全 文 ：第 36卷Environmental Science & Technology
第 36卷 第 1期
2013年 1月
Vol. 36 No.1
Jan. 2013
水质基准全称是水环境质量基准（Ambient water
quality criteria，AWQC），是环保部门制定水质标准，
评价水质和进行水质管理不可或缺的科学依据和理
论基础[1]。当前，我国水质基准的系统研究尚未开展[2]，
水质标准的制定大多依据世界卫生组织和美国等发
达国家的水质基准资料[3]，如果直接依靠国外的基准
《环境科学与技术》编辑部：（网址）http://fjks.chinajournal.net.cn（电话）027-87643502（电子信箱）hjkxyjs@126.com
收稿日期：2012-02-16；修回 2012-08-07
基金项目：环保公益性行业科研专项（201009033）
作者简介：葛顺（1986-），男，硕士研究生，主要研究方向为生态毒理，（电子信箱）geshun123@163.com；*通讯作者，（电话）025-58731089（电子信箱）
chenmd@nuist.edu.cn。
葛顺，陈敏东，宋玉芝，等.毒死蜱对斜生栅藻急、慢性毒性效应的研究[J].环境科学与技术，2013，36（1）：56-60. GeShun，Chen Min-dong，Song
Yu-zhi，etal.AcuteandchronictoxicityofchlorpyrifostoScenedesmus obliquus[J].EnvironmentalScience&Technology，2013，36（1）：56-60.
毒死蜱对斜生栅藻急、慢性毒性效应的研究
葛顺 1， 陈敏东 1*， 宋玉芝 1， 邱伟健 1， 龚旋 1， 周军英 2， 单正军 2， 范晓龙 3
（1.南京信息工程大学环境科学与工程学院，江苏省大气环境监测与污染控制高技术重点实验室，江苏 南京 210044；
2.环保部南京环境科学科学研究所，江苏 南京 210042； 3.新南威尔士大学，澳大利亚）
摘 要：为了解有机磷农药毒死蜱污染对本土水生敏感性物种斜生栅藻的毒性效应，在实验室条件下采用静态毒性实验，研究了毒
死蜱对斜生栅藻 96 h急性毒性效应，并在急性试验基础上进行慢性试验，分析了不同浓度毒死蜱存在 14 d后斜生栅藻叶绿素含量、可溶
性蛋白以及丙二醛含量。结果表明，毒死蜱 96 h EC50为 8.4 mg/L；毒死蜱对斜生栅藻叶绿素 a无明显毒性效应；但在前期短时间，低浓度
作用下能促进可溶蛋白、MDA含量的上升，但在后期长时间胁迫作用下，总体可溶蛋白、MDA含量呈下降趋势；这说明，可溶蛋白和
MDA这两个指标对毒死蜱敏感，可作为生物标志物来指示有机磷农药污染物对水生生物的影响，研究结果可为本土水生敏感性物种的
保护和农药安全使用标准的制定提供理论依据。
关键词：毒死蜱； 斜生栅藻； EC50； 叶绿素 a； 可溶蛋白； MDA
中图分类号：X172 文献标志码：A doi：10.3969/j.issn.1003-6504.2013.01.013 文章编号：1003-6504(2013)01-0056-05
Acute and Chronic Toxicity of Chlorpyrifos to Scenedesmus obliquus
GE Shun1， CHEN Min-dong1*， SONG Yu-zhi1， QIU Wei-jian1，
GONG Xuan1， ZHOU Jun-ying2， SHAN Zheng-jun2， FAN Xiao-long3
（1.Jiangsu Key Laboratory of Atmospheric Environment Monitoring and Pollution Control，School of Environmental
Science and Engineering，Nanjing University of Information Science and Technology，Nanjing 210044，China；
2.Nanjing Institute of Environmental Science，Ministry of Environment Protection，Nanjing 210042，China；
3. The University of New South Wales, Australia）
Abstract：To understand toxic effects of pollution by organophosphorus pesticide as chlorpyrifos on the local aquatic
sensitive species as Scenedesmus obliquus，under laboratory conditions，based on the static toxicity test，the acute toxic
effects of chlorpyrifos on Scenedesmus obliquus for 96h were investigated. Based on the acute test，the chronic experiments
were also done，in which the contents of chlorophyll a，soluble protein and MDA in Scenedesmus obliquus were analyzed for
different concentrations of chlorpyrifos in 14 d. Results showed that the 96 h EC50 of chlorpyrifos was 8.4 mg/L and no
obvious toxic effect of chlorpyrifos was observed in chlorophyll a of Scenedesmus obliquus. However in the short time，the
contents of solute protein and MDA were increased by low concentration of chlorpyrifos，but under the after effect of stress
for a long time，the contents of total soluble protein and MDA could be reduced，which indicated that the two indexes of
soluble protein and MDA were sensitive to chlorpyrifos such that they could be used as biological markers for influence of
organophosphorus pesticide on aquatic organisms. Results could be considered as theoretical basis for protecting local aquatic
sensitive species and establishing the criteria on safety use of pesticide.
Key words：chlorpyrifos；Scenedesmus obliquus；EC50；chlorophyll a；solute protein；MDA
第 1期
或是统一的水环境标准，不考虑我国水生生物的区域
性及我国的幅员辽阔而存在的地区性等特点，就不能
够满足中国水生生物保护的需要，也降低了我国水质
标准的科学性[4-5]。
藻类是水生生态系统的初级生产者，是评价水环
境质量的重要指标[6]。斜生栅藻（Scenedesmus obliquus）
属于绿藻纲、绿球藻目、栅藻科、栅藻属，是一种广泛
分布于温暖地区池塘、沟渠及河流中的淡水单细胞绿
藻，其生命力强、繁殖快、对环境条件变化反应敏感，
在检测污染物对水环境的影响时，通常把污染物对斜
生栅藻的影响作为测试的一项重要指标[7]。
目前国内外对斜生栅藻的毒性研究都几乎集中
在为期 96 h的急性毒性研究[8-9]，对斜生栅藻的慢性
毒性研究鲜有报道。本文通过重点流域（长江三角洲
流域）农药生产及使用状况调查、流域农药暴露水平
的模型预测和实际监测，选择一种高效低毒有机磷农
药——毒死蜱（chlorpyrifos），在对斜生栅藻急性毒性
基础上，进一步对斜生栅藻进行系统完整的慢性毒性
效应实验，旨为开展本土水生生物和有机磷农药品种
筛选研究提供理论和科学数据支持，为进一步开展毒
性评价终点的深入研究和完成重点有机磷农药品种
水生态基准的制定工作提供参考。
1 材料和方法
1.1 试验材料
斜生栅藻购自中国科学院水生生物研究所，编号
（FACHB416），经实验室驯化培养后，选取对数生长
期的藻种进行试验。
毒死蜱为乳油剂，有效成分 480 g/L，由江苏省南
京环境科学研究所提供。
1.2 试验方法
1.2.1 急性毒性试验
试验参照 OECD标准方法，以 BG11[10]为培养基，
中，置于恒温光照培养箱培养（光照强度 2 000 lx左
右，光暗时间比 12 h： 12 h，温度 25 ℃[11]，每天定时摇
动 4次。正式试验采用国际通用“瓶法”，500 mL锥形
瓶中接 200 mL处于对数生长期的藻液，起始密度均约
为 4×106 mL-1。根据预试验的结果，确定试验的浓度
范围，设置 5个农药浓度梯度和一个空白对照，每个
处理设 3个平行，然后向锥形瓶中添加农药至相应浓
度，其中毒死蜱浓度梯度为 0，6.5，7，7.5，8，8.5 mg/L。
1.2.1.1 EC50测定
每天早上 9 点定时取样，一次取样 2 份，每隔
24 h 取样一次，连续取样 5 d，分别记为 0 h，24 h，
48 h，72 h，96 h。第一份 1 mL，加水稀释定容至10 mL，
采用浮游藻类计数框计数测定藻细胞密度 [12-13]，以
TRIMMED SPEARMAN-KARBER计算 96 h EC50。
1.2.2 慢性毒性试验
根据急性毒性试验结果，以 1/2Q（96 h EC50）[14]为
试验最高浓度，设置 5个农药浓度等差梯度组和一个
空白对照组，并做空白试验，共设 3个平行组。然后向
锥形瓶中添加农药至相应浓度，其中毒死蜱浓度梯度
为 0，0.8，1.6，2.5，3.3，4.2 mg/L。
1.2.2.1 叶绿素 a含量测定
每天早上 9点定时取样，一次取样 4份，每份 5 mL，
每隔 48 h取样一次，连续取样 14 d，分别记为 0 d，2 d，
4 d，6 d，8 d，10 d，12 d，14 d。第一份，用 47 mm玻璃
纤维滤膜过滤后对折放入 10 mL离心管，保存在零下
20 ℃的冰柜中，（此样品最长冷冻 3个月），叶绿素 a
含量测定采用热乙醇萃取法[15]。
1.2.2.2 可溶蛋白含量测定
第二份，冷冻离心（12 000 mg/L）20 min，弃上清
液加 5 mL pH=7.8磷酸缓冲液，采用冰浴下超声破碎
（超声 3 s停止 3 s，每 99次换一次自制带有离心管槽
的冰杯，每次破碎 2个 99）[16-18]，破碎完再次冷冻离心
（12 000 mg/L）20 min取上清液即为粗酶液，粗酶液用
于可溶蛋白含量的测定，其可溶蛋白测定采用 G-250
染色法[19]。
1.2.2.3 MDA测定
第三份，用 10%的三氯乙酸代替 pH=7.8 磷酸缓
冲液作为酶液提取液，其余步骤同“1.2.2.2”节，粗酶液
用于丙二醛（MDA）含量的测定，其丙二醛含量测定
采用硫代巴比妥酸法[19]。
第四份，藻液鲜重的测定，采用滤膜差重法精确称量
藻液的干重，再按鲜藻含水量 90%换算藻的鲜重[20]。
2 结果与分析
2.1 毒死蜱对斜生栅藻藻急性毒性效应
2.1.1 毒死蜱对斜生栅藻生长的影响
用不同质量浓度毒死蜱分别处理栅藻培养液，以
藻细胞密度为指标做生长曲线结果见图 1。图 1所示，
斜生栅藻的生长受到不同程度的抑制，且抑制程度与
毒死蜱的浓度呈正相关，显示明显的浓度－剂量相关
性。暴露 96 h后，毒死蜱质量浓度为 6.5、8.5 mg/L的
相对抑制率分别达到 37.4%、51.7%。此外镜检发现，随
着毒死蜱浓度的增大和暴露时间的延长，藻细胞体积
增大，细胞形态改变，子细胞分裂畸形，出现人字型和
裤型。这种现象与其他作者发现 DBP对栅藻细胞形
态产生的影响有相似之处，说明毒死蜱对斜生栅藻的
生长与分裂产生了一定的解偶联作用[21]。
葛顺，等 毒死蜱对斜生栅藻急、慢性毒性效应的研究 57
第 36卷
分析计算得：96 h EC50=8.4 mg/L，95%置信区间
为 8.1~8.7 mg/L。
2.2 毒死蜱对斜生栅藻慢性毒性效应
2.2.1 毒死蜱对斜生栅藻叶绿素 a的影响
用不同质量浓度毒死蜱处理藻类培养液，经暴露
14 d，以叶绿素 a含量为指标做生长曲线结果见图 2。
可知：毒死蜱对叶绿素 a的影响在同一浓度上，其叶
绿素 a含量随着染毒时间的增加呈递增趋势，但在同
一时间段上，随着农药浓度的增大，即增大到 1/2急性
EC50时，也无明显的变化趋势，且实验值均与对照样
接近，整体表现出无明显的毒物效应，这与其他报道
五氯酚[22]和三聚氰胺[23]抑制斜生栅藻的叶绿素 a生成
是不一致的，我们认为可能是慢性试验中农药浓度较
低，且另一方面作为杀虫剂的毒死蜱对栅藻的光合作
用影响不明显共同导致。
2.2.2 毒死蜱对斜生栅藻可溶蛋白的影响
经暴露 14 d，以可溶蛋白含量为指标做生长曲线
结果见图 3。由图 3可知，在处理 2 d后，斜生栅藻的
可溶蛋白含量与对照组相比，均有显著增高，整体呈
先上升后下降的趋势，当毒死蜱浓度为 2.5 mg/L，可溶
蛋白含量为 13.4 mg/g达到最高点；处理 4 d的变化
与处理 2 d的相似，整体呈先升后降趋势，当 C（毒死
蜱）=3.3 mg/L，达到最高点；在后期长时间的暴露下，
斜生栅藻可溶蛋白含量整体呈上升的趋势，在农药最
高浓度 4.2 mg/L，均达到同一处理时间段的最高值；
整体表现出浓度诱导效应，这与卢晶等[24]发现四羟甲
基硫酸鏻促进铜绿微囊藻可溶性蛋白含量升高一致；
但以同一浓度点研究发现，可溶蛋白含量随时间的延长
呈下降趋势，整体表现出时间胁迫效应，我们认为这
是藻细胞机体在农药长时间胁迫作用下所产生的毒
性效应。
2.2.3 毒死蜱对斜生栅藻MDA的影响
经暴露 14 d，以 MDA为指标做生长曲线结果见
图 4。由图 4可知，在处理 2 d后，斜生栅藻的 MDA
含量与对照组相比，均有显著增高，整体呈先上升后
微弱下降的趋势，在中等浓度水平 C（毒死蜱）=2.5
mg/L时达到极显著水平，但从前后时间上纵向分析
MDA含量曲线，研究发现 MDA 含量随时间的延长
呈下降趋势，整体表现出时间胁迫效应，如 12 d，14 d，
MDA含量几乎与对照组齐平，甚至出现低于对照组的
实验现象，我们认为这可能是长时间的农药处理已经
对斜生栅藻产生了实质性的伤害，这一现象与上文试
验后期可溶蛋白含量下降结果是一致的。
3 讨论
本文选择栅藻起始密度约为 4×106 mL-1，培养
96 h 后藻细胞密度与初始密度相比增值比例约为
4 倍，其栅藻细胞密度能达到 1.5×107 mL-1，说明栅
藻在该初始密度较高的条件下仍能很好地繁殖生
长，牟文等 [8]也以藻细胞约为 3.9×106 mL-1 的初始
58
第 1期
密度进行重金属对斜生栅藻的毒性研究，同时藻细
胞初始密度较低会导致后期其他生化指标测定的
现象不明显。
目前，已有大量农药对斜生栅藻毒性研究的报
道，农药对藻细胞造成的损害，主要表现为对藻类的
杀灭性和对生长的抑制作用，以半数致死浓度 EC50值
表示[25]。根据《水和废水检测分析方法》[26]中规定，藻类
生长抑制实验对毒物的毒性分级标准为 96 h EC50<1
mg/L 时为极高毒，在 1~10 mg/L之间为高毒，在 10~
100 mg/L 之间为中毒，>100 mg/L 时为低毒。故本文
所选择的有机磷农药毒死蜱为高毒。
叶绿素是各种浮游藻类中广泛存在的天然色
素，其中叶绿素 a 存在于所有的浮游藻类中，大约
占有机物干重的 1%~2%，是估算浮游植物生物量的
重要指标[27]，我们选择误差较小的热乙醇法萃取法
测定叶绿素 a含量，保证了实验数据的可靠性，同时
叶绿素含量也是客观反映植物利用光照能力的一
种重要指标，往往作为判断植物光合能力强弱，反映
环境胁迫状况的依据 [9]，但从实验中发现杀虫剂毒
死蜱对斜生栅藻中叶绿素 a 的抑制并不明显，表明
叶绿素 a在该毒性试验中不能作为一个有效的毒性
效应敏感指标。
蛋白质是细胞中重要的结构物质，其功能是细胞
代谢过程中的催化剂。蛋白质含量变化可以反映细胞
内代谢活动是否正常[6]，经毒死蜱不同浓度处理后，各
组斜生栅藻细胞可溶性蛋白含量较对照组均有提高，
说明毒死蜱能够刺激藻细胞蛋白合成，干扰藻细胞蛋
白代谢平衡，但长时间胁迫作用下可溶蛋白含量开始
降低也说明了农药的长时间胁迫导致细胞膜结构破
坏和功能丧失乃至藻细胞的死亡。
MDA作为脂质过氧化反应的产物之一，可以用
来度量过氧化反应的程度[23]。因此可以认为，农药的
胁迫造成了自由基的大量产生，从而在分子水平上快
速而高效地动员了藻细胞的防御反应。试验结果表明：
MDA 含量在短时间的农药处理下均有极显著的增
高，说明农药胁迫已经引起了自由基的大量产生，对细
胞膜系统造成了广泛的损伤，引起膜脂过氧化反应，从
而造成了MDA含量的显著增高；同时长时间处理下，
藻 MDA含量的普遍降低很可能暗示长时间的胁迫
处理已经对斜生栅藻的细胞造成了实质性的损伤，
以接近藻细胞负荷的极限，以至藻细胞功能无法完全
恢复，这与前面可溶蛋白含量测定结果大体是相互一
致的。
本试验是在室内模拟条件下进行的，没有考虑
生物体组织、细胞或基因水平的改变，拟继续开展农
药对斜生栅藻组织水平和分子水平的评价终点研究，
关于农药品种的性质及对水生藻类作用机理还有待
进一步研究和探讨。
4 结论
（1）毒死蜱的 96 h EC50为 8.4 mg/L，为高毒农药。
（2）慢性试验中，毒死蜱对栅藻光合作用无明显
影响，但通过干扰藻细胞代谢活动和引起膜脂过氧化
反应，对斜生栅藻产生毒性作用。
（3）可溶蛋白和 MDA可以作为毒性评价敏感性
指标。
[参考文献]
[1] 孟伟，张远，郑丙辉. 水环境质量基准、标准与流域水污染
物总量控制策略[J]. 环境科学研究，2006，19（3）：1-6.
Meng Wei，Zhang Yuan，Zheng Bing-hui. The quality cri－
teria，standards of water environment and water pollutant
control strategy on watershed[J]. Research of Environmen－
tal Science，2006，19（3）：1-6.（in Chinese）
[2] 孟伟，吴丰昌. 水质基准的理论与方法学导论[M]. 北京：科
学出版社，2010.
Meng Wei，Wu Feng-chang. Baseline Water Quality Intro－
duction to Translation Theory and Methods[M]. Beijing：
Science Press，2010.（in Chinese）
[3] 夏青，陈艳卿，刘宪兵. 水质基准与水质标准[M]. 北京：中
国标准出版社，2004.
Xia Qing，Chen Yan-qing，Liu Xian-bing. Water Quality
Criteria and Water Quality Standard [M]. Beijing：Chinese
Standard Press，2004.（in Chinese）
[4] 张瑞卿，吴丰昌，李会仙，等. 中外水质基准发展趋势和存
在的问题[J]. 生态学杂志，2010，29（10）：2049-2056.
Zhang Rui-qing，Wu Feng-chang，Li Hui-xian，et al. Water
quality criteria at home and abroad：development trend and
existed problems[J]. Chinese Journal of Ecology，2010，29
（10）：2049-2056.（in Chinese）
[5] 吴丰昌，孟伟，宋永会，等. 中国湖泊水环境基准的研究进
展[J]. 环境科学学报，2008，28（12）：2385-2393.
Wu Feng-chang，Meng Wei，Song Yong-hui，et al. Re－
search progress in lake water quality criteria in China [J].
Acta Scientiae Circumstantiae，2008，28（12）：2385-2393.（in
Chinese）
[6] 秦洪伟，陈柳芳，鲁楠，等. 氧氟沙星对斜生栅藻的毒性效
应[J]. 环境化学，2011，30（4）：885-886.
Qin Hong-wei，Chen Liu-fang，Lu Nan，et al. The toxici－
ty effect of ofloxacin on Scendesmus obliquus[J]. Environ－
mental Chemistry，2011，30（4）：885-886.（in Chinese）
[7] Lewis M A. Use of freshwater plants for phytotoxicity test－
ing：a review[J]. Environmental Pollution，1995，87（3）：319-
336.
[8] 牟文，熊丽，胡芹芹，等. HgCl2对斜生栅藻生理生化特性的
葛顺，等 毒死蜱对斜生栅藻急、慢性毒性效应的研究 59
第 36卷
影响[J].生态毒理学报，2009，4（6）：854-859.（in Chinese）
Mu Wen，Xiong Li，Hu Qin-qin，et al. Effect of HgCl2 on
physiological and biochemical charateristics of Scenedesmus
obliquus[J]. Asian Journal of Ecotoxicology，2009，4（6）：854-
859.（in Chinese）
[9] 刘碧云，周培疆，李佳洁，等. 丙体六六六对斜生栅藻生长
及光合色素和膜脂过氧化影响的研究[J]. 农业环境科学学
报，2006，25（1）：204-207.
Liu Bi-yun，Zhou Pei-jiang，Li Jia-jie，et al. Effects of
γ-HCH on the growth and photosystem and lipid peroxida－
tion of Scenedesmus obliqnus Kütz[J]. Journal of Agro-en－
vironment Science，2006，25（1）：204- 207.（in Chinese）
[10] 杨州，孔繁翔，史小丽，等. 萼花臂尾轮虫培养滤液对铜绿
微囊藻、斜生栅藻和小球藻群体形成及生长的影响[J]. 应
用生态学 报，2005，16（6）：1138-1141.
Yang Zhou，Kong Fan-xiang，Shi Xiao-li，et al. Effects of
Brachionus calyciflorus culture media filtrate on Microcystis
aeruginosa，Scenedesmus obliquus and Chlorella vulgaris
colony formation and growth[J]. Chinese Journal of Applied
Ecology，2005，16（6）：1138-1141.（in Chinese）
[11] 张莹，李宝珍，屈建航，等. 斜生栅藻对低浓度无机磷去除
和生长情况的研究[J].环境科学，2010，31（11）：2661-2665.
Zhang Ying，Li Bao-zhen，Qu Jian-hang，et al. Effect of
low phosphorus concentration on the growth of Scendesmus
obliquus and phosphorus removal[J]. Environmental Science，
2010，31（11）：2661-2665.（in Chinese）
[12] 刘娅琴，邹国燕，宋祥甫，等. 富营养水体浮游植物群落对
新型生态浮床的响应[J].环境科学研究，2011，24（11）：1233-
1241.
Liu Ya -qin，Zou Guo -yan，Song Xiang -fu，et al. Re－
sponse of phytoplankton community to a new ecological
floating bed system（EFBS）in enclosures with eutrophicated
water[J]. Research of Environmental Science，2011，24（11）：
1233-1241.（in Chinese）
[13]苏玉萍，林慧，钟厚璋，等.富营养化山仔水库沉积物微囊藻
复苏的受控因子[J].生态学报，2011，31（20）：6167-6173.
Su Yu-ping，Lin Hui，Zhong Hou-zhang，et al. Factors
regulating recruitment of Microcystis from the sediments of
the eutrophic Shanzai Reservoir[J]. Acta Ecologica Sinica，
2011，31（20）：6167-6173.（in Chinese）
[14] 周启星，孔繁翔，朱琳. 生态毒理学[M]. 北京：科学出版社，
2005.
Zhou Qi -xing，Kong Fan -xiang，Zhu Lin. Ecological
Toxicology[M]. Beijing：Science Press，2005.（in Chinese）
[15] 陈宇炜，陈开宁，胡难辉. 浮游植物叶绿素 a测定的“热乙
醇法”及其测定误差的探讨[J]. 湖泊科学，2006，18（5）：550-
552.
Chen Yu-wei，Chen Kai-ning，Hu Nan-hui. Discussion on
possible error for phytoplankton chlorophyll-a concentration
analysis using hot-ethanol extraction method[J]. Journal of
Lake Science, 2006，18（5）：550-552.（in Chinese）
[16] 陈伟平,陈必链,张艳燕. 三种微藻细胞破碎方法的比较[J].
生物技术，2008，18（1）：55-58.
Chen Wei-ping，Chen Bi-lian，Zhang Yan-yan. Evalua－
tion of different cell disruption processes on microalgae[J].
Biotechnology，2008，18（1）：55-58.（in Chinese）
[17] 孙利芹，王长海，江涛. 紫球藻细胞破碎方法研究[J].海洋
通报，2004，23（4）：71-74.
Sun Li-qin，Wang Chang-hai，Jiang Tao. Research on the
methods of Porphyridium cru entum cells fragmentation [J].
Marine Science Bulletin，2004，23（4）：71-74.（in Chinese）
[18] 王雪青，苗惠，翟燕. 微藻细胞破碎方法的研究[J]. 天津科
技大学学报，2007，22（1）：21-25.
Wang Xue-qing，Miao Hui，Zhai Yan. Study on the meth－
ods of alga cells fragmentation[J]. Journal of Tianjin Univer－
sity of Science & Technology，2007，22（1）：21-25.（in Chi－
nese）
[19] 李合生. 植物生理生化实验原理合技术[M]. 北京：高等教
育出版社，2001.
Li He-sheng. Principles and Techniques of Plant Physio－
logical Biochemical Experiment[M]. Beijing：Higher Educa－
tion Press，2001.（in Chinese）
[20] 张宝玉，李夜光，李中奎，等. 温度、光照强度和 pH对雨生
红球藻光合作用和生长速率的影响[J]. 海洋与湖沼，2003，
34（5）：558-565.
Zhang Bao-yu，Li Ye-guang，Li Zhong-kui，et al. Effects
of temperature，light intensity and PH on photosynthesis
and growth rate of Haematococcus pluvialis[J]. Oceanologia
Et Limnologia Sinica，2003，34（5）：558-565.（in Chinese）
[21] 胡芹芹，熊丽，田裴秀子，等.邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对斜
生栅藻的致毒效应研究[J].生态毒理学报，2008，3（1）：87-92.
Hu Qin-qin，Xiong Li，Tian Pei-xiu-zi，et al. Toxic ef－
fects of dibutyl phthalate（DBP）on Scenedesmus obliquus[J].
Asian Journal of Ecotoxicology，2008，3（1）：87-92.（in
Chinese）
[22] 洪华嫦，周海云，蓝崇钰. 五氯酚对斜生栅藻的毒性效应研
究[J]. 环境科学研究，2003，16（6）：23-28.
Hong Hua-chang，Zhou Hai-yun，Lan Chong-yu. Toxicity
effects of pentachlorophenol on the growth，the contents of
pigments and soluble protein of Scenedesmus obliquus [J].
Research of Environmental Science，2003，16（6）：23-28.
（in Chinese）
[23] 何桢，胡晓静，牟文，等. 三聚氰胺对斜生栅藻的毒性研究
[J]. 农业环境科学学报，2010，29（8）：1455-1459.
He Zhen，Hu Xiao-jing，Mu Wen，et al. Melamine Toxic－
ity of Scenedesmus obliquus Kütz[J]. Journal of Agro-en－
vironment Science，2010，29（8）：1455-1459.（in Chinese）
[24] 卢晶，钟国华.四羟甲基硫酸鏻去除铜绿微囊藻效果及其机
制研究[J]. 环境污染与防治，2010，32（6）：60-64.
（下转第 92页）
60
第 36卷
（2）取 4种不同的木素，测其 1 mg/L香草醛溶液
（pH>7）所得比值-导数光谱值，如表 2。根据 248 nm
处所建的模型（图 5），所得测量值与标准值相差不
大，说明上述结论具有普遍适用性，符合任何种类的
木素。
4 小结
根据紫外吸收光谱，可知香草醛在 pH≤7时，香
草醛在 230 nm处有吸收，且吸光度随 pH 的增大而
减小；当 pH>7时，香草醛在248 nm处有吸收，且吸光
度随 pH的增大而增大。
根据导数光谱及比值-导数光谱的基本原理，绘
制出不同 pH值和不同浓度条件下香草醛的比值－导
数光谱。说明在 230 nm处的光谱信号在 pH≤7不受 pH
值影响，248 nm处的光谱信号不受任何 pH值影响。
在 230 nm和 248 nm处的光谱信号对浓度的变化较为
敏感，在此两处吸收值可用于香草醛浓度的测定。
[参考文献]
[1] 韦寿莲，赵建芬.紫外分光光度法测定食品中香兰素的含量
[J]. 肇庆学院学报，2008，29（5）：32-33.
Wei Shou-lian，Zhao Jian-fen. Determination of vanillin in
food by ultraviolet spectrophotometry[J]. Journal of Zhaoqing
College，2008，29（5）：32-33.（in Chinese）
[2] 杨晓慧，周永红，胡丽红，等. 木质素制备香草醛的研究进
展[J]. 纤维素科学与技术，2010，18（4）：50-54.
Yang Xiao-hui，Zhou Yong-hong，Hu Li-hong，et al. Re－
search advances in preparation of vanillin from lignin [J].
Journal of Cellulose Science and Technology，2010，18（4）：
50- 54.（in Chinese）
[3] 倪永年，蔡英俊.比值导数波谱法同时测定调味品中的微量
金属元素[J].广西师范大学学报:自然科学版，2003，21（1）：
262-263.
Ni Yong-nian，Cai Ying-jun. Simultaneous determination
of zinc，copper and manganese in Chinese condiment by
the ratio spectrum-derivative spectrophotometry[J]. Journal
of Nanchang University:Natural Science Edition，2003，21
（1）：262-263.（in Chinese）
[4] Palabiyik I M，Dinc
觶
v E，Onur F. Simultaneous spectropho－
tometric determination of pseudoephedrine hydrochloride
and ibuprofen in a pharmaceutical preparation using ratio
spectra derivative spectrophotometry and multivariate cali －
bration techniques[J]. J Pharma Biomed Anal，2004, 34:473-
483.
[5] Erk N，Gonullu U G. Resolution of two-component mix－
tures in pharmaceutical formulations containing phenazopy－
ridine hydrochloride by ratio spectra derivative spectropho－
tometry[J]. Anal Lett，2002, 35: 83-98.
[6] Erk N. Comparative study of the ratio spectra derivative
spectrophotometry，derivative spectrophotometry and Vier-
ordt’s applied to the analysis of lisinopril and hydrochlorthi－
azide in tablets[J]. Spectrosc Lett，1998, 31: 633-645.
（上接第 60页）
Lu Jing，Zhong Guo-hua. Mechanism of Microcystis aerugi－
nosa removal by THPS[J]. Environmental Pollution & Con－
trol，2010，32（6）：60-64.（in Chinese）
[25] 生秀梅，熊丽，李小明，等. 两种新型农药对斜生栅藻的毒
性研究[J]. 武汉植物学研究，2004，22（2）：153-157.
Sheng Xiu-mei，Xiong Li，Li Xiao-ming，et al. Studies on
the toxicity of two new types of pesticides on Scenedesmus
obliquus Kütz [J]. Journal of Wuhan Botanical Research，
2004，22（2）：153-157.（in Chinese）
[26] 国家环境保护总局. 水和废水监测分析方法[M]. 第四版.
北京：中国环境科学出版社, 2002.
State Environmental Protection Administration of China.
Monitoring and Analytic Methods of Water and Wastewater
[M]. 4th ed. Beijing：Environmental Science Press of China，
2002.（in Chinese）
[27] 戴荣继，佟斌，黄春. HPLC测定饮用水中藻类叶绿素含量
[J]. 北京理工大学学报，2006，26（1）：87-89.
Dai Rong-ji，Tong Bing，Huang Chun. Determination of
Chlorophylls in drinking water by HPLC[J]. Transactions of
Beijing Institute of Technology，2006，26（1）：87-89.（in
Chinese）
表 2 加入不同种木素所得香草醛的测量值与标准值
Table 2 The accuracy and measured value of vanillin after putting in
different species lignin
测量值/mg·L-1 标准值/mg·L-1 标准偏差
230 nm 0.871 0.987 0.755 0.737 1.000 0.220
248 nm 1.022 1.031 1.039 0.980 1.000 0.033
33333333333333333333333333333333333333333333333
92