全 文 ：中 国 药 科 大 学 学 报
OJ u r n a l o f Ch in a Ph a rm a c e u ti ca l U n iv e ist t y 1 9 9 3 ; 2 4 ( 6 )
:
3 4 5一 3 4 7 3 4 5
S L s
~ 胶束荧光法测定元胡中延胡索乙素的含量
庞志功 汪宝琪 黄 涨
(西安医科大学药学系 ,西安制药厂 )
摘 共 根据胶束具有增溶增敏的作用 ,在 10 余种表面活性荆中 ,筛选出十二烷荃磺酸钠为
胶束试剂 ,在优化的实验条件下 ,对元胡中镇痛作用最强的延胡索乙幸进行了含 t 测定研究 . 用国
产 950 型荧光光度计达到了高灵敏的检测 ,线性范围为 2 x 10 -一 s x l o 一 , 刁而 ,最低检测限为 2 . 5
x l o 一 ` , s /耐 ,效果良好 。
关健词 胶束荧光法 ,延胡索乙素 ,含 t 测定
元胡为婴粟科紫茧属植物 延胡素 (。 卿犷
汕 脚汕公即 w · T · w an s) 的块茎 , 其主要成分为延胡素甲素 、 乙素 、 丙素 、 丁素 、 戊素 、 辛
素 、 壬素 、癸素 、子素 、 丑素 、 寅素 、 各高白屈菜
孩 、 黄连碱 、延胡索胺碱等 , 其中以延胡索乙
素 (协仕曲列 r o , 加 a int 。 )的镇痛作用较强 l[J ,
因此对元胡中所含延胡索乙素的测定有着重
要的实用价值 。 文献报道可以用导数光谱
法 :[] 。 紫外吸收光度法川 、双波长扫描法 〔 ,] 、
容 t 、 比色法对延胡索乙素进行测定 ,而未见
用胶束荧光法进行测定的报道 。 本文利用胶
束试剂能够对具有刚性分子结构的有机分子
进行增溶增敏的特点 ,选用十二烷基破酸钠
( s货 ) 为胶束试剂 ,对延胡索乙素进行了灵
敏快速的测定 . 其最低检测限可达 2 . 5 X 10 “
g / m l
, 线性范围为 2 x 1 0一 ~ s x i o一 r g /m l ,
经对 3 个平行样品进行 12 次测定 ,变异系数
为 3 . 0 3~ 5 . 1 3 % 。
实驻部分
1 仪毖试荆 、试材
R F
一
5 4 0 型荧光分光光度计 ( 日本 ) , 9 30
型荧光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) , 快速
混匀器 (江苏国华仪器厂 ) . 十二烷基破酸钠 、
经甲基纤维素 、 硅胶 G 、 苯 、抓仿 、 95 %乙醉等
(西安化学试剂厂 ) . 元胡 (浙江 ) 。
实验所用试剂均为分析纯或优级纯 ,所
用水均为去离子双蒸水 .
2 实脸方法
2
.
1 前处理
准确称取烘至恒重的元胡粉末 0 . 5 0 0 8
s
、
0
.
5 0 2 1 9
、
0
.
5 0 0 9 : 三份样品 , 分别置 于
I O0 nU 试剂瓶中 , 用少许氨水润湿后 ,各加
苯 10 un , 漫泡 24 h ,准确移取上清液 5 m l 于
三只具塞锥形瓶中 , 用冷风吹干苯液后加入
苯 1 而 振荡使之溶解 。 用微量注射器分别移
取上清液 30 闪在硅胶 G 一梭甲基纤维素钠薄
板上点样 ,并同时点 2 x 1 0一 ` s/ ml 标准品 20
川进行对照 , 于环己烷 一抓仿 一 甲醉 (5 : 3 :
0
.
5 )的展开剂中上行展开 。 待上行 12 一 15
c m 后 ,将薄板取出吹干溶剂 ,用碘蒸气显色 ,
画出与标准品相对应 (砒 约为 0 . 42 )的绿色
荧光斑点后 ,再在恒温箱中脱碘 15 5 ,刮下斑
点于离心管中 ,加入 95 % 乙醇 6 m l , 进行洗
脱 、 离心 . 取上清液 l ml 于 10 时 量瓶中用
95 %乙醉定容 。
2
.
2 上机 .I 定
分别取上述样品定容液 l ml 于 25 ml 量
瓶中 , 加 s SL 饱和液 4 . 5 m l , 加 p H 为 一 0 2 的
柠檬酸一盐酸缓冲液 l ifn , 加水适量在快速混
收稿日期 1 9 9 3一 0 5一 1 4
3 4 6 中 国 药 科 大 学 学 报 2 4 卷
匀器上振动 l ~
, 再用水定容 ,在 入ex 为 360
n m
, 肠m 为 4 2 0 n m , 灵敏度为 2 的条件下测
定荧光强度 , 并用同法作随机工作曲线 , 进行
回归计算求取含量 。
2 的条件下均出现混浊或沉淀 , 只有在 PH 为
1
.
02 的条件下 , 既不 出现混浊 , 且荧光值较
大 。 本文选择 PH 为 1 . 02 的柠像酸钠 一盐酸缓
冲溶液作为介质 .
3 结果与回收
按实验方法测得样品含量见表 1 . 按标
准加入法求得回收率见表 2 。
T . b 1
.
T I . e r目 lu st of d e t er m加 a t j o n
aS m p le N
o
.
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8
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1 2 4
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1 2 4
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9
.
0 5 7
1 0
.
1 8 7
1 0
.
9 4 3
12
。
0 7 5
9 3
。
2 6
10 3
.
2 3
9 3
。
9 7
9 8
.
7 9
9 7
。
3 1
4
.
1
.
4 振荡时问和滋度的选择
为了加速胶束的形成 , 本文在不同温度
下进行不同时间的振荡 ,结果表明在室温下
振荡 1 而 n 最为恰当 .
4
.
2 线性范围
本文先后考查了 Z x l o一 `一 Z x l 。一 哪
m l 四个数量级的线性关系 , 结果表明在 Z x
1 0一 ,~ 8 x 1 0 一
,
g / m l 3 个数量级内 (增益分别
为 1 . 2 . 3) 呈 良好的线性关系 ,其回归方程和
相关系数见表 3 .
T a b 3
. 肠 n ea r ar n ge
gn一1234
4 讨 论
4
.
1 实脸条件的选择
4
.
1
.
1 激发和发射波长的选择
经在 R F s40 分光光度计上进行荧光扫描 ,
结果见图 1 。 当使用 S比 为胶束试剂时 ,激发
波长出现红移 ,发射波长不变 , 而荧光强度增
强 。
4
.
1
.
2 胶末试荆和用贡的选择
本文选择 s岱 为胶束试剂 ,相对荧光强
度可增加 5 . 5 倍 。 实验表明选用 4 . s ml 饱和
的 s sL 溶液为最佳体积 。
4
.
1
.
3 胶束形成介质的选择
本文先后对不同缓冲体系的不同 PH 值
缓冲溶液进行了平行实验 ,结果表明在 PH >
N o
. 份 d e r ,
g / m l
10 一 7
1 0一
10一
R闷 . j o n 阅 ua t l闭
I夕 = 1
.
6 2 5C + 1 6
.
0 5
I , = 1
.
O7 C十 13 . 2 5
I , = 1
.
1 7 5 C十 9 . 3
C o rt e场 t lo n
CO IC i e n t
r = 0
.
99 5 9
,
= 0
.
9 9 9 3
r = 0
.
99 3 9
4
.
3 精密度与德定性实脸
本文选用 Z x l o一 g /时 标准液按实验方
法 连续 测 定 1 次 , 测 得 荧 光强 度 分别为
1 1
.
8
,
1 1
.
9
, 1 1
,
8 , 1 1
.
8
,
1 1
.
9
,
1 1
.
9
,
1 1
.
9
,
n
.
9
, 其平均值 又一 1 . 86 , 相对标准差 SR D
一 0 . 4 3% , 最低检测限 L o o 一 2 . 5 x 1 0一 ” s /
m l
。
6 期 庞志功等 : 5 L s 一胶束荧光法测定元胡中延胡索乙家的含 t 3 4 7
本文对 2 x 1 0一 ’ g /而 标准液按实验方法
每隔 l h 测定荧光强度一次 ,经 48 h 连续测
定 ,其荧光强度一直保持不变 。
4
.
4 固定相与流动相的选择
本文先后用硅胶 G 、 硅胶 G F Z : 。 、 硅胶 G -
CM c
一
Na 薄板 ,分别在不同的展开剂 : 苯乙醉
( 4
:
1 )与环己烷 一抓仿 一 甲酸 ( 5 : 3 : 0 . 5 )中
进行薄层色谱分离 , 实验结果表明 ,选用硅胶
G
一 CM C
一
Na 薄板 ,环己烷 一抓仿 一甲酸 ( 5 , 3 ,
0
.
5) 为展开剂 ,分离效果最好 。
为了除去薄板和展开剂中的干扰杂质 ,
本文经两次展开 ,第一次不点样品 , 用展开剂
将薄板全部上行展开一次 , 吹干薄板上的溶
剂 ,再正式点样 ,上行展开 ,效果极好 。
4
.
5 胶束荧光增敏的机理初探
S仿 为一种阴离子表面活性剂 , 在 25 ℃
下胶束临界浓度 C M C 为 1 . 2 x 1 0一 , m ol / L ,
胶束簇分子聚集个数为 40 ~ 1 0 闹 。 延胡索
乙素的分子结构属于一种刚性分子结构 , 因
此当待测溶液中的 s SL 浓度达到它的临界浓
度时 ,则可形成疏水基团向里 ,亲水基团向外
的胶束 ,此种胶束能包含具有刚性分 子结构
的延胡索 乙素 , 并因徽环境的改变而增加延
胡索乙素的溶解度 ,再加上胶束的保护使分
子间碰撞失活现象减少 , 提高了荧光量子效
率 , 增大了相对荧光强度 , 提高了分析的灵
敏度 。
今 考 文 ’献
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( 8 )
1
76 0
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