全 文 ：北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６ ·生物技术·
第一作者简介：何炎红（１９７９－），女，内蒙古呼和浩特人，博士，副
教授，研究方向为森林培育。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｙｈ２００１２００８＠ｉｍａｕ．ｅｄｕ．
ｃｎ．　
责任作者：白玉娥（１９６８－），女，教授，研究方向为林木遗传育种。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｙｅ６６６＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：国家科技支撑资助项目（２０１３ＢＡＤ１４Ｂ０２）。
收稿日期：２０１５－１０－２８
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０４０２７
山杏愈伤组织诱导及植株再生
何 炎 红，吴 高 殷，白 玉 娥，田 有 亮，金 牧 兰，邹 薇 薇
（内蒙古农业大学 林学院，内蒙古 呼和浩特０１００１９）
　　摘　要：以山杏成熟胚和胚乳为外植体，以ＭＳ为基本培养基进行组织培养，研究了基于山杏
经愈伤组织途径建立的再生植株技术。结果表明：以胚乳为外植体诱导愈伤组织的适宜培养基
为ＭＳ＋６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）１．０ｍｇ／Ｌ＋２，４－二氯苯氧乙酸（２，４－Ｄ）０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋
琼脂３ｇ／Ｌ；愈伤组织的继代及分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋萘乙酸（ＮＡＡ）０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗
糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ；以成熟胚诱导愈伤组织和丛生芽增殖分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋
蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ；生根培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
关键词：山杏；愈伤组织；植株再生
中图分类号：Ｓ　６６２．２０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０４－０１０１－０６
　　山杏（Ａｒｍｅｎｉａｃａ　ｓｉｂｉｒｉｃａ（Ｌ．）Ｌａｍ）主要分布于我
国北方地区，是主要的经济树种和生态绿化树种，具有
广泛应用和实际价值。山杏常用的繁殖方法是播种繁
殖和嫁接繁殖，嫁接繁殖能够保持品种的优良特性，遗
传性状稳定，但繁殖速度慢，严重阻碍优良品种的推广
应用。播种繁殖需要层积等技术，种子处理时间长，要
求高，且种子产量往往受到气候影响，限制了山杏播种
　　　　
苗的培养。而植物组织培养技术，能够在较短时间内利
用较少的材料，大量繁殖出具有统一优良性状的山杏苗
木，不受地区、气候等影响，扩繁速度比常规方法近数万
倍，已被广泛应用于多种植物［１］。但迄今为止，山杏组
培苗在生产中尚未应用，对山杏组织培养的研究报道较
少。王鸿［２］以山杏下胚轴、子叶、茎尖和无性系叶片作
为外植体，研究不同外植体、外源植物生长调节剂、培养
基类型、培养时间、接种方式等因素对增殖效率、愈伤组
织诱导率、再生频率和试管苗生根的影响。刘小蕾［３］通
过对山杏的茎尖、叶片和下胚轴的组织培养初步建立了
山杏再生体系。现以山杏胚乳、成熟胚为外植体，经愈
伤组织途径诱导丛生芽，建立再生植株，以期为山杏快
速繁殖和种质资源保护等提供参考依据

。
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｉｇｈ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　Ｌｅａｖｅｓ
ＷＡＮＧ　Ｄｅｆｅｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｍｅｉ，ＬＩ　Ｄｉｎｇｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｒａｎ，ＭＡ　Ｃｈｕｎｈｕｉ，ＳＯＮＧ　Ｊｉａｎｋｕｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２６６１０９）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ａｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＮＮ６９
ｂａｓｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＴＤＺ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　ＫＴ，
ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＩＢＡ　ａｎｄ　ＩＡＡ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ＮＡＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ，ｉｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗｈｏｓｅ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ　１００．０％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｐｅｒ　ｐｌａｎｔ　ｗａｓ　８．４７，ｗａｓ
ＮＮ６９＋ＴＤＺ　３．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ
ｏｆ　ｉｔ　ｗａｓ　４５．５％ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒ　ｗａｓ　２．２４ｐｅｒ　ｓｈｏｏｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ；ｌｅａｖｅｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
１０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６
１　材料与方法
１．１　试验材料
　　供试山杏种子取自内蒙古呼和浩特内蒙古良种繁
育基地山杏种植园区。
１．２　试验方法
１．２．１　消毒时间的选择　种子经温水浸泡２４～４８ｈ，将
种壳剥离后，滴加２滴吐温－２０，自来水冲洗３０ｍｉｎ后在
超净工作台进行消毒。用７５％酒精处理３０ｓ后用无菌
水清洗２次，再用２％ＮａＣｌＯ分别处理４、６、８ｍｉｎ，统计
污染率及愈伤组织生长状况。
１．２．２　愈伤组织诱导基本培养基的选择　以胚乳为外
植体，将其分别接种到含６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．５ｍｇ／Ｌ
的ＭＳ、１／２ＭＳ、Ｎ６和Ｂ５　４种基本培养基中，在（２５±２）℃、
暗培养条件下诱导愈伤组织，统计诱导率及生长状况。
１．２．３　胚乳愈伤组织的诱导　将外植体接种至含不同浓
度细胞分裂素６－苄基腺嘌呤６－ＢＡ（０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）、激
动素ＫＴ（０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）、生长素萘乙酸ＮＡＡ（０．１、
０．２、０．５、１．０ｍｇ／Ｌ）、吲哚丁酸ＩＢＡ（０．１ｍｇ／Ｌ）、吲哚乙
酸ＩＡＡ（０．１ｍｇ／Ｌ）、２，４－二氯苯氧乙酸２，４－Ｄ（０．１、０．３、
０．５、１．０ｍｇ／Ｌ）的不同激素组合培养基中，在（２５±２）℃、
暗培养条件下诱导愈伤组织，统计诱导率及愈伤组织生
长情况。
１．２．４　愈伤组织的继代及分化诱导　将培养２０ｄ的
愈伤组织转接至含不同浓度细胞分裂素６－ＢＡ（０．５、
１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）＋ＮＡＡ（０．１、０．２、０．５ｍｇ／Ｌ）组合的培
养基中进行丛生芽诱导，统计愈伤组织增殖率及分化
情况。
１．２．５　成熟胚芽的诱导及分化增殖　消毒后的种子
切下成熟胚接种至含不同浓度细胞分裂素６－ＢＡ（０．１、
０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）和ＮＡＡ（０．５ｍｇ／Ｌ）的培养基中，
按照２种培养方法进行培养，第１组对成熟胚先进行
暗培养１４ｄ，再进行光培养；第２组成熟胚不经暗培养
直接进行光培养。统计愈伤组织诱导率及增殖分化
情况。
１．２．６　丛生芽生根及移栽　选择叶片翠绿、生长良好、
长约２ｃｍ的芽，接种至以１／２ＭＳ为基本培养基、含不同
浓度生长素ＮＡＡ和ＩＢＡ的培养基中，统计生根率。待
试管苗根长至２ｃｍ且有侧根时，进行驯苗，并统计试管
苗成活率。
２　结果与分析
２．１　消毒时间的筛选
由表１可知，消毒时间长短对外植体的污染率无明
显差异，外植体诱导愈伤组织诱导率与消毒时间长短有
直接关系，消毒时间越长对外植体的损害越大，需诱导
时间也越长，所以选取适宜消毒时间组合：７５％酒精３０ｓ
和２％ＮａＣｌＯ处理４ｍｉｎ。
　　表１ 消毒时间的筛选
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
７５％酒精３０ｓ＋２％ＮａＣｌＯ　４ｍｉｎ　 ６．６７ 接种９ｄ，愈伤组织从伤口处长出愈伤，诱导率达９０％
７５％酒精３０ｓ＋２％ＮａＣｌＯ　６ｍｉｎ　 ６．６７ 接种９ｄ，部分长出愈伤组织，诱导率达６３．３４％
７５％酒精３０ｓ＋２％ＮａＣｌＯ　８ｍｉｎ　 ３．３６ 接种９ｄ，愈伤诱导率低，极少部分长出愈伤，诱导率为３６．６７％
２．２　愈伤组织诱导基本培养基的筛选
由表２可知，４种培养基诱导愈伤组织的诱导率都
大于８０％，愈伤组织呈白色颗粒状。诱导产生愈伤组织
时间ＭＳ最快为１５ｄ。在相同诱导时间下，ＭＳ培养基
增殖量最大，其次为１／２ＭＳ，Ｎ６最小。４种培养基可分
为高盐、中盐和低盐［４］，ＭＳ培养基为高盐培养基，诱导
率、生长状况等最好，其次为中盐培养基（１／２ＭＳ、Ｂ５），低
盐培养基（Ｎ６）最差。
　　表２ 基本培养基的筛选
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｓｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ
培养基种类
Ｍｅｄｉｕｍ　ｔｙｐｅ
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
ＭＳ　 １００．０　 １５ｄ后愈伤组织颗粒状，增殖量大、成团，白色
１／２ＭＳ　 １００．０　 ２０ｄ后愈伤组织颗粒状，增殖量少、成团，白色
Ｎ６　 ８２．５　 ２０ｄ后愈伤组织颗粒状，未增殖；白色
Ｂ５　 ９２．５　 ２０ｄ后愈伤组织颗粒状，增殖量少、成团；白色
２．３　诱导愈伤组织的激素组合筛选
由表３可知，随着生长素ＮＡＡ浓度的提高（Ｓ１～
Ｓ４），愈伤组织诱导率逐渐提高，最高达８６．１％，高浓度
的ＮＡＡ利于愈伤组织的诱导（图１）；随着生长素２，４－Ｄ
浓度的提高（Ｓ５～Ｓ８），愈伤组织诱导率逐渐提高，最高
达１００％，但２，４－Ｄ浓度过高（１．０ｍｇ／Ｌ）外植体极易褐
化（图２）；细胞分裂素６－ＢＡ浓度的增加对外植体的诱导
率无明显差异（Ｌ１～Ｌ３）；激动素ＫＴ对外植体的愈伤组
织诱导作用小（Ｌ４～Ｌ６）；然而生长素ＩＢＡ和ＩＡＡ均不
利于外植体愈伤组织的诱导（Ｌ７～Ｌ８）。综上所述，不同
生长素诱导胚乳愈伤组织活性的大小依次为２，４－Ｄ＞
ＮＡＡ＞ＩＢＡ和ＩＡＡ，诱导胚乳愈伤组织适宜培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋
琼脂３ｇ／Ｌ。
２０１
北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６ ·生物技术·
　　表３ 不同激素组合对诱导愈伤组织的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｃａｌｕｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
激素配比
Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ／（ｍｇ·Ｌ－１）
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
愈伤生长情况
Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｔｈ
Ｓ１　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．１　 １３．０ 大部分外植体膨大弯曲，部分伤口有少许愈伤
Ｓ２　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．２　 １９．４ 大部分外植体膨大弯曲，部分伤口有少许愈伤
Ｓ３　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．５　 ５５．５ 伤口处小团状愈伤，黄白色
Ｓ４　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　１．０　 ８６．１ 外植体膨大弯曲，伤口四周均有颗粒状愈伤，白色
Ｓ５　 ６－ＢＡ　０．５＋２，４－Ｄ　０．１　 ８０．５ 疏松颗粒状愈伤，白色
Ｓ６　 ６－ＢＡ　０．５＋２，４－Ｄ　０．３　 ８８．８ 紧密成团状愈伤，黄白色
Ｓ７　 ６－ＢＡ　０．５＋２，４－Ｄ　０．５　 １００．０ 紧密成团状，大量愈伤，黄白色
Ｓ８　 ６－ＢＡ　０．５＋２，４－Ｄ　１．０　 １００．０ 疏松块状愈伤，褐黄色，愈伤褐化严重
Ｌ１　 ６－ＢＡ　０．２＋２，４－Ｄ　０．５　 ９４．２ 团状，少量愈伤，白色
Ｌ２　 ６－ＢＡ　１．０＋２，４－Ｄ　０．５　 ９７．２ 团状颗粒状，大量愈伤，白色
Ｌ３　 ６－ＢＡ　２．０＋２，４－Ｄ　０．５　 ９７．２ 团状颗粒状，大量愈伤，黄白色轻微褐化
Ｌ４ ＫＴ　０．５＋２，４－Ｄ　０．５　 １１．１ 少量颗粒状愈伤，白色
Ｌ５ ＫＴ　１．０＋２，４－Ｄ　０．５　 ２７．７ 少量颗粒状愈伤，白色，部分外植体从愈伤长出根
Ｌ６ ＫＴ　２．０＋２，４－Ｄ　０．５　 ２５．０ 少量颗粒状愈伤，白色，部分外植体从愈伤长出根
Ｌ７　 ６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　０．１　 ０．０ 外植体膨大，无愈伤组织
Ｌ８　 ６－ＢＡ　１．０＋ＩＡＡ　０．１　 ０．０ 外植体膨大，无愈伤组织
图１　高浓度细胞分裂素诱导愈伤组织
Ｆｉｇ．１　Ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃａｌｕｓ
图２　２，４－Ｄ诱导愈伤组织
Ｆｉｇ．２　２，４－Ｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃａｌｕｓ
２．４　愈伤组织的继代及分化诱导
由表４可知，当６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，丛生芽分
化增殖率达６．０以上（Ｙ３～Ｙ５），但随着６－ＢＡ浓度的提高
（Ｙ６～Ｙ８），分化苗较弱并且伴随严重的玻璃化（图３）；
生长素ＮＡＡ浓度的增加主要影响愈伤组织的形成（图
４）。综上所述，适宜外植体分化的培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
图３　高浓度分裂素下愈伤的分化
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｕｎｄｅｒ
ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ
图４　适宜愈伤组织分化的培养基
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
３０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６
　　表４ 不同激素配比对愈伤组织增殖分化影响
　　Ｔａｂｌｅ　４ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
激素配比
Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ／（ｍｇ·Ｌ－１）
增殖率
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
芽分化情况
Ｂｕｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
Ｙ１　 ６－ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ３．４ 分化芽良好，部分叶片卷曲
Ｙ２　 ６－ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．２　 ３．７ 分化芽良好
Ｙ３　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．１　 ６．３ 分化芽良好，快，部分叶片卷曲，轻微水渍状
Ｙ４　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．２　 ６．０ 分化芽良好，快，部分叶片卷曲，轻微水渍状
Ｙ５　 ６－ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．５　 ６．１ 分化苗弱，基部有大量愈伤
Ｙ６　 ６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１　 ４．７ 分化苗弱，玻璃化现象严重
Ｙ７　 ６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．２　 ５．４ 分化苗弱，玻璃化现象严重
Ｙ８　 ６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．５　 ３．２ 分化苗弱，玻璃化现象严重，基部有愈伤
２．５　成熟胚丛生芽诱导及增殖和分化
经第１组试验获得的丛生芽茎节段徒长且不整齐
（图５），而第２组试验获得的丛生芽壮实且生长一致（图
６）。由表５可知，随着６－ＢＡ浓度的提高，丛生芽分化诱
导率也相对提高（Ａ１～Ａ４），当６－ＢＡ浓度为２．０ｍｇ／Ｌ
时，诱导率最大，为８２．５％，且丛生芽生长较好，低浓度
６－ＢＡ不利于成熟胚丛生芽的诱导分化。虽然Ａ５处理
的诱导率低于Ａ４处理，但Ａ５处理可同时诱导根和丛生
芽，且生长较好。
注：Ａ，暗培养１４ｄ；Ｂ，光培养。
Ｎｏｔｅ：Ａ，ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　１４ｄａｙｓ　ｉｎ　ｄａｒｋ；Ｂ，ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｌｉｇｈｔ．
图５　暗培养＋光培养条件下丛生芽诱导和增殖
Ｆｉｇ．５　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄａｒｋ＋ｌｉｇｈｔ
注：Ａ，附加６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ的培养基；Ｂ，附加６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ的培养基。
Ｎｏｔｅ：Ａ，ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ；Ｂ，ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ．
图６　成熟胚光培养下丛生芽诱导和增殖
Ｆｉｇ．６　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ
４０１
北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６ ·生物技术·
　　表５ 不同激素组合对成熟胚丛生芽诱导和增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｔｕｒｅ　ｅｍｂｒｙｏ　ｓｈｏｏｔｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
激素配比
Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ／（ｍｇ·Ｌ－１）
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
备注
Ｒｅｍａｒｋ
Ａ１　 ６－ＢＡ　０．１　 ０．０ 未见芽丛，少量愈伤组织
Ａ２　 ６－ＢＡ　０．５　 ３０．０ 愈伤组织继代后，从愈伤处长出芽丛，丛生芽数量较少
Ａ３　 ６－ＢＡ　１．０　 ５０．０ 愈伤组织继代后，从愈伤处长出芽丛，丛生芽数量较多
Ａ４　 ６－ＢＡ　２．０　 ８２．５ 愈伤组织继代后，从愈伤处长出芽丛，丛生芽数量较多，长势较Ａ３好
Ａ５　 ６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．５　 ７５．０ 愈伤组织继代后，从愈伤处长出芽丛且根从愈伤组织上分化部分长出须根；丛生芽数量较多，长势较Ａ３好
２．６　丛生芽生根诱导及练苗
叶片翠绿，芽丛长至２ｃｍ左右的芽，切下接种至
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６ｇ／Ｌ培
养基中，试管苗生根率可达７５％以上（图７、８）。试管苗
种植在蛭石∶珍珠岩∶腐殖土＝１∶１∶２混合土中，试
管苗的成活率达７５％（图９）。
注：Ａ，上部；Ｂ，底部。
Ｎｏｔｅ：Ａ，ｕｐ；Ｂ，ｂｏｔｔｏｍ．
图７　主根的分化
Ｆｉｇ．７　Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｒｏｏｔ
图８　侧根的分化
Ｆｉｇ．８　Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｔｅｒａｌ　ｒｏｏｔ
３　结论与讨论
随着消毒时间的增加，种子感染率降低，但种子的
受伤害程度较大，对外植体愈伤组织的诱导增加了诱导
时间并降低了诱导率，消毒时间短，会增加外植体的污
染率；适宜消毒方法为７５％酒精３０ｓ和２％ＮａＣｌＯ
４ｍｉｎ。
以山杏胚乳为外植体研究４种基本培养基对愈伤
注：培养基成分蛭石∶珍珠岩∶腐殖土＝１∶１∶２。
Ｎｏｔｅ：Ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ∶ｐｅｒｌｉｔｅ∶ｈｕｍｕｓ　ｓｏｉｌ＝１∶１∶２ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ．
图９　试管苗的生长
Ｆｉｇ．９　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ
组织诱导的影响，诱导愈伤组织使用高盐培养基较好。
ＭＳ培养基诱导时间短、增殖快，可作为诱导愈伤组织优
选培养基。
愈伤组织的诱导研究得出细胞分裂素６－ＢＡ优于
ＫＴ；生长素诱导山杏愈伤组织活性的大小依次为２，４－Ｄ＞
ＮＡＡ＞ＩＢＡ和ＩＡＡ，在２，４－Ｄ培养基中诱导出的愈伤组
织为白色透明颗粒状且愈伤增殖量多，２，４－Ｄ浓度的增
５０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（０４）：１０１～１０６
加，愈伤组织呈块状极易褐化死亡；所以胚乳愈伤组织
诱导的适宜培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ
０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
继代培养基不添加生长素２，４－Ｄ，增加细胞分裂素
浓度和降低生长素浓度利于丛生芽的分化，细胞分裂素
的浓度过高丛生芽玻璃化的现象严重；该试验适宜愈
伤组织分化培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
成熟胚诱导丛生芽随着６－ＢＡ浓度的提高，芽丛的
分化诱导率也相对提高至８２．５％，低浓度６－ＢＡ不利于
丛生芽的分化并且愈伤组织较少；然而６－ＢＡ与ＮＡＡ组
合丛生芽的分化和根的分化可同步进行，但根的状况
弱，不利于后期驯苗；适宜成熟胚增殖分化培养基为ＭＳ＋
６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂３ｇ／Ｌ。
丛生芽诱导生根的培养基单独使用生长素更适合
丛生芽根的分化，选取１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖
３０ｇ／Ｌ＋琼脂６ｇ／Ｌ为适宜培养基，生根率达７５％。移
栽练苗基质选取蛭石∶珍珠岩∶腐殖土＝１∶１∶２，成
活率达７５％。
山杏成熟胚诱导愈伤组织的过程能在短期实现，愈
伤组织诱导丛生芽的过程中分化率低，并且芽丛的质量
不高，叶片有卷曲、玻璃化现象严重，原因可能是细胞分
裂素浓度过高、培养基大量元素氮比例失衡、培养环境
温度过高和湿度过大等因素所导致；主要因素是细胞分
裂素使用浓度和培养瓶中湿度；细胞分裂素浓度过高促
进细胞分裂极易引起试管苗的过度生长，加速玻璃化现
象的发生，但当细胞分裂素浓度低时，丛生芽的增殖分
化就会受到严重影响；在不透气的高湿培养瓶中，不利
于气体的交换，苗的生长势快，玻璃化的发生频率也相
对较高。试验中应选取透气封口膜利于瓶内外气体的
交换，从而降低试管苗玻璃化发生。
胚乳愈伤组织进行分化培养，分化率极低，愈伤组
织不易分化，可能的原因其一是在愈伤组织诱导过程中
使用生长素２，４－Ｄ，２，４－Ｄ的使用不利于愈伤组织的分
化；其二，在分化培养基中添加的细胞分裂素和生长素
浓度配比不适宜愈伤组织的分化。
试管苗在生根过程中，部分丛生芽叶片逐渐泛黄最
后死亡，部分茎尖组织坏死，试管苗生根状况良好但生
根苗不壮现象严重；可能与培养基的各成分有很大关
系，山杏的分布在北方干旱地区，培养环境空气湿度过
大也是原因之一；具体原因还需进一步的研究。
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ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｐｌａｎｔ　ｏｆ　Ａｒｍｅｎｉａｃａ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ
ｆｏｒｍｕｌａ　ｏｆ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ　３ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓｔａｇｅ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ
ｃａｌｕｓ　ｗｈｅｎ　ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔ，ａｎｄ　ｂｅｔｔｅｒ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ　３ｇ／Ｌ．ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ　３ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｍａｔｕｒｅ　ｅｍｂｒｙｏ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ，ａｎｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ
ｐｅｒｉｏｄ　ｏｆ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｓｈｏｏｔｓ，ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ　３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ　３ｇ／Ｌ．
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