全 文 ：收稿日期:2013-11-29
作者简介:刘玉明(1968-)，男，博士，副教授，主要从事天然药物化学的教研工作及现代中药研究;E-mail:coumarin@ tom. com。
HPLC-ELSD同时测定新疆贝母中贝母辛和贝母素乙的含量
刘玉明1，路 熹1，蒋玉虎1，刘庆华2，高继光3
(1. 天津理工大学化学化工学院，天津 300384;2. 新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004;
3. 新疆伊犁天药生物科技有限公司，新疆 伊宁 835000)
摘要 目的:建立同时测定新疆贝母中贝母辛和贝母素乙含量的方法。方法:采用 HPLC-ELSD 法，色谱柱为
Comatex C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 02%三乙胺水溶液，梯度洗脱，流速为 1. 0 mL /min;ELSD
参数:漂移管温度 90 ℃，雾化室温度 35 ℃，载气压力 46. 2 psi。结果:贝母辛和贝母素乙线性范围分别为 2. 380 ～
23. 800 μg(r1 = 0. 9996)和 1. 440 ～ 14. 400 μg(r2 = 0. 9997)，平均回收率分别为 99. 91%和 100. 15%。结论:该方
法稳定、可靠、简便，适用于新疆贝母的质量控制。
关键词 新疆贝母;贝母辛;贝母素乙;高效液相色谱
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)04-0826-03
百合科贝母属植物新疆贝母 Fritillaria walujewii
Ｒegel产于我国新疆天山地区。生于海拔 1 300 ～
2 000 m的林下、草地或沙滩石缝中〔1〕，其鳞茎具有
清热润肺、化痰止咳的功效，用于肺热燥咳、干咳少
痰、阴虚劳嗽、咳痰带血〔2〕，为维药伊贝母的来源之
一。其主要有效成分为异甾体生物碱类化合物〔3〕。
本文拟建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-
ELSD)同时测定该药中贝母辛和贝母素乙含量的方
法，以期为完善该药材质量标准提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 CoMetro 6000 型高效液相色谱仪(包
括 SofTA Model 300S 型蒸发光散射检测器);ZF-2
型紫外分析仪(上海青浦沪西仪器厂);KQ-5200DE
超声波清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司);
AＲ124CN型电子分析天平(奥豪斯仪器(上海)有
限公司)。
1. 2 材料 新疆贝母药材来自新疆伊犁地区，经
笔者高继光副主任药师和刘庆华研究员鉴定为百合
科植物新疆贝母 Fritillaria walujewii Ｒegel 的干燥鳞
茎;贝母素乙对照品(批号:110751-200608)购自中
国食品药品检定研究院，贝母辛对照品(批号:
11121001)购自上海纯优生物科技有限公司;乙腈
(天津市光复精细化工研究所)为色谱纯，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Comatex C18色谱柱(250 mm × 4. 6
mm，5 μm);流动相为乙腈(A)-0. 02% 三乙胺水
(B)，梯度洗脱(0 ～ 16 min，38% A;16 ～ 18 min，
38% ～ 73% A;18 ～ 40 min，73% A;40 ～ 42 min，
73% ～ 100% A;42 ～ 50 min，100% A);流速 1. 0
mL /min;柱温 35 ℃;进样量 10 μL;ELSD参数:漂移
管温度 90 ℃，雾化室温度 35 ℃，载气压力 46. 2 psi。
对照品及样品色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)和新疆贝母样品(B)的 HPLC谱图
1. 贝母辛 2. 贝母素乙
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取贝母辛和贝母
素乙对照品适量，加甲醇配制成每 1 mL 含贝母辛
1. 19 mg和贝母素乙 0. 72 mg的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 将新疆贝母适量研细，
精密称取 3 g，加入 10 mL浓氨水浸润 1. 5 h，精密加
入二氯甲烷-甲醇(4 ∶ 1)溶液 60 mL，水浴回流 2. 5
h，滤过，用上述混合溶液少量多次洗涤。用蒸发皿
置于 55 ℃水浴上蒸干，加少量甲醇溶解残渣，定容
至 2 mL，摇匀，0. 45 μm微孔滤膜滤过，备用。
2. 4 线性关系考察 精密吸取上述贝母辛和贝母
素乙混合对照品溶液 2、4、8、12、16、20 μL进行色谱
测定，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积值的常
用对数值(Y)为纵坐标，以进样量(μg)的常用对数
值(X)为横坐标，进行线性回归，得标准曲线:贝母
辛 Y1 = 4. 92980 + 1. 58357X1，r1 = 0. 9996;贝母素
乙 Y2 = 4. 78211 + 1. 13266X2，r2 = 0. 9997。表明贝
·628· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 5 期 2014 年 5 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2014.05.006
母辛在 2. 380 ～ 23. 800 μg，贝母素乙在 1. 440 ～
14. 400 μg进样量范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件连续进样 6 次，贝母辛和贝母
素乙峰面积值的 ＲSD 分别为 0. 68%和 0. 94%，表
明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液，照上述
色谱条件分别于 0、2、4、6、8 h 进样分析，测得样品
中贝母辛和贝母素乙峰面积值的 ＲSD 分别为
1. 25%和 1. 42%，表明供试品溶液在 8 h 内稳定性
良好。
2. 7 重复性试验 按“2. 3”项下方法制备供试品
溶液，平行制备 6 份样品，在上述色谱条件下进样，
测定贝母辛和贝母素乙的峰面积值，结果其 ＲSD 分
别为 0. 59%和 0. 76%，表明本试验方法重复性良
好。
2. 8 加样回收率试验 分别取已知含量的样品 6
份，每份约 1. 5 g，精密称定，分别准确加入一定量的
贝母辛和贝母素乙，按“2. 2”项下方法制备供试品
溶液，照上述色谱条件测定，分别测定贝母辛和贝母
素乙的平均回收率和 ＲSD，见表 1，结果表明本法回
收率良好。
2. 9 样品测定 取不同产地的新疆贝母药材 3. 0
g，按“2. 3”项下方法平行制备 3 份供试品溶液，进
样测定，每次进样 10 μL，按外标法分别计算样品中
贝母辛和贝母素乙的含量，结果见表 2。
表 1 加样回收率试验结果(n =6)
对照品 称样量 /g 原有量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
贝母辛 1. 5072 0. 8222 0. 8720 1. 6915 99. 69 99. 91 0. 55
1. 4970 0. 8166 0. 8720 1. 6860 99. 70
1. 5157 0. 8268 0. 8720 1. 7002 100. 16
1. 4894 0. 8125 0. 8720 1. 6779 99. 24
1. 5013 0. 8190 0. 8720 1. 6986 100. 87
1. 5088 0. 8231 0. 8720 1. 6934 99. 81
贝母素乙 1. 5072 0. 1815 0. 1940 0. 3739 99. 18 100. 15 1. 60
1. 4970 0. 1802 0. 1940 0. 3722 98. 97
1. 5157 0. 1825 0. 1940 0. 3785 101. 03
1. 4894 0. 1793 0. 1940 0. 3721 99. 38
1. 5013 0. 1808 0. 1940 0. 3734 99. 28
1. 5088 0. 1817 0. 1940 0. 3816 103. 04
表 2 新疆贝母样品含量测定结果(n =3，mg/g)
产地 贝母辛 贝母素乙
伊宁县愉群翁乡 0. 5455 0. 1204
伊宁县阿热吾斯塘乡 0. 7004 0. 0618
伊宁县温亚尔乡 0. 4992 0. 1226
巩留县东买里乡 0. 5075 0. 0683
巩留县塔斯托别乡 0. 5371 0. 1381
3 讨论
3. 1 贝母辛和贝母素乙都属于异甾体类生物碱，
缺少发色团，在 HPLC中用紫外检测器检测不到，故
本试验采用了蒸发光散射检测器检测，且在漂移管
温度 90 ℃和气体压力在 46. 2 psi时，基线符合分析
要求。
3. 2 本试验参考相关文献〔4-7〕，在流动相选择中曾
用以不同比例的乙腈-水和甲醇-水(水中皆含少量
三乙胺)为流动相对色谱条件进行考察，结果表明:
以甲醇-水作为流动相时，贝母辛和贝母素乙的保留
时间偏长，色谱峰也出现明显拖尾现象，分离度达不
到要求，只有当流动相为乙腈-水的起始浓度为 38
∶ 62 时，各组分能达到较好的分离。本法采用梯度
洗脱，缩短了测定时间，目标峰分离度高，贝母辛和
贝母素乙色谱峰的对称因子分别为 1. 02 和 1. 05，
能满足分析要求。
3. 3 本试验在提取过程中分别采用了回流提取
法、超声提取法和渗漉提取法等方法，试验结果分析
表明:回流提取法操作简单，提取率高，杂质相对较
少。回流提取方法还显示二氯甲烷-甲醇(4∶ 1)溶液
的提取率与三氯甲烷-甲醇(4∶ 1)相当，故选用毒性
稍弱的二氯甲烷替代三氯甲烷。
3. 4 上述实验结果表明，在同一产地新疆贝母药
材中贝母辛的含量均高于贝母素乙，约为贝母素乙
含量的 4 倍以上。采于不同产地的新疆贝母样品各
成分之间略有差别，其中，贝母素乙含量差异较大，
这可能与新疆贝母药材的产地、采收期、加工条件等
有关。
·728·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 5 期 2014 年 5 月
参 考 文 献
［1］中国科学院中国植物志编辑委员会 . 中国植物志［M］．
第 14 卷 . 北京:科学出版社，1980:102.
［2］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］．一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:132.
［3］刘庆华，贾晓光，任永风，等 . 新疆贝母化学成分的研究
［J］．药学学报，1984，19(12):894-898.
［4］朱丹妮，谭丰萍，高山林 . HPLC-ELSD 分析测定贝母类
药材中生物碱成分［J］． 药物分析杂志，2000，20(2):
87-92.
［5］岳斌，张明，李筱 . 蒸发光检测器测定贝母类药材中西
贝素的含量［J］． 陕西中医学院学报，2006，29(3):56-
57.
［6］王玥，张庆林，陈信义，等 . HPLC 法测定市售贝母中贝
母乙素含量［J］．中草药，2001，32(1):24-25.
［7］刘晶，王曙，辛贵忠，等 . HPLC-ELSD测定太白贝母和瓦
布贝母中贝母辛的含量［J］． 中国药学杂志，2010，45
(13):1032-1034.
收稿日期:2013-11-25
基金项目:国家自然科学基金(81241111)
作者简介:包永睿(1978-)，男，硕士，实验师，主要从事组分中药及中药现代化研究工作;Tel:0411:87406496，E-mail:byr1026@ 163. com。
* 通讯作者:孟宪生，Tel:0411-87406496，E-mail:mxsvvv@ 126. com。
·药理·
气滞胃痛颗粒促胃肠动力作用谱效关系网络模型的构建
包永睿1，2，王 帅1，2，孟宪生1，2* ，杨欣欣1，2，崔亚玲1
(1. 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;2. 辽宁省组分中药工程技术研究中心 /辽宁省现代中药研
究工程实验室，辽宁 大连 116600)
摘要 目的:构建气滞胃痛颗粒促胃肠动力作用谱效关系网络模型，为其合理质量控制与药效评价提供科学
依据。方法:采用拉丁超立方法随机抽样，建立气滞胃痛颗粒中 6 味药材 20 个不同配伍组的全时段多波长融合指
纹图谱;同时测定各配伍组小肠平滑肌细胞的增殖率、cGMP 含量和 NO 含量;采用灰色关联分析法与 BP 神经网
络，将药效的综合信息与不同配伍组的谱图信息进行相关性分析，从而构建二者谱效关系网络模型。结果:从气滞
胃痛颗粒 36 个化学成分中，找到 20 个与促胃肠动力作用相关系数大于 0. 9 的成分，成功建立了气滞胃痛颗粒促胃
肠动力作用谱效关系网络模型，通过该模型对试验结果进行预测，其相对误差的绝对值均小于 6. 83%。结论:本实
验通过构建气滞胃痛颗粒促胃肠动力作用谱效关系网络模型，为其合理的质量控制与药效评价提供了全新的研究
方法，同时为复方组-效研究奠定实验基础，也为其他中药复方谱效关系研究提供参考。
关键词 气滞胃痛颗粒;促胃肠动力;谱效关系;网络模型
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)05-0828-05
Establishment of Spectrum-effect Ｒelationship Network Model of Qizhiweitong
Granules Promoting Gastrointestinal Motility
BAO Yong-rui1，2，WANG Shuai1，2，MENG Xian-sheng1，2，YANG Xin-xin1，2，CUI Ya-ling1
(1. College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China;2. Liaoning Province Multi-com-
ponent Chinese Medicine Engineering Technology Ｒesearch Center /Liaoning Province Modern Traditional Chinese Medicine Ｒesearch
and Engineering Laboratory，Dalian 116600，China)
Abstract Objective:To establish the spectrum-effect relationship network model of Qizhiweitong granules promoting gastrointesti-
nal motility for providing scientific basis for its quality control and efficacy evaluation. Methods:The Latin hypercube sampling was used
to establish full-time multi-wavelength fusion fingerprints of different compatibility groups of Qizhiweitong granules. At the same time，
the appreciation rate，the contents of cGMP and NO in small intestine smooth muscle cells after administrated drugs were deter-
mined. Then the spectrum-effect relationship of different compatibility groups were correlated，and the network model was established
with gray correlation method and BP neural network. Ｒesults:20 compounds with correlation index more than 0. 9 were found from 36
constituents in Qizhiweitong granules. The spectrum-effect relationship network model of Qizhiweitong granules promoting gastrointestinal
motility was successfully established. And through this model to forecast the result of the test，the absolute value of the relative error was
·828· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 5 期 2014 年 5 月