全 文 ：收稿日期:2000-05-17
作者简介:陈发菊(1965-),女 ,土家族 ,湖北长阳人 ,湖北三峡学院生物系讲师 ,从事植物细胞工程学方面的研究.
雪兔子叶的组织培养及植株再生
陈发菊 ,李志红 ,涂　璇
(湖北三峡学院 医学院生物系 ,湖北 宜昌　443003)
摘　要:以雪兔子无菌苗的幼叶为外植体 , 接种到 MS 补加 NAA(1.0 ～ 2.0)mg/L、6-BA
(0.1～ 1.0)mg/ L的培养基上诱导愈伤组织 , 其中以MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L 的诱导
效果最好 ,经 6 周培养即可形成大量的黄绿色愈伤组织 ,诱导率可达 100%.经 2 ～ 3 次继代培养
后 ,将生长良好的愈伤组织转接到 MS 附加 6-BA(0.5～ 2.0)mg/ L、 IAA(0.05 ～ 0.1)mg/L、 NAA
(0.05～ 0.1)mg/ L、GA3 0.5mg/ L不同组合培养基上诱导不定芽 , 适宜诱导芽的组合为 MS+6-
BA 1.0mg/ L+IAA 0.1mg/L+GA30.5mg/ L.不定芽转接到MS+IAA(0.1～ 0.5)mg/ L培养基上 ,放
入冰箱冷藏室处理 10天 , 然后 25℃培养一个月即可生根.
关键词:雪兔子;　组织培养;　植株再生
中图分类号:Q 948　　文献标识码:A　　文章编号:1009-1769(2000)05-0065-03
Studies on Leaf Tissue Culture and Plant Regeneration
of Saussurea gossypiphora D.Don
CHEN Fa_ju ,LI Zhi_hong ,TU Xuan
(Department of Biology , Medical College , Hubei Three Gorges University , Yichang
443003 , China)
Abstract:Leaf segments of saussurea gossypiphora D.Donwere cultured onMS medi-
um Supplemented with NAA(1.0 ～ 2.0)mg/L , 6-BA(0.1 ～ 1.0)mg/L.A month later
large member of greenish yellow callus would be induced from the excised leaves.An in-
duced frequency of 100%was obtained on the MS medium with NAA 2.0mg/L +6 -
BA0.5mg/L.The callus were shifted to MS medium supplemented with 6-BA(0.5 ～ 2.0)
mg/L , IAA(0.05 ～ 0.1)mg/L , NAA(0.05 ～ 0.1)mg/L , GA3 0.5mg/L.The suitable
medium to induce adventitions buds was MS +6 -BA1.0mg/L + IAA0.1mg/L +
GA30.5mg/L.The adventitious buds were cultured on MS medium with IAA(0.1 ～ 0.5)
mg/L under low temperature for ten days.Then roots wonld occur after they were cultured at
25℃ for a month.
Key words:Saussurea gossypiphora;Tissue culture;Plant regeneration
雪兔子(Saussurea gossypiphora D.Don)属菊科(Compositae)凤毛菊属(Saussurea DC)雪兔
第 22卷第 5 期
2000年 10 月 　　　　　
湖北三峡学院学报
JOURNAL OF HUBEI THREE GORGES UNIVERSITY
　　　　　　Vol.22　No.5
Oct.2000
子亚属(Subgen.Eriocoryne)植物.分布于我国西藏的聂拉木和亚东县 ,生长在海拔 4200 ～
4700米的高山流石滩.民间称为雪莲花 ,为名贵中草药 ,常用于治疗风湿性关节炎 、妇科病
等[ 1].目前对雪兔子药用成份研究报道较多[ 2 ,3] ,但组织培养研究未见报道.本实验用雪兔
子幼叶作外植体进行愈伤组织诱导和再生植株的研究 ,以期利用组织培养技术建立雪兔子
快繁系统 ,从而为进行雪兔子细胞培养的筛选和天然药用成分的细胞合成研究奠定基础 ,同
时也为其它种雪莲花植物细胞和组织培养研究积累资料.
1　材料和方法
雪兔子种子由北京锦绣大地公司提供.将种子置于三角瓶中 ,自来水冲洗将浮于水面
的种子去掉 ,洗洁精水液浸洗半小时 ,蒸镏水冲洗几次后 ,加 150ml 每 1000ml 含 10滴吐温
40的蒸镏水液充分摇动 10min ,经 70%酒精消毒 30s , 0.1%HgCl2 灭菌 10min ,无菌水冲洗 5
次 ,再放到无菌滤纸上吸干水分.将灭菌的雪兔子种子接种到不加激素的 MS培养基上萌
发成无菌苗 ,将其幼叶切成0.5 cm2 的切块作外植体 ,接种于MS附加NAA(1.0 ～ 2.0)mg/L 、
6-BA(0.1 ～ 1.0)mg/L 的培养基上诱导愈伤组织.选择生长良好的愈伤组织转移到MS 补
加6-BA(0.5 ～ 2.0)mg/L 、IAA(0.05 ～ 0.1)mg/L、NAA(0.05 ～ 0.1)mg/L、GA3 0.5mg/L不同组
合培养基上诱导不定芽 ,将分化的不定芽移置到MS+IAA(0.1 ～ 0.5)mg/L培养基上诱导生
根.除不同温度处理外 ,培养室温度为 25±2℃,每天光照 14h.
2　实验结果
2.1　愈伤组织的诱导和生长
2.1.1　愈伤组织的诱导　将幼叶外植体分别接种于 1.MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 0.1mg/
L;2.MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;3.MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0 5mg/L;4.MS+
NAA 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L 四组不同激素组合培养基上培养 , 10天后可见叶外植体切
口处均有增厚 ,一个月可见黄绿色较致密的颗粒状愈伤组织.在所设实验组合中 ,以 MS+
NAA2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L 的诱导效果最好 ,诱导率可达 100%,1 、2 、4组培养基上的诱
导率分别为6.8%、10%和 78%.
图 1　雪兔子固体培养愈伤组织生长曲线
2.1.2　愈伤组织的生长　以所得愈伤组织
为材料接种于 MS+NAA 2.0mg/L+6-BA
0.5mg/L固体培养基上 ,25℃下光照培养 ,每
隔2天取 8瓶 ,称取愈伤组织鲜重 ,观察 24
天.从图 1 可以看出雪兔子愈伤组织生长
曲线基本符合“S”型.愈伤组织转接到新培
养基上 ,经过短时间的延迟期后约在第 10
天开始进入对数生长期 ,第 11天到第 18天
呈现对数生长 ,18天后进入静止期 ,此时鲜
重达到最大值.根据愈伤组织的生长曲线
我们选择出继代培养时间 20 天较为合适.
在温度选择培养中发现 ,低温预处理和昼夜温差培养对愈伤组织生长有明显的促进作用.
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2.2　器官发生
将生长良好的愈伤组织转接到MS 补加 6-BA(0.5 ～ 2.0)mg/L 、IAA(0.05 ～ 0.1)mg/L 、
NAA(0.05 ～ 0.1)mg/L 、GA3 0.5mg/L不同组合培养基上诱导芽.接种后分为两组 ,1组直接
在 25℃下培养 ,另一组4℃处理 10天后 25℃培养 ,实验结果见表1:6-BA 、NAA 、GA3 的各组
合均能诱导出不定芽 ,其中以 MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.5mg/L+GA3 0.5mg/L 培养基诱
导效果最好 ,不仅出芽率高 ,而且丛生芽的个数多.不加 GA3 的培养基上丛生芽的个数少 ,
可见GA3有利于芽的分化和丛生芽的形成 ,实验还表明适宜的低温处理对芽的分化具有明
显的促进作用 ,经低温处理分化出的丛生芽多 ,且芽生长健壮而稳定.
待不定芽长到 2 ～ 3cm高时 ,将不定芽从愈伤组织块上切下转接到 MS补加 IAA(0.1 ～
0.5)mg/L培养基上培养 2周后 ,在 4℃冰箱冷藏 10天 ,然后放入培养室培养 1个月后 ,发现
在MS+IAA 0.5mg/L培养基上的不定芽基部出现一些乳黄色的根突 ,继续培养根突伸长成
黄褐色的根 ,根的诱导率为 63%.不经低温处理的不定芽难以成根.
表 1　不同激素组合及低温处理对雪兔子芽分化的影响
激素组合(mg/ L) 25℃培养芽诱导率(%) 4℃处理 10天后 25℃培养芽诱导率(%)
6-BA 0.5+IAA 0.05 0 0
6-BA 0.5+IAA 0.1+GA 3 0.5 6 10.1
6-BA 1.0+IAA 0.05 57.8 70.2
6-BA 1.0+IAA 0.1+GA 3 0.5 81.3 100
6-BA 2.0+IAA 0.05 41.4 53.7
6-BA 2.0+IAA 0.1+GA 3 0.5 50.3 67.9
6-BA 1.0+NAA 0.05+GA 3 0.5 60.1 73.1
6-BA 1.0+NAA 0.1+GA3 0.5 51.4 65.3
6-BA 2.0+NAA 0.1+GA3 0.5 33.7 41.7
3　讨　论
本实验以雪兔子萌发的无菌苗幼叶作外植体诱导愈伤组织 ,在 MS+NAA 2.0mg/L +6
-BA 0.5mg/L 培养基上得到了大量的黄绿色愈伤组织 ,诱导率高达 100%.在愈伤组织继
代培养中发现 ,适宜愈伤组织生长的温度为 25℃,昼夜温差及低温预处理对愈伤组织生长
均有明显的促进作用 ,这一工作为进一步研究雪兔子的器官分化 、细胞悬浮培养及细胞天然
药物合成提供了资料.
适宜雪兔子不定芽和根分化的培养基组合分别为 MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.5mg/L
+GA3 0.5mg/L 和MS+IAA 0.5mg/L ,在一定条件下芽的分化率较高 ,但根的诱导率相对较
低 ,优化生根培养基和培养条件以提高生根率是建立快繁系统的重要环节 ,我们将作进一步
的研究.在雪兔子器官发生过程中 ,低温预处理有明显促进器官分化的作用 ,这一结果与古
巴诺娃在新疆雪莲(Saussurea involucrata kar.Et kir.Ex maxim)的研究中观察到一定的低温有
利于芽和根的分化一致.这可能与雪莲类植物长期适应严寒的遗传积累有关.
参考文献:
[ 1] 　青藏高原综合考察队.西藏植物志:第四卷[ Z] .北京:科学出版社 , 1995.878.
[ 2] 　邱林刚 ,连敏 ,马忠武 ,等.雪兔子的成分研究[ J].植物学报 , 1989 , 31(5):398-401.
[ 3] 　余建华 ,程珍 ,郑尚珍 ,等.雪兔子中木脂素成分的研究[ J] .中草药 ,1997 , 23(6):283-285.
[ 4] 　瓦·古巴诺娃 ,刘杰龙 ,石玉湖.新疆雪莲的组织培养[ J] .新疆农业科学 ,1990 ,(5):221-222.
(责任校对:薛　江)
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