全 文 ：　　收稿日期:2007-05-30
基金项目:安徽省教育厅高校青年教师资助计划(2007 JP1182)
作者简介:吴进东(1974-),男 ,植物学硕士 ,讲师。
文章编号:1007-9726(2007)04-0047-03(中图分类号:S816.34)
添加乳酸菌对毛苕子青贮饲料品质的影响
吴进东 ,佘得勇 ,刘　培
(皖西学院化生系 ,安徽六安 237012)
摘要:为了探讨添加乳酸菌对毛苕子青贮饲料品质的影响 , 在收获后经过 4 小时晾晒的毛苕子青贮料中 , 加入不同剂量乳
酸菌进行青贮 ,密封发酵 30 天后 ,对开封后的青贮饲料进行感官和实验室评定。结果表明:随着乳酸菌添加量的不断增
加 ,从感官上看 , 水平 1(添加量为 0)和水平 2(添加量为 0.5×105 个/ g)青贮料的品质低劣;水平 3(添加量为 1×105 个/ g)
青贮料的品质中等 ,水平 4(添加量为2×105 个/g)青贮料的品质优良。实验室评定 ,水平 4 的 pH 值达到 4.2 以下;4 个水
平间粗蛋白含量差异极为显著 , 水平 4 的含量最高;粗纤维含量差异同样极显著 , 水平 3 与水平 4 的含量显著低于其它水
平组。
关键词:乳酸菌;毛苕子;青贮饲料品质
　　毛苕子(Vicia vi llosa Roth), 别名冬苕子 、毛野豌豆 、冬巢
菜等 ,我国以江苏 、安徽 、河南 、四川 、陕西 、甘肃等省栽培较多 ,
东北 、华北也有栽培[ 1] 。毛苕子生长快 、茎叶柔嫩 、产量高 、营养
价值丰富 ,是一种优良的豆科牧草 , 可供青贮或调制干草。但由
于豆科牧草含糖量较低 , 青贮难以成功 , 必须添加某些添加剂 ,
青贮才易成功[ 2-3] 。试验选择乳酸菌作为添加剂进行毛苕子青
贮调制 ,并对乳酸菌的最适添加量做了初步探讨 , 以期更好地利
用毛苕子。
1　材料与方法
1.1　材料与试剂　青贮原料:毛苕子 , 2006 年 5 月 3 日在皖西
学院种植园内刈割 ,此时毛苕子正处于初花期 , 为青贮的最佳时
期 ,刈后晾晒 4 小时 , 取适量毛苕子切碎 , 抓一把在手里握紧 1
分钟 ,然后松开 , 草球有弹性且慢慢松开 ,判定其含水率大约在
65%[ 4] 。
青贮饲料添加剂 :扩培后的乳酸菌。
其它试剂:改良 M C 培养基 ,凡士林等。
1.2　仪器　超净工作台(苏净集团安泰公司制造), 手提式压力
蒸汽灭菌器(上海华线医用核子仪有限公司制造), 恒温振荡器
(常州市国华电器有限公司制造), KDN-8 智能化加热消化炉
(上海新嘉电子有限公司), 电热鼓风干燥箱(南京实验仪器
厂), 培养箱 , PHS-2C 精密酸度计 , 凯氏定氮仪 , 显微镜 , 小三
角烧瓶 ,培养皿 , 冰箱 , 5L 塑料桶 ,铡刀等。
1.3　实验设计　试验采用单因素 4 水平 5 重复的实验方案 ,设
空白对照组为水平 1 , 3 个处理组分别为水平 2 、3、4 , 其乳酸菌
与青贮原料比分别为:0 、0.5×105 、1×105 和 2×105 个/ g , 每组
5 次重复。密封青贮 30 天后 ,对结果采用 EXCEL 软件进行单
因素方差分析。
1.4　实验方法
1.4.1　乳酸菌的扩培方法[ 5-6] 　扩培工艺:小三角烧瓶菌种※
三角烧瓶菌种活化※培养皿菌种培养※小三角瓶菌种培养※乳
酸菌悬浮液。
菌种活化:将保存在冰箱中的原始乳酸菌种采用无菌操作
转接到事先准备好的装有改良 MC 培养基的培养皿中 ,在 45℃
下培养 24 小时。
改良 MC 培养基组成:大豆蛋白胨 5 g , 牛肉浸膏 5 g , 酵母
浸膏 5 g ,葡萄糖 20 g , 乳糖 20 g ,碳酸钙 10 g , 琼脂 15 g ,蒸馏水
1 000 ml , 1%中性红溶液 5 ml。
将前面 7 种成分加入蒸馏水中 , 加热溶解 , 校正 pH 值为
6.0 ,加入中性红溶液。分装烧瓶 , 121℃高压灭菌 15 ～ 20 分钟 ,
临用时加热熔化。
培养皿菌种培养:将活化后的菌种采用无菌操作接入装有
改良 MC 培养基的培养皿中 ,在 45℃下培养 24 小时。
小三角瓶菌种培养:将培养皿菌种采用无菌操作接入装有
60 m l改良 M C 培养液的小三角烧瓶中。
改良 MC 培养液的组成:在改良 MC 培养基组成基础上去
除其琼脂成分。
1.4.2　毛苕子的青贮方法　将 20 个容量为 5L 的塑料桶用 0.
1%的高锰酸钾溶液浸泡消毒 , 洗净 , 晾干备用。将收割后的毛
苕子晾晒 4 小时左右 , 切碎后用手握法判定其含水量约为
65%。把毛苕子切成约 2～ 3 cm 长 , 及时分层装填同时分层加
入乳酸菌 , 特别注意装填要紧实 , 可用器物压实 , 称其重量。用
显微镜直接计数法测出两个小三角烧瓶培养液中乳酸菌的浓度
分别为 1×107 个/ ml和 1×108 个/ ml , 计算出每个水平每桶
添加量[ 7-8](见表 1)。
表 1　各水平乳酸菌添加量
水平 每桶添加乳酸菌悬浮液(m l)
培养液中乳酸菌浓度
(个/ml)
1 0
2 10 1×107
3 20 1×107
4 4 1×108
　　装满后压实加盖 , 并用凡士林封口 , 再用塑料袋外封 , 然后
将青贮桶置于室内 15 ～ 25℃条件下青贮 30 天。
1.5　测定项目和方法
47第 27卷第 4期　　　　　　　　　　　　　　　　草原与饲料
对青贮原料毛苕子添加不同剂量的乳酸菌 , 密封 30 天后检
测青贮饲料的感官品质 、pH 值 、粗蛋白和粗纤维含量。
1.5.1　感官评定　30 天后开启桶盖 , 每桶由上到下分 3 层 , 每
层取样 1 次 ,混匀分析评定 , 评定标准参照我国 1996 年农业部
下发的《青贮饲料质量评定标准》[ 9] 。
1.5.2　实验室评定　pH 值的测定[ 10] :取青贮料样品 20g , 加
入 180 m l蒸馏水 , 搅拌均匀 , 静置 24 小时 , 用酸度计测定青贮
料浸出液的 pH 值。
粗蛋白质含量的测定方法[11] :用凯氏定氮法测定。
计算公式:粗蛋白质(%)=C(V1 -V2)×14×6.25×100/
(W×1000×20)
式中:C—盐酸的浓度(mo l/ L);
V1 —滴定样品用去的盐酸溶液 ml数;
V2 —滴定空白用去的盐酸溶液 ml数;
14—氮的原子量;
6.25—氮换算成蛋白质的平均系数;
100—消化液总量(ml);
20—测定时消化液用量(ml);
W—试样质量(g)。
粗纤维含量的测定方法[ 12] :取样进行酸碱消煮 , 然后进行
灼烧称重。
计算公式:粗纤维(%)=[(W1 -W 2)/W] ×100
式中:W1 —130℃烘干后坩埚及试样残渣重 , g;
W2 —550℃灼烧后坩埚及试样残渣重 , g;
W—试样(未脱脂时)重量 , g 。
2　结果与分析
2.1　青贮料的感官评定结果与分析　评定结果如表 2所示 ,从
感官上来看 , 水平 1 、2 均出现腐烂 ,表面及内部霉变 ,发出腐臭
味及霉味。水平 1 内未添加乳酸菌 , 腐烂变质及发霉现象均较
水平 2 严重 ,腐臭味 、霉味较浓 ,颜色呈现腐烂的黑褐色;水平 2
呈黄褐色 ,颜色较水平 1 有明显好转 , 虽然水平 1 、2 的等级均为
低劣 ,但水平 2 已显示出添加乳酸菌对青贮的效果。水平 3 、4
呈现黄色 ,且水平 4 呈现黄绿色 , 已接近最佳青贮效果。从水平
3 、4 开始已无腐烂变质 、霉变的现象 , 水平 3 有轻微酸香味 , 而
水平 4已发出芳香味及酒酸味 ,且质地相对水平 3 松散 , 相对水
平 1、2更加优良 , 水平 4 的效果最好。综合感官评定结果 , 随着
乳酸菌添加量的不断增加 ,青贮效果越来越好 。
表 2　各水平青贮料感官评定结果
水平 颜色 气味 质地 等级
1
桶壁附近呈黑褐
色 ,其余呈褐绿色
具有特殊刺鼻腐
臭味 ,霉味
腐烂 , 发霉 , 黏结
成块 ,黏滑柔软湿
润
低劣
2 黄褐或暗褐色 有刺鼻难闻酸味 ,轻微腐臭味 ,霉味
轻微腐烂发霉 ,黏
结成块 ,柔软湿润 低劣
3 黄色 有轻微酸味 , 淡淡芳香味
叶脉清晰 , 枝叶轮
廓整齐 ,柔软湿润 中等
4 黄绿色 芳香味 ,酒酸味 叶脉清晰 , 枝叶轮廓整齐 ,柔软松散 优良
2.2　各水平青贮饲料 pH 值测定结果与分析　运用单因素方
差分析对 4 个水平间 pH 值进行分析 , 得 F =36.325 6 >
F0.01(3 , 16), 因此 , 4个水平间 pH 值差异极显著。继续对 4 个水
平进行 LS D 检验 , 进行多重比较。计算得 4 个水平间最小显著
差数 LS D0.05(16)=0.156 473 , LSD0.01(16)=0.246 271 , 分别与 4
个水平平均数之差比较 , 得显著性检验结果(见表 3)。
分别以α=0.05 , α=0.01 作检验 , 由表 3 可以看出 , 除了
水平 1 和 2 之间差异不显著外 , 其它各水平之间差异均极显
著 。水平 1 、2 的 pH 值在 5 ～ 6 的范围内 ,为劣质青贮料 , 说明
虽然在水平 2 中添加了乳酸菌 ,但由于添加量较少 , 对毛苕子
青贮料中 pH 值作用效果不显著 。水平 3 的 pH 值极显著低
于水平 2 ,但仍然超过 4 , 说明青贮发酵过程的腐败细菌 、酪酸
菌等活动依然较为强烈 , 说明水平 3 中乳酸菌的添加量并不
是最佳的 , 乳酸菌的添加量仍有增加的必要。水平 4 乳酸菌的
添加量为 2×105 个/g 时 , pH 值已达 4.2 以下 , 青贮效果最
好 。
表 3　各水平青贮料实验室评定结果及其多重比较
水平 pH 值 粗蛋白含量 粗纤维含量
1 5.64±0.32A 15.5±1.2CD 26.5±2.2A
2 5.52±0.31AB 16.1±1.4C 26.0±1.8AB
3 4.42±0.21C 20.6±1.5B 22.5±1.5C
4 3.98±0.18D 21.8±1.5A 22.3±1.4CD
　　注:同列数字右肩注不同大写字母表示差异极显著 , 相同表示差异
不显著。
2.3　各水平粗蛋白含量测定结果与分析　运用单因素方差分
析对 4 个水平间粗蛋白含量进行分析 , 得 F =86.637 84 >
F0.01(3 , 16),因此 , 4个水平间粗蛋白含量差异均极显著。继续对
4 个水平进行 LS D 检验 ,进行多重比较。计算得 4 个水平间最
小显著差数 LSD0.05(16)=0.847 467 , LS D0.01(16)=1.166 679 , 分
别与 4 个水平平均数之差比较 ,得显著性检验结果(见表 3)。
分别以α=0.05 , α=0.01 作检验 , 由表 3 可以看出 ,除了水
平 1 和 2 之间差异不显著外 , 其它各水平之间差异均为极显著。
说明在水平 2 中的乳酸菌添加量较少 , 对毛苕子青贮料中粗蛋
白保存不能表现出明显的效果。从水平 3 开始才表现出添加乳
酸菌有利于提高青贮料中粗蛋白的含量 , 且水平 2 和 3 之间的
差异极显著 , 说明水平 3 中乳酸菌的添加量已表现出明显的效
果 , 但水平 3 和 4 之间的差异仍极为显著 ,说明水平 3中乳酸菌
的添加量并不是最佳的 ,每克青贮料中乳酸菌的添加量仍有增
加的必要 , 水平 4 中粗蛋白含量最高 ,青贮效果最好。
2.4　各水平粗纤维含量测定结果与分析　运用单因素方差分
析对 4 个水平间粗纤维含量进行分析 , 得 F =161.295 7 >
F0.01(3 , 16), 4个水平间粗纤维含量差异极显著。继续对 4 个水
平进行 LSD 检验 ,进行多重分析 ,经计算得 4 个水平间最小显
著差数 LSD0.05(16)=0.571 577 , LSD0.01(16)=0.786 871 , 分别与
4 个水平平均数之差相比较 , 得显著性检验结果(见表 3)。
48 中国草食动物　　　　　　　　　　　　　　　　　　2007年
分别以α=0.05 , α=0.01 作检验 , 由表 3 可以看出 , 除了水
平 1和 2 , 3和 4 之间差异不显著之外 , 其它各水平之间差异均为
极显著 ,说明在水平 2中的乳酸菌添加量较少, 对毛苕子青贮料
中粗纤维的减少不能表现出明显的效果。从水平 3 开始才表现
出添加乳酸菌有利于降低青贮料中粗纤维的含量 ,且水平 2 和 3
之间的差异极显著 ,说明水平 3中乳酸菌的添加量已表现出极显
著的效果;但水平 3和 4 之间的差异不显著 , 说明水平 3和水平 4
在降低毛苕子青贮料中粗纤维含量方面的效果差异不显著。
3　讨论
3.1　虽然从粗纤维的测定结果分析看 , 水平 4 与水平 3 的差异
不显著 ,但从感官鉴定及实验室测定 pH 值 、粗蛋白含量的结果
分析来看 ,水平 4 与水平 3 的差异均极显著 , 综合来分析 , 可初
步确定水平 4(2×105 个/ g)的乳酸菌添加量在 4 个水平中是最
适的。
3.2　试验时间为 30 天 ,如果延长青贮时间 , 青贮料中各检测指
标能否发生变化;且此实验中只设计了 4个水平 , 无法准确建立
饲料中各指标的含量和添加乳酸菌剂量之间的线形关系。如要
得到更精确的最适乳酸菌添加量 , 则需延长试验时间和增加试
验水平。
3.3　添加乳酸菌对饲料的适口性 、消化率以及提高家畜日增重
等方面的影响 ,需做进一步研究。
参考文献
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　　收稿日期:2006-08-14
作者简介:郭连云(1969-),男 ,本科 ,工程师。
文章编号:1007-9726(2007)04-0049-02(中图分类号:S54)
高寒地区四种草坪种子萌发特性和混播技术研究
郭连云 ,唐启萍
(青海省海南州气象局 ,共和 813000)
摘要:对 4 种草坪种子进行萌发特性及萌发和镇压在草坪建植中的效果研究。 结果表明:4 种草坪草的生活力依次为意
大利黑麦草>紫羊茅>高狐茅>亨特草地早熟禾;预萌发与直播在出苗率 、生物量和枝条数上都表现出显著差异(P <
0.05),镇压与不镇压差异不显著(P>0.05)。采用预萌芽技术建植草坪有利于提高建坪速度和建坪质量。
关键词:草坪草;萌发特性;预萌发;镇压
　　在草坪建植中 , 种子萌发特性直接影响建坪速度和质量。
通常可用发芽率和发芽势来评价种子生活力的好坏 , 但是禾草
发芽持续时间长 ,目前尚无一个统一的发芽势标准。在露地栽
培条件下易受外界环境条件的变化影响 ,使同样的发芽率 ,由于
发芽特性的不同造成出苗率的差异。在不同的建坪技术和条件
下 ,这种差异就会加大。 70 年代以来 , 国内外学者和种子公司
围绕种子发芽特性进行了种子活力的研究 , 但研究材料多是农
作物 ,本研究在利用农作物种子活力研究的基础上 , 探讨草坪草
种子的发芽特性以及混播条件下镇压和预萌发对建坪速度和质
量的影响。
1　材料与方法
1.1　试验地概况　试验地设在青海省海南州草原站院内试验
田 , 北纬 36°16′,东经 100°37′,海拔 2 835.0 m ,全年日照数2 985
小时 , 平均气温 4.1℃, 极端最高温 33.7℃, 极端最低温 -
27.7℃, 年降水量 314.3 mm , 干燥度 2.50 , 相对湿度 50%, 无霜
期平均 90.6 天。
1.2　草种的选择　供试材料为意大利黑麦草(lolium multlo-
rumlam)、紫羊茅(festuca rubra l)、高狐茅(f estuca gigantea)、
亨特早熟禾(poa pratensis l.cv.huntsvl le)等 4 种 , 其中亨特早
熟禾从美国进口 , 其它 3 种购于省牧科院。
1.3　试验设计　在实验室内进行 4 种草坪草种子的纯净度 、发
芽率和发芽指数的测定。试验 Ⅰ , 在播种时采取预萌发和未预
49第 27卷第 4期　　　　　　　　　　　　　　　　草原与饲料