈａｐ＠１２６．ｃｏｍ。
基金项目：牡丹江师范学院青年专项基金资助项目（ＱＦ２００９０２）。
收稿日期：２０１１－１１－２４
菌液浓度对ＰＣＲ扩增的影响
郝 爱 平，魏 继 承，国 会 艳
（牡丹江师范学院 生命科学与技术学院，黑龙江 牡丹江１５７０１２）
摘 要：以大肠杆菌和农杆菌（含有几丁质酶基因）为试材，研究了菌液浓度对ＰＣＲ扩增的影
响。结果表明：当菌液ＯＤ值达到０．００６后作为模板进行ＰＣＲ扩增，经电泳检测即可出现条带，
随着ＯＤ值的增加电泳条带逐渐变亮；ＯＤ值在０．２００～０．７００的电泳条带比较清晰；ＬＢ液体培养
基中的成分对ＤＮＡ模板没有影响，菌液ＤＮＡ能正常扩增。
关键词：菌液浓度；模板；ＰＣＲ
中图分类号：Ｑ ９４９．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）０３－０１２７－０３
利用ＰＣＲ技术进行重组体的筛选是分子克隆实验
中常用的方法之一。但常规的ＰＣＲ过程需要进行细菌
培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增，操作
繁琐，耗时较长，同时在反复的操作中ＤＮＡ量损失也较
大，产率较低［１］。菌液作为模板进行ＰＣＲ反应则大大节
约了时间和成本，是一种经济、快速、准确的好方法。该
实验探讨了能够进行ＰＣＲ扩增的菌液浓度范围，并讨论
不同细菌菌液浓度与ＰＣＲ扩增的关系，为今后的分子生
物学实验提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 实验材料
１．１．１ 菌株 中间表达载体为大肠杆菌和农杆菌（含有
几丁质酶基因）。
１．１．２ 主 要 试 剂 和 酶 ｒ Ｔａｑ 酶、ｄＮＴＰＭｉｘｔｕｒｅ、
ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、１０×ＰＣＲｂｕｆｅｒ、Ｇｏｌｄｖｉｅｗ，购于大连
宝生物公司。ＰＣＲ引物合成于大连宝生物公司。ＣＨ－１：
５’－ＡＧＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＣＡＡＣＣＡＴＧＧＣＴＣＴＣＡＡＣ－３’；ＣＨ－２：
５’－ＣＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＴＡＴＡＡＡＴＴＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧ－３’。
１．１．３ 仪器 Ｔ６型紫外分光光度计，电子恒温水浴锅
，
参考文献
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科学，２００３，３２（４）：７７－８０．
［２］ 张兴旺．“百香果”与西番莲［Ｊ］．柑桔与亚热带果树信息，２００４，２０
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［３］ 吴庆余．基础生命科学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００６：５６－８４．
［４］ 谭文澄，戴策刚．观赏植物组织培养技术［Ｍ］．北京：中国林业出版
社，１９９１：４－６．
［５］ 张丽珍，徐淑庆，杨冬业，等．青蒿组织培养及其快速繁殖研究［Ｊ］．生
物学通报，２０１０，４５（３）：４８－５０．
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ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｅａｆ ｄｉｓｃ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｉｏａｇｒｉ．，２０００，１２（３）：７１－７４．
Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｐｌａｎｔｌｅｔ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ．ｅｄｕｌｉｓ
ＹＡＮＧ Ｄｏｎｇ－ｙｅ１，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｚｈｅｎ２，ＸＵ Ｓｈｕ－ｑｉｎｇ３
（１．Ｇｕｉｌｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４１００４；２．Ｇｕｉｌｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｇｕｉｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４１００４；３．Ｑｉｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｚｈｏｕ，
Ｇｕａｎｇｘｉ ５３５０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈ ｂｕｇｓ ｏｆ ｐａｓｓｉｏｎｆｒｕｉｔ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ，ＭＳ ａｓ ｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ，ｐａｓｓｉｏｎｆｒｕｉｔ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔｌｅｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｓｓｉｏｎｆｒｕｉｔ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｇｓ，ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｓ ｔｏ １００％．Ｔｈｅ ｐｅｒｆｅｃｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｓｈｏｏｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋
６－ＢＡ １～１．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ，１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒｏｏｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ １００％．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐａｓｓｉｏｎｆｒｕｉｔ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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