全 文 ：内瘦素重要调控因素之一 ,因此 Y5及 NPY功能阻断后血清胰
岛素下降参与了体内瘦素抵抗的改善机制。总之 ,反义寡核酸
阻断 Y5受体可显著改善瘦素抵抗与 IR, 降低高血糖与高血脂
等危险因素 , 减弱 TNF-α等的损害作用 , 促进梗死脑组织的
恢复。
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〔2007-10-12收稿　 2008-05-05修回〕
(编辑　张　铭)
白黎芦醇对 AS模型大鼠主动脉 bcl-2及 caspase-3表达影响的研究
张　丽　胡秋玲 1　贺兆发　张鹏霞 2　(佳木斯大学附属第一医院心内科 ,黑龙江　佳木斯　154002)
　　〔摘　要〕　目的　观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉壁平滑肌细胞 bcl-2和 caspase-3 mRNA表达的影响。方法　雄性 SD大
鼠复制食饵性 AS早期模型 ,用药组灌胃白藜芦醇 70mg/(kg· d)共 4w。造模给药用逆转录聚合酶链反应 ,观察对照组 、模型组和用药组主动脉壁
平滑肌细胞 bcl-2和 caspase-3mRNA的表达。结果　白藜芦醇组通过影响 AS早期主动脉壁平滑肌细胞 bcl-2和 caspase-3表达 ,阻止AS的进程。结
论　白藜芦醇对大鼠动脉粥样硬化具有保护作用 ,并能提高 AS斑块稳定性。
〔关键词〕　白藜芦醇;动脉粥样硬化;bcl-2;caspase-3
〔中图分类号〕　R285.5　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2009)04-0441-02
1　解放军第 242医院循环内科　 2　佳木斯大学儿童神经康复实验室
通讯作者:贺兆发(1962-),男 ,教授 , 硕士生导师 ,主要从事心血管药理
学研究。
第一作者:张　丽(1973-),女 ,在读硕士 , 主治医师 ,主要从事动脉硬化
机制与抗动脉硬化中药研究。
　　近年来国内外研究表明 ,白黎芦醇(Resveratrol, Res)具有
广泛的抗动脉粥样硬化(AS)、抗肿瘤及类雌激素性作用 , 并逐
渐成为预防和治疗 AS的热点 〔1, 2〕。但是其对 AS早期模型主
动脉壁平滑肌细胞 bcl-2、caspase-3的表达未见报道。本研究
旨在为白黎芦醇预防和治疗 AS的药物开发方面开辟新的
思路。
1　材料与方法
1.1　动物　健康雄性 SD大鼠 30只 , 体重 180 ～ 200 g, 由哈尔
滨医科大学实验动物中心提供。普通饲料喂养 1 w后 , 随机分
为对照组 、模型组和用药组 ,每组 10只 , 除正常组用普通饲料
喂养外 , 其余各组均给予高脂饲料(由胆固醇 4%、丙基硫氧嘧
啶 0.2%、猪油 10%和基础饲料 85.8%组成)喂养。
1.2　药物与试剂　白藜芦醇由本实验室从虎杖中提取(99%,
HPLC), 白藜芦醇标准品由 sigma公司提供。实验时用蒸馏水
配成混悬液。血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂
蛋白胆固醇(HDL-C)、测定试剂盒为上海科欣生物技术研究所
产品。 猪油:市售。 高脂饲料配方为胆固醇 1%、胆酸钠
0.3%、猪油 10%、基础饲料 88.7%。
1.3　模型制备及给药方法　高脂饲料喂养后大鼠 , 一次性腹
腔注射给予 VD3 7×105 U/kg。 4 w末尾静脉取血分离血清检
测血脂升高 , 说明造模成功 , 用药组白藜芦醇剂量(70 mg·
kg-1· d-1)连续灌胃 4 w。每周称重 2次 , 根据体重调整剂量。
正常组和模型组均灌胃等容量生理盐水。
1.4　血样采集　动物处死前禁食 12 h, 眼球取血分离血清。
试剂盒酶法测定血清脂类;分离主动脉 , RT-PCR检测 caspase-
·441·张　丽等　白黎芦醇对 AS模型大鼠主动脉 bcl-2及 caspase-3表达影响的研究　第 4期
3、bcl-2mRNA表达。
1.5　caspase-3、bcl-2 mRNA表达检测　用 Trizol试剂盒(上海
生工生物公司)提取细胞总 RNA,用逆转录试剂盒(大连 TaKa-
Ra公司)进行逆转录合成 cDNA;以 GAPDH为内对照 ,进行半
定量逆转录聚合酶链反应。 caspase-3引物序列:上游:5′-AGT
CTGACTGGAAAGCCGAA-3′, 下游:5′-CGGGATCTGTTT
CTTTGCAT-3′,扩增产物长度 342bp;bcl-2引物序列为:上游:
5′-AACTCGAGTGACAAGCCCGTAG, 下游:GTACCACCAGTTG-
GTTGTCTTTGA, 扩增产物长度 133 bp;内参照 GAPDH:上游:
5′-CCACCACCATCTTCCAGGAG-3′,下游:5′-CCTGCTTCA
CCACCTTCTTG-3′,扩增产物长度 572 bp。各组反应条件为:
94℃预变性 3 min后 , 94℃变性 30 s, 55℃退火 30 s, 72℃延伸
30 s,共进行 30次循环 , 最后再 72℃延伸 5min, 4℃冷却终止反
应。以 GAPDH为内参照同时进行 PCR。聚合酶链反应产物用
溴化乙啶的 1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。用 GDS8000凝胶扫
描分析系统分别对 caspase-3和 GAPDH进行吸光度扫描 , 计算
出 caspase-3基因表达量与 GAPDH基因表达量的比值。
2　结　果
2.1　高脂饮食对大鼠血脂的影响　对照组与模型组大鼠血清
TC、TG、HDL分别为(1.85±0.32)vs(14.83±3.91)、(0.63 ±
0.19) vs(0.91 ± 0.15)、 (1.57 ± 0.14) vs(0.58 ±
0.07)mmol/L,模型组较正常组大鼠血清的 TC、TG显著性升
高(P<0.05);而模型组大鼠血清 HDL较正常组显著性降低
(P<0.05)。
2.2　对 caspase-3和 bcl-2mRNA表达的影响　逆转录聚合酶
链反应结果显示 , 模型组大鼠主动脉壁平滑肌细胞的 caspase-3
mRNA表达较正常组增加(P<0.05)。给药 4w, 用药组较模型
组能明显增加血管 caspase-3 mRNA表达(P<0.05)。与对照
组比较 , 模型组大鼠主动脉壁平滑肌细胞 bcl-2mRNA表达减
少 , 与模型组比较 , 用药组大鼠主动脉壁平滑肌细胞 Bcl-
2mRNA表达减少 (P<0.01)。见表 1。
表 1　白藜芦醇对 caspase-3、bcl-2 mRNA
表达影响(x±s, n=3)
组别 bcl-2 caspase-3
对照组 1.367±0.075 0.822±0.031
模型组 1.238±0.0431) 0.929±0.0361)
用药组 1.203±0.0612) 0.995±0.0402)
　与对照组比较:1)P<0.05, 2)P<0.01
3　讨　论
　　Bjorkerud等 〔3〕研究发现 , 正常血管全层及粥样硬化血管中
膜 、外膜均存在凋亡细胞 , 但发生率远低于 AS病灶。 AS病灶
中细胞凋亡的类型主要是平滑肌细胞 , 此外还有一些内皮细
胞。各种凋亡细胞分布情况不同 , 凋亡的平滑肌细胞主要分布
于病灶的纤维化部分 。陈跃峰等 〔4〕也证实细胞凋亡是 AS病灶
中细胞死亡的主要形式。
　　AS斑块中细胞大量凋亡不仅直接造成脂质中区域细胞稀
少 , 而且由于巨噬细胞来源的泡沫细胞凋亡后 , 凋亡细胞难以
清除 , 发生继发性坏死 ,细胞膜完整性破坏 , 脂质为主的胞浆内
容物释放 , 堆积形成脂质池 , 促进了斑块脂质中心的形成 〔5〕。
平滑肌细胞发生凋亡有不同的途径 , 受不同基因的调控 , bc1-2
是一种细胞凋亡抑制基因 , 上调其表达引起细胞增生 ,下调其
表达促进细胞凋亡 〔6〕。白细胞介素 1β 转换酶(ICE)与细胞凋
亡密切相关 , caspase-3属于 ICE家族成员 , 不同的蛋白酶切割
caspase-3酶原使其活化 ,活化的 caspase-3是凋亡的执行者 ,使
细胞走向凋亡。Bcl-2对 caspase有抑制作用 ,参与对 caspase活
性的调节 , 可抑制过度表达 caspase-3所诱导的细胞凋亡 〔7〕。
　　本研究采用高脂食饲法造成大鼠早期动脉粥样硬化模型 ,
结果发现模型组较对照组大鼠主动脉壁平滑肌细胞抑制凋亡
基因 bcl-2mRNA表达降低 , caspase-3mRNA表达增加 , 使凋亡
率明显升高 , 与甄艳军等 〔8〕研究一致。 应用白藜芦醇治疗后 ,
下调 bcl-2mRNA表达 , 促进 caspase-3mRNA表达 , 而使凋亡率
较模型组增加 , 提示白藜芦醇对动脉粥样硬化大鼠血管内皮损
伤有明显的防治作用 ,其机制可能通过上调 caspase-3的表达 ,
调节血管内皮细胞凋亡与增殖的平衡有关 , 以延缓 AS早期病
变的进展。
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〔2008-05-30收稿　 2008-10-15修回〕
(编辑　牛铁兵)
·442· 中国老年学杂志 2009年 2月第 29卷