全 文 ：中　国　药　科　大　学　学　报
Journal of China Pharmaceutical University　2003 ,34(2):172 ～ 176
伊犁贝母总生物碱的药效学研究
王林辉1 ,季　晖1 ,王长礼1 ,何　倩1 ,李　萍2
(1 中国药科大学药理学教研室;2生药学教研室 , 南京 210009)
【摘　要】　目的:研究伊犁贝母总生物碱的镇咳 、祛痰和平喘作用。方法:以小鼠氨水引咳法 、豚鼠枸橼酸
引咳法和猫喉上神经刺激引咳法观察其镇咳作用;以小鼠酚红排泌法 、大鼠毛细管排痰法观察其祛痰作用;以豚
鼠乙酰胆碱-组胺引喘法观察其平喘作用。结果:在 10 mg/ kg剂量下 , 十二指肠给药对电刺激猫喉上神经引咳具
有显著的镇咳作用。连续灌胃给药 5 d , 伊犁贝母总生物碱在 40 , 20 , 10 mg/kg 的剂量下对小鼠氨水引咳具有显
著的镇咳作用;在 20 , 10 mg/kg 的剂量下对豚鼠枸橼酸引咳具有显著的镇咳作用 , 能显著增加大鼠毛细管排痰
量;在 40 , 20 mg/kg的剂量下具有显著增加小鼠酚红排泌量的作用 , 对乙酰胆碱-组胺所致的豚鼠哮喘具有显著
的平喘作用。结论:伊犁贝母总生物碱对实验动物具有显著的镇咳 、祛痰及平喘作用。
【关键词】　伊犁贝母;总生物碱;镇咳;祛痰;平喘
【中图分类号】　R285.5;R965　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1000-5048(2003)02-0172-05
　　伊犁贝母 Fritillaria pallidiflora Schrenk为百合
科(Liliaceae L.)贝母属(Fritillaria L.)植物 ,其鳞茎
入药 ,味苦 、甘 、微凉 。归肺 、心经。具有清热润肺 、
化痰止咳的功效[ 1] 。和其它贝母一样 ,伊犁贝母被
用于治疗咳嗽的单味或复方中药中 ,由于伊犁贝母
产量高 、生物碱的含量在同类贝母中相对较高 ,抗
病力强和药材价格低廉 ,特别是其祛痰 、镇咳等生
理活性较川贝母略强 , 近年来倍受人们的关
注[ 2 ～ 4] 。贝母属植物的化学成分主要是生物碱部
分和非生物碱部分 ,生物碱部分是其主要活性部
位[ 3] ,因此 ,本文对伊犁贝母总生物碱进行了镇咳 、
祛痰及平喘作用研究 。
1　实验材料
1.1　动　物
昆明种小鼠 ,雌雄各半 ,体重 18 ～ 22 g;SD大
鼠 ,雌雄各半 ,体重 150 ～ 190 g;豚鼠 ,雌雄兼用 ,体
重200 ～ 280 g ,由中国药科大学实验动物室提供;
家猫 ,雌雄兼用 ,体重 2 ～ 4 kg ,购于南京市郊区。
1.2　药物与试剂
伊贝总碱(FPA)含量:总生物碱 71.6%,其中
西贝素(Imperialine)37.0%, 西贝素甙(Imperialine-
3β-D-glucoside)26.7%,由江苏省连云港恒瑞制药
有限公司提供 ,批号 990129;磷酸可待因 ,青海制药
厂 ,批号 991106;愈创木酚甘油醚 ,天津新星制药
厂 ,批号 991209;硫酸舒喘灵 ,江苏省丹阳市药业有
限公司 ,批号 980506;氨水 ,南京化学试剂厂 ,批号
980401;枸橼酸 ,无锡民丰试剂厂 ,批号 981006;酚
红 ,上海试剂三厂 ,批号 920220;乌拉坦 ,上海化学
试剂厂 ,批号 990206;氯化乙酰胆碱 ,上海试剂三
厂 ,批号 971205;磷酸组织胺 ,上海东风生化厂 ,批
号 990806。
1.3　仪　器
722光栅分光光度计 ,上海第三分析仪器厂;
JJC电刺激仪 ,上海国泰仪器厂 。
2　方法与结果
2.1　镇咳作用
2.1.1　小鼠氨水引咳法[ 5] 　取小鼠 75只 ,随机分
成5组 ,每组15只(雌雄各7或 8只)。受试药设高 、
中 、低三个剂量组 ,给药剂量分别为40 ,20 ,10mg/kg ,
用磷酸可待因作为阳性对照药 ,剂量为 25 mg/kg ,以
上药物均用0.5%CMC-Na溶液混悬。阴性对照组给
予等容量溶剂(20 ml/kg),上述各组均灌胃给药 5 d ,
每日 1次。于末次给药后 1 ,2 ,3和 4 h 分别将小鼠
置于倒置的烧杯中 ,下面用 1 ml浓氨水(25.0%～
172
【收稿日期】　2002-11-06　　【＊通讯作者】　Tel:025-3271250　　E-mail:hui jicpu@163.com
【基金项目】　国家自然科学基金资助项目(编号:30070886)
28.0%)于沸水浴上蒸发 ,让氨水蒸汽刺激小鼠至预
定时间后 ,迅速将小鼠取出移至一钟罩内 ,用听诊器
在钟罩口察听小鼠1 min内的咳嗽次数 。1 min内出
现3次或3次以上典型咳嗽者 ,称为“有咳嗽” ,少于
3次者为“无咳嗽” 。根据有无咳嗽情况 ,按序贯法
的原理预定下一只小鼠接受氨水刺激的时间 ,即若
前一只小鼠为“有咳嗽” ,后一只就用低一级的时间
进行刺激 ,相反若前一只小鼠为“无咳嗽” ,后一只就
用高一级的时间进行刺激 ,相邻两个时刻的对数之
差在本实验设计中采用 0.1。测定完毕分别求出各
给药组和对照组引起半数小鼠咳嗽所需刺激的时间
EDT50 ,公式为 EDT50=lg-1c/ n(c为 r和 x 的总和 , r
为各时间组的动物数 , x 为接受刺激时间的对数 , n
为各给药组的动物数)。
求出各组的 EDT50后 ,按下列公式算出 R值:R
=(给药组的 EDT50/对照组的 EDT50)×100%,凡 R
>130%判为有镇咳作用 , R>150%则有明显镇咳
作用 。结果见表 1。
Tab 1.Effect of FPA on cough induced by ammonia liquor in mice(n=15)
Groups
Dose
(mg/ kg)
1 h
EDT50 R(%)
2 h
EDT50 R(%)
3 h
EDT50 R(%)
4 h
EDT50 R(%)
Control - 9.7 - 3.5 - 8.9 - 11.2 -
Codeine 25 17.8 183.3 19.3 551.4 12.1 135.9 8.9 79.5
FPA 40 18.2 187.6 13.8 394.3 12.8 143.8 11.0 98.2
20 19.1 196.9 17.4 497.1 15.1 169.7 11.9 106.3
10 17.1 176.3 15.6 445.7 9.3 104.5 7.1 63.4
　　由表 1可见 ,伊贝总碱在40 ,20 ,10 mg/kg 剂量
下对小鼠氨水引咳具有显著的镇咳作用 ,其中高 、
中剂量组持续至 3 h ,低剂量组持续至 2 h 。
2.1.2　豚鼠枸橼酸引咳法[ 5] 　动物筛选:取豚鼠若
干只 ,将其逐一置于3 L钟罩内 ,喷雾23.5%枸橼酸溶
液1.5 min ,数记自喷雾起7.5min内咳嗽次数 ,挑选咳
嗽次数多于 10次的豚鼠为合格动物进行试验。
将经上述筛选合格的豚鼠 40 只随机分为 5
组 ,每组 8只 ,受试药设高 、中 、低三个剂量组 ,给药
量分别为 20 ,10 , 5 mg/kg ,用磷酸可待因作为阳性
对照药 ,剂量为 12.5 mg/kg ,以上药物均用 0.5%
CMC-Na 溶液混悬。阴性对照组给予等容量溶剂(5
ml/kg),上述各组均灌胃给药 ,连续 5 d。于末次给
药后 1 、2及 4 h 按上法再分别喷雾 23.5%枸橼酸
溶液 ,将各组豚鼠给药后 7.5 min内咳嗽次数与阴
性对照组进行组间显著性 t检验。结果见表 2。
Tab 2.Effect of FPA on cough induced by criti c acid in guinea pigs(x±s , n=8)
Groups
Dose
(mg/kg)
Cough times in 7.5 min
0 h 1 h 2 h 4 h
Control - 17.0±4.6 24.1±11.9 20.5±7.2 13.8±4.7
Codeine 12.5 15.8±4.1 5.0±4.3＊＊＊ 8.8±6.1＊＊ 8.8±4.5＊
FPA 20 19.0±5.8 9.6±6.1＊＊ 8.3±3.8＊＊＊ 7.3±3.4＊＊
FPA 10 15.6±4.1 10.0±3.9＊＊ 9.4±3.4＊＊ 8.4±3.9＊
FPA 5 17.9±3.6 16.9±4.2 17.0±5.1 12.9±3.2
＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001 vs Cont rol
　　由表 2可见 ,伊贝总碱在 20 ,10 mg/kg 剂量下
对豚鼠枸橼酸引咳具有显著的镇咳作用 ,给药后 1
h即产生作用 ,药效持续至 4 h 。
2.1.3　猫喉上神经刺激法[ 5] 　将动物随机分为 4
组 ,每组 6只(雌雄兼用)。受试药组给予伊贝总碱
10 ,5 mg/kg ,阳性对照组给予磷酸可待因 6 mg/kg ,
以上药物均用 0.5%CMC-Na 溶液混悬 ,阴性对照
组给予等容量溶剂(1 ml/kg)。均一次性十二指肠
给药 。
实验时将猫用乌拉坦(1 g/kg)腹腔注射麻醉 ,
背位固定于手术台 ,在甲状软骨附近的颈中线切开
皮肤 ,分离皮下组织 ,暴露出甲状软骨 ,找到一侧迷
走神经 ,再沿迷走神经向头端找到结神经节 ,见到
喉上神经由结神经节分出。分离出喉上神经 ,按上
电极 ,给予轻微刺激 ,若有咳嗽反应 ,则证实该神经
为喉上神经。
173　2 期 王林辉等:伊犁贝母总生物碱的药效学研究
引咳阈值的确定方法:波宽 0.5 ms 、频率 32
Hz 、每次刺激时间 10 s 、相邻两次刺激的时间间隔
不少于 2 min ,在此刺激条件下 ,找到恰好使猫发生
明显咳嗽(腹肌强烈收缩 、喉肌收缩 、吐气)的刺激
电压值 ,若以比其低 0.5V 的电压刺激时不能发生
明显咳嗽 ,则此电压值即为引咳阈值。观察给药前
(0 h)及给药后 0.5 ,1 ,2 ,3 ,4 ,5 ,6 h 8个时间点的引
咳阈值 。以给药前 、后引咳阈值为观察指标 ,进行
组内 t 检验 ,结果见表 3。以给药后各时间点的引
咳阈值与给药前的引咳阈值的差值为指标 ,进行组
间 t检验 ,结果见表 4。
Tab 3.Effect of FPA on the stimulating threshold of cough(V)in cats(x±s , n=6)
Time(h) Cont rol Codeine(6mg/kg) FPA(10mg/kg) FPA(5mg/ kg)
0 0.88±0.31 1.54±0.75 1.08±0.34 0.67±0.26
0.5 0.96±0.40 4.79±2.46＊ 1.46±0.84 1.00±0.32
1 1.13±0.38 6.46±3.37＊ 2.46±1.01＊ 1.25±0.69
2 1.13±0.59 13.2±7.61＊＊ 3.63±1.91＊ 2.08±1.36
3 1.33±0.52＊ 14.1±6.52＊＊ 4.96±1.93＊＊ 5.00±4.16
4 1.75±0.69＊＊ 16.5±5.43＊＊＊ 7.46±2.81＊＊ 5.92±5.10
5 1.96±0.93＊ 16.7±5.16＊＊＊ 12.0±6.58＊＊ 8.75±6.75＊
6 2.54±1.33＊ 20.0±0＊＊＊ 17.9±5.00＊＊＊ 7.08±4.74＊
＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001 vs before administration
Tab 4.Effect of FPA on the stimulating threshold of cough(V)in cats(x±s , n=6)
Time(h) Cont rol Codeine(6mg/kg) FPA(10mg/kg) FPA(5mg/ kg)
0.5 0.08±0.38 3.42±2.84＊ 0.38±0.80 0.33±0.25
1 0.25±0.27 4.92±3.12＊ 1.38±1.00＊ 0.58±0.49
2 0.25±0.42 11.7±7.52＊ 2.54±1.96＊ 1.42±1.28
3 0.46±0.33 12.8±6.20＊＊ 3.88±1.97＊＊ 4.25±4.14
4 0.88±0.49 14.9±5.36＊＊ 6.38±2.76＊＊ 5.17±5.01
5 1.08±0.92 15.1±5.09＊＊＊ 10.9±6.52＊ 8.08±6.72
6 1.67±1.13 18.5±0.75＊＊＊ 16.9±5.09＊＊＊ 6.50±4.68
＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001 vs Cont rol.
　　结果显示 ,伊贝总碱在 10 mg/kg 剂量下 ,十二
指肠给药对电刺激猫喉上神经引咳具有明显地镇
咳作用。给药后 1 h即产生作用 ,药效持续至 6 h 。
2.2　祛痰作用
2.2.1　小鼠酚红排泌法[ 5] 　取小鼠 75只 ,随机分
为5组 ,每组 15只(雌雄各 7或 8 只)。受试药设
高 、中 、低三个剂量组 ,给药量分别为 40 ,20 , 10 mg/
kg ,用愈创木酚甘油醚作为阳性对照药 ,剂量为150
mg/kg ,以上药物均用 0.5%CMC-Na 溶液混悬 。阴
性对照组给予等容量溶剂(20 ml/kg),上述各组均
连续灌胃给药 5 d ,每日1次。末次给药 30min后 ,
腹腔注射 5%酚红溶液 ,再过 30 min后将小鼠脱颈
椎处死 ,剪开颈部皮肤 ,分离气管 ,取自甲状软骨处
至气管分叉处的气管段 ,将其浸泡于 5%碳酸氢钠
溶液中 ,充分摇匀 。于 722分光光度计 558 nm处
比色测定吸光度。将 OD值读数在酚红标准曲线
上查出酚红含量(回归方程:y =0.1516x +0.0113 ,
r=0.9997),将各组结果与阴性对照组进行组间 t
检验 ,结果见表5。
Tab 5.Effect of FPA on the amount of phenol red secretion(PRS)in mice
(x±s , n=15)
Groups
Dose
(mg/ kg) OD
Amount of PRS
(μg/ml)
Control - 0.132±0.029 0.79±0.19
Guaiphensin 150 0.237±0.093 1.49±0.61＊＊＊
FPA 40 0.216±0.068 1.35±0.45＊＊＊
20 0.211±0.085 1.32±0.56＊＊
10 0.156±0.040 0.95±0.26
＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 vs Control.
结果可见 ,伊贝总碱在 40 ,20 mg/kg 的剂量下
具有显著增加小鼠酚红排泌量的作用 。
2.2.2　大鼠毛细管排痰法[ 6] 　取大鼠 50只 ,随机
分为 5组 ,每组 10只 ,雌雄各半。受试药设高 、中 、
174 中 国 药 科 大 学 学 报 　(J Chin Pharm Univ) 34卷
低三个剂量组 ,给药量分别为 20 ,10 ,5 mg/kg ,用愈
创木酚甘油醚作为阳性对照药 ,剂量为 80 mg/kg ,
以上药物均用 0.5%CMC-Na 溶液混悬。阴性对照
组给予等容量溶剂 ,上述各组均灌胃给药5 d ,每日
1次 。末次给药后以 20%乌拉坦(1 g/kg)腹腔注射
麻醉动物 , 仰位固定 , 暴露气管 , 使毛细管(内径
0.5 mm)刚好接触气管底部表面 ,借以吸取气管后
部的痰液。当毛细管内被痰液充满或较长时间(3
～ 5 min)不上升时 ,立即另换一根 。以毛细管吸取
痰液高度作为评价药物排痰效果的指标 ,记录 2 h
的痰液分泌量 ,进行组间 t 检验 。结果见表 6。
Tab 6.Effect of FPA on the amount of phlegm secret ion in rats
(x±s , n=10)
Groups Dose(mg/ kg) Height of phlegm secretion(cm)
Control - 33.40±19.97
Guaiphensin 80 81.39±42.64＊＊
FPA 20 50.15±9.60＊
FPA 10 67.86±18.92＊＊
FPA 5 61.56±15.06＊＊
＊P<0.05, ＊＊P<0.01 vs Control.
结果可见 ,伊贝总碱在 20 mg/kg 和 10 mg/kg
剂量下能显著增加大鼠毛细管排痰量。
2.3　平喘作用[ 5]
动物筛选:取豚鼠若干只 ,逐个放入玻璃钟罩
内 ,用引喘喷雾装置喷入 2%氯化乙酰胆碱和
0.1%磷酸组织胺混合液 15 s ,观察豚鼠的引喘潜
伏期(从喷雾到哮喘发作 ,呼吸极度困难 ,直至抽搐
跌到的时间 ,引喘潜伏期大于 150 s的不选用),作
为给药前引喘潜伏期 。
正式试验:取经筛选合格的豚鼠48只 ,随机分
成6 组 ,每组 8只 ,分别为伊贝总碱 40 , 20 , 10 , 5
mg/kg剂量组 ,硫酸舒喘灵 3 mg/kg 组及阴性对照
组(0.5%CMC-Na 溶液)。各组动物均灌胃给药 5
d ,每天 1次 。在末次给药后 1 h ,同上法测定各组
动物的给药后引喘潜伏期(观察时间为 360 s ,不跌
倒者引喘潜伏期以 360 s计算)。将各组给药后引
喘潜伏期与给药前引喘潜伏期进行组内 t 检验 ,各
用药组的差值与阴性对照组进行组间 t 检验 。结
果见表7 。
结果可见:伊贝总碱在40 ,20 ,10mg/kg剂量下
对乙酰胆碱-组胺所致的豚鼠哮喘具有显著的平喘
作用 。
Tab 7.Effect of FPA on asthma induced by acetylcholine chloride and his-
tamine phosphate in guinea pigs(x±s , n=8)
Groups
Dose
(mg/ kg)
Latent period of asthma(s)
Before
administration
After
administration
Difference
Control - 87.9±30.3 97.0±48.7 9.1±42.1
Salbutamol 3 72.3±25.0 128.4±46.9＊＊ 56.1±39.6
FPA 40 78.8±18.6 211.1±83.5＊＊ 132.4±90.8
20 79.8±24.9 141.3±47.8＊ 61.5±30.1
10 97.4±25.5 110.0±34.8＊ 12.6±13.6
5 85.1±15.6 88.8±17.0 3.6±9.96
＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 vs before administration;#P<0.05 , ##P<
0.01 vs Control.
3　讨　论
1)本文用猫喉上神经刺激引咳法观察到伊犁
贝母总生物碱具有明显地镇咳作用 ,说明其镇咳作
用的部位可能在中枢。关于观察指标的选择 ,汪丽
燕等[ 7]曾以固定的刺激参数(频率 16 Hz 、波宽 0.5
ms 、电压 0.3 ～ 0.5 V 、刺激时间 15 s 、间隔时间 20
min)给予刺激 ,以咳嗽的次数和强度为观察指标 。
而本实验在波宽 0.5 ms 、频率 32 Hz 、刺激时间 10 s
的条件下 ,以引咳电压值(引咳阈值)为观察指标 。
我们在实验中发现以咳嗽次数与强度为观察指标
有不妥之处 ,由于实验动物为家猫 ,其个体差异很
大 ,固定的一个刺激条件不一定能使所有的猫都产
生典型的连续的咳嗽 ,同时麻醉的深度难以掌握 ,
较浅或较深的麻醉均使咳嗽阈值不一样。因此固
定一个刺激条件不太可行;在 15 s中 ,当刺激达到
引咳阈值以上时 ,猫发生咳嗽的次数一般不超过 6
次 ,且强度不等。给镇咳药后 ,在同样刺激条件下 ,
咳嗽的次数会减少 ,当药效较强时可不发生咳嗽 。
因此 ,咳嗽次数的变化幅度较小 ,以此作为观察指
标不能精确反映药效 ,以咳嗽强度为指标较可靠 ,
但结果计算较麻烦。以引咳电压值作为观察指标
不受上述限制 ,更能准确方便地反映药效变化。
2)实验结果表明伊犁贝母总生物碱具有平喘
作用 ,其平喘机理可能与下列因素有关:西贝素是伊
犁贝母总生物碱中的一种主要单体生物碱 ,研究表
明西贝素具有松弛离体豚鼠气管和支气管平滑肌的
作用[ 8] ,Eglen RM等对西贝素的 M受体功能测试和
M受体的结合实验表明 ,西贝素是一个选择性的M2
受体拮抗剂[ 9] 。徐惠波等研究表明:伊犁贝母总生
物碱对流感嗜血杆菌有明显的抑菌作用 ,其 MIC 为
175　2 期 王林辉等:伊犁贝母总生物碱的药效学研究
6.25mg/ml ,对肺炎球菌和金黄色葡萄球菌亦有很
好的抑菌作用 ,其MIC 为12.5 mg/ml ,对甲乙丙型溶
血性链球菌的 MIC 为 50 mg/ml。以 200 ,400 mg/kg
灌胃给药对二甲苯所致的小鼠耳肿胀具有抑制作
用[ 4] ,其抑菌和抗炎作用对哮喘的治疗也很有益。
祛痰实验结果显示伊贝总碱具有增加呼吸道分泌量
的作用 ,说明其具有稀释性祛痰作用。
本实验表明 ,伊犁贝母总生物碱具有镇咳 、祛
痰及平喘作用 ,这与中医的清热润肺 、化痰止咳的
功效相吻合。呼吸系统的疾病往往咳 、痰 、喘伴随
发生 ,在治疗时应综合考虑 ,而伊犁贝母总生物碱
同时对这些症状都有治疗作用 ,这是伊犁贝母被中
医用于呼吸系统疾病的原因之一。
参 考 文 献
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Studies on the Pharmacodynamics of the Crude Alkaloids
from Fritillaria pallidiflora Schrenk
WANG Lin-Hui1 , JI Hui1 , WANG Chang-Li1 , HE Qian1 , LI Ping2
1Department of Pharmacology and 2 Department of Pharmacognosy , China Pharmaceutical University , Nanjing
210009 , China
【ABSTRACT】　AIM:The purpose is to study the pharmacodynamics of the crude alkaloids from Fritillaria pallidi-
flora Schrenk(FPA).METHOD:The antitussive activities of the crude alkaloids were investigated through testing the
cough times induced by ammonium hydroxide in mice , the counts of cough induced by critic acid in guinea pigs before
and after administration and the stimulating threshold of cough in cats;The expectorant activities were studied by test-
ing the amount of phlegm secreted inmice and rats.The Asthma suppression effect was also studied by the asthma time
induced by acetylcholine chloride and histamine phosphate in guinea pigs.RESULT AND CONCLUSION:The re-
sults showed the antitussive , expectorant activities and asthma suppression effect of the crude alkaloids are very signifi-
cant.
【KEY WORDS】　Fritillaria pallidiflora Schrenk;Crude alkaloids;Antitussive action;Expectorant effect;Asthma
suppression effect
【FOUNDATION ITEM】　This project was supported by National Natural Science Foundation of China(No.30070886)
176 中 国 药 科 大 学 学 报 　(J Chin Pharm Univ) 34卷