全 文 ：JOURNAL OF BEE（Monthly）蜜蜂杂志 (月刊)2016年第10期
收稿日期：2016-08-01
作者简介：陈梦迪（1988-），女，山东菏泽人，硕士研究生，主要研究方向为蜂产品质量控制及化学成分分析。
通讯作者：董 霞（1965-），教授，E-mail：dxia0709@126.com
●实验研究报告
苕子蜜中花粉形态及相对含量测定
陈梦迪 1,2，董 霞 1,2，马迎宾 1,2，兰建强 3
(1.云南农业大学东方蜜蜂研究所，云南农业大学食品科学技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学动
物科学技术学院，云南 昆明 650201；3.云南农业大学烟草学院，云南 昆明 650201)
摘 要：采用整体封片法和醋酸酐分解法，在光学显微镜
下测定了云南苕子蜜中花粉的相对含量，并通过扫描电镜观察
花粉形态特征。研究结果表明：苕子蜜中花粉总数和该蜜源花
粉数分别为9493±780个/g和4780±250个/g，花粉粒具有
1孔沟，近长球形，极面观圆形，赤道面观椭圆形，花粉大小
约33.26μm×20.66μm。
关键词：苕子蜜；花粉；相对含量；形态特征
中图分类号：S896.1文献识别码：A
文章编号：1003-9139(2016)10-0001-03
TheDeterminationofRelativeContentand
MorphologicalCharacteristicsinPollenfrom
ViciaVillosaRothHoneyofYunnan
CHEN Meng-di1，DONG Xia1,2，MA Ying-bin1,2，LAN Jian-qiang3
(1.Eastern Bee Research Institute, College of Food Science
and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming,
Yunnan 650201, China; 2. College of Animal Science and
Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan
650201, China;3.College of Tobacco, Yunnan Agricultural
University, Kunming, Yunnan 650201, China)
Abstract：We used slide-integratd technique and
acetic anhydride technique to measure the relative pollen
content and morphological characteristics of pollen from
vicia villosa roth honey of Yunnan. Our results showed that
the total number of pollen grain from vicia villosa roth
honey and pure pollen grain from vicia villosa roth was
9493±780 /g and 4780±250 /g, respectively. The volume of
pollen grain was 33.26μm×20.66μm with one colporate in it,
and the shape of pollen grain was subprolate in overall view,
rounded in polar view and elliptical in equatorial view.
Key words：vicia villosa Roth honey; relative pollen
contents; morphological characteristics
苕子是豆科（Leguminosae），碟形花亚科（Papil-
ionoidea），野豌豆属（Vicia） 中人工栽培或野生的草
本植物[1]，为云南春季主要蜜源植物，全省范围均有
分布，主要分布在罗平、泸西、宣威、曲靖、巧家、
会泽、昭通、鲁甸、宁蒗、陇川、祥云、德钦等县
[2-3]，为云南的主要春季蜜源。苕子开花期的适宜温度
是14~20℃，而流蜜则需要温度较高，气温达到20℃
时才开始泌蜜，泌蜜最适温度为24~28℃，故而云南
苕子泌蜜高峰期为3~5月[4]。毛叶苕子花冠较深，泌
蜜量较少，而光叶苕子花冠较浅，泌蜜量相对较高[3]。
苕子蜜除了具有保健营养普通功效外，还可作为美容
佳品，可使皮肤细腻、有光泽，有健美肌肤、滋容养
颜之功效[4-5]。
评价蜂蜜产品质量优劣有很多手段，通过对蜂蜜
中花粉的种类和含量来鉴定蜂蜜的纯度和品质[6-8]，已
成为一种重要手段。目前蜂蜜中花粉种类和含量测定
方法普遍采用整体封片法和醋酸酐分解法[9]。整体封
片法简单易操作，适用于初级阶段对花粉形态鉴定和
数量统计，但是对于花粉表面纹理不能较好的观察。
醋酸酐分解法是将醋酸酐-浓硫酸（9∶1） 混合液作
为分解液，通过加热处理，将花粉细胞内容物除去，
使花粉外表结构更好的显现出来，更容易对蜂蜜中不
同种类花粉进行区分和比较。本实验同时采用两种方
法，从不同角度观察计数，对苕子蜜中含有本蜜源植
物所占比例以及苕子花粉形态进行合理的评价。
1 材料与方法
1.1材料
实验材料：苕子蜜（云南农业大学东方蜜蜂研究
所科研产品，云南农大东方蜜蜂产品加工实验厂出
品）；主要试剂：醋酸酐、浓硫酸等试剂均为分析纯。
1.2设备
扫描电子显微镜 （QUANTA 200）；光学显微镜
(OA/8850，日本)；离子溅射仪 （SCD 005）；低速台
式离心机(TDL-5013，上海)；电子天平 （A×
2232H/E）；血球计数板（25×16）。
1.3方法
1.3.1 样品处理
准确称取苕子蜜 10 g 置于装有少量蒸馏水
1
蜜蜂杂志 (月刊) JOURNAL OF BEE（Monthly） NO.10 2016 Oct.
（34℃） 的烧杯中，溶解完全后定容至100mL容量瓶
中。把已定容好的苕子蜂蜜水取15mL分别置于15mL
离心管中离心15min，转速为2500r/min，把两个离
心管分别标记为管1和管2。待初次离心结束后，取
管1去上清液，加蒸馏水按上述同样条件进行二次离
心和三次离心，待离心结束后完全倒去上清液，并且
用吸水纸将离心管内水分全部吸干，底部残留物即为
花粉粒残渣。
管2则采用醋酸酐分解法进行处理，倒去初次离
心的一半上清液，逐滴缓缓加入醋酸酐 - 浓硫酸
（9∶1） 混合液5mL，混合均匀后将离心管置于80℃
水浴10min，待分解液完全冷却后，将离心管置于转
速为 2 500 r/min 下离心 15 min，第二次离心结束后
倒去上清液，加入蒸馏水再次离心，共漂洗三次，最
后同管1一样得到底部的花粉粒。
1.3.2镜检与加样
镜检：在计数板上加样品前，需对血球计数板镜
检，若有污染物需要进行清洗晾干，确保每个小格内
没有花粉残留物或其他污染物后才可使用，以免影响
观察效果。
加样：将处理好的花粉粒残渣加水至1mL，充
分混合均匀，用移液枪吸取5μL花粉样液滴于血球
计数板计数区，为减少气泡的出现，使用推压法缓缓
盖好盖玻片，静置3~5min后进行显微镜观察计数。
1.3.3显微镜计数
将加样静置后的血球计数板固定在显微镜载物台
上，首先用100倍（10×10） 确定计数室位置，调节
清晰度使格线清晰可见，然后将物镜转换为 20 倍，
即在放大倍数为200倍下对四角中格和中间中格内的
花粉颗粒进行检视，每中格读取4小格内本蜜源植物
和其他蜜源植物的花粉个数，共读取20个小格。按
同样方法，对同一试样进行3次平行测定。
1.3.4结果计算
根据显微镜计数读取的20个小格内的本蜜源植
物花粉数和总花粉颗粒数，计算出每小格本蜜源植物
花粉粒数和总花粉颗粒数的平均数，依照下列公式计
算：
试样中花粉个数（个/g） =每小格中花粉总颗粒
平均数×400×花粉稀释后样液总体积 /(计数室体
积×称取样品蜂蜜质量）
试样中本蜜源植物花粉个数（个/g） =每小格中
本花粉植物花粉粒平均数×400×花粉稀释后样液总
体积/(计数室体积×称取样品蜂蜜质量）
试样中本蜜源植物花粉粒比例=试样中本蜜源植
物花粉颗粒数/试样中花粉总颗粒数×100%
注：血球计数板为 25×16 规格，即 25 个中格，
每个中格有16个小格，共有400个小格，计数室体
积为0.1mm3。
1.3.5电子显微镜下花粉形态观察和测量
在光学显微镜下对苕子蜜中所含有的蜜源植物
花粉进行了镜检和初步形态观察后，并在电子显微
镜下对其形态进行仔细观察。将通过以上步骤离心
得到的花粉自然干燥，并撒到样品托的导电胶上，
在 SCD 005 离子溅射仪中真空喷金镀膜，QUANTA
200型扫描电子显微镜下观察纹饰及花粉孔的个数，
并测量其直径。
2 结果与分析
2.1苕子蜂蜜中花粉相对含量与浓度
苕子蜜经过两种不同方法处理得到的花粉沉淀，
加水稀释到 1 mL，经过分析和血球计数板计数后，
初步确定了1g云南苕子蜜中含有花粉总颗粒数和本
蜜源植物花粉颗粒数，计数出苕子蜜中含有苕子花粉
的相对含量百分比。每种处理方法都有 3 次平行实
验，实验结果见表1。
由表1可知，采用醋酸酐分解法观察到的花粉相
对于整体封片法较多一些，同样采用醋酸酐分解法与
曾志将等人测得结果有较大差异，曾志将等[10]测得苕
子蜜中花粉总数和本蜜源花粉数分别为 1 250±770
个/mL和550±390个/mL，本实验中测得苕子蜜中
花粉总数和本蜜源花粉数分别为9493±780个/g和
4780±250个/g，由此可见同种蜜源植物蜂蜜不同地
区、不同时节采集，花粉数量差异很大。王工等[7]通
过研究发现蜂蜜中花粉数量及本蜜源植物花粉含量的
多少直接受放蜂环境的影响。2种方法测得苕子蜜本
蜜源植物花粉数占总花粉数的百分数均大于 50%，
符合单花蜜的标准。张金震等[10]通过测定我国单花蜜
中本蜜源植物的花粉相对含量发现，本蜜源植物花粉
含量相对较低并不代表其纯度就低，需结合多种因素
表1苕子蜜中花粉相对含量与浓度
处理方法
花粉总颗粒
数（个/g）
本蜜源植物花粉
颗粒数（个/g）
本蜜源植物
花粉比例（%）
整体封片法
1 8 720 4 800 55.05
2 7 840 3 930 50.13
3 10 080 5 170 51.29
平均 8 800±632 4 633±368 51.14±1. 8
醋酸酐分解
法
1 10 820 4 900 45.29
2 9 540 5 140 53.88
3 8 120 4 300 52.96
平均 9 493±780 4 780±250 50.70±2.72
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JOURNAL OF BEE（Monthly）蜜蜂杂志 (月刊)2016年第10期
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●病敌害防治
关于螨扑使用的体会
薛承坤
（江省如东县双甸镇高前村九组，江省 如东 226404）
当前市场上的螨扑质量良莠不齐，优质螨扑可杜
绝大小蜂螨，差的几乎毫无作用。因而要细心跟踪遴
选，择优选用。选到了好的蟎扑，使用中还要注意如
下几件事： （1） 对付大蜂螨要求蟎扑释放的药物浓
度要高，巢口投入每面用5～6天。（2） 对付小蜂螨
要求药片释放的药品浓度可以低一点，巢口投入每面
可用 20 天，1 片优质螨扑片可保群内 40 天无小蜂
螨。因而夏秋治过大蜂螨的螨扑可以
留着治小蜂螨，过去用10天就扔有些
浪费。（3） 气温20℃上下每个继箱群
可巢口投放 1 片，30℃以上要减少到
0.5片或1/3片。气温高药物释放快减
少用量防药害。上述 1 片指的是‘一
顶四’剂型，其余同。（4） 巢口小用
量可适当减少，用0.8片，巢口15cm
可用1片。但35℃以上即使抽去巢门板用1/3也就行
了，要严防药害。（5） 建议晴好天气8：00前后巢
口投放，注意观察蜂群做到安全用药。上述是本人的
使用体会，不一定准确，仅供参考。大家可以根据当
地气候、蜂群情况及所购螨扑进行试验，摸索出最佳
用法、用量。
收稿日期：2016-08-08
进行综合判断。
2.1.2电子显微镜下花粉形态观察和测量
在显微镜下对苕子蜜中本蜜源花粉形态观察的
同时进行了摄影，本蜜源花粉粒的形态特征见图
1-4所示。
经光学显微镜(×100)观察到苕子蜜中花粉粒形状
为椭圆形，有一个萌发孔，但表面纹理无法辨别，如
图1所示。图2-4为扫描电子显微镜图像，观察可得
花粉粒具有1孔沟，近长球形；极面观圆形，赤道面
观椭圆形，花粉大小约33.26× 0.66μm，沟宽条形，
沟模具有颗粒，孔突出，孔膜具皱。外壁表面光滑或
具细纹状纹饰或具高低不平的起伏前皱。
3 讨论与分析
不同花粉有着不同的形态特征，进而可以根据主
要花粉的形态判别蜂蜜的种类。蜂蜜中含有本蜜源植
物的花粉含量可以作为判断蜂蜜纯度的一种手段，但
并不代表本蜜源花粉含量较低其纯度就一定低，需要
结合不同因素进行具体判断，如放蜂场地正处于本蜜
源植物集中分布区内，又正直开花盛期，则蜂蜜含有
的花粉数量就相对较多，本蜜源植物花粉含量百分率
也会相对升高；其他蜜源植物的开花状况也会对蜂蜜
中主花粉含量造成一定的影响。
参考文献：
[1] 董霞. 蜜源植物学[M].北京：中国农业出版社，2009.
[2] 匡邦郁.云南的蜜源植物及其区划研究[J].云南农业大学学
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蜂蜜中花粉相对含量测定[J].中国蜂业，2012（Z3）:33-35.
图3（赤道面） 图4（极面）
图1（光学显微镜） 图2（尺寸图）
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