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裸燕麦皂苷最佳提取条件的研究



全 文 :环境与健康杂志 2011年 10月第 28卷第 10期 J Environ Health, October 2011, Vol.28, No.10
基金项目:天津市科技计划项目(07ZCKFNC01800)
作者简介:毕重铭(1970-),男,副主任医师,从事公共卫生研究。
裸燕麦皂苷最佳提取条件的研究
毕重铭 1,张民 2
1.天津开发区卫生防病站监督二科,天津 300457;2.天津科技大学食品工程与生物技术学院
摘要:为探讨从裸燕麦麸皮中提取燕麦皂苷的最佳条件,考虑到提取成本和对后续处理的影响,以 90%乙醇溶液
为提取溶液,通过正交实验确定了提取条件为:液料比 6∶1,提取 6次,提取温度 70 ℃,提取时间 120 min,该条件下的
提取得率为 0.96 g/100 g。该方法适用于裸燕麦皂苷的提取。
关键词:裸燕麦;燕麦皂苷;提取条件
中图分类号:O657.7 文献标志码:C 文章编号:1001-5914(2011)10-0920-02
燕麦是禾本科燕麦属粮饲兼用作物。栽培的燕麦主要有两
类,即皮燕麦和裸燕麦。国外栽培的燕麦多为皮燕麦,而我国广
泛栽培的燕麦是大粒裸燕麦(A. nuda L.),俗称莜麦、玉麦、铃铛
麦。裸燕麦起源于我国,是我国的特产[1]。国外对皮燕麦的加工
利用进行了广泛研究[2-4],燕麦皂苷(datrim)是从皮燕麦中制备
的一种新型脂肪替代物。裸燕麦皂苷有抑制小鼠肝自发性脂质
过氧化的作用,对 Fe2+-H2O2诱导的小鼠肝脂质过氧化有显著的
抑制作用[5]。本研究确定了从裸燕麦麸皮中提取制备燕麦皂苷
的最佳条件。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 SP2102UV紫外可见分光光度计(上海光谱
仪器有限公司)。市售裸燕麦,齐墩果酸(分析纯,中国药品生物
制品检定所),无水乙醇(分析纯,上海化学试剂公司),浓硫酸
(分析纯,上海振兴化工一厂),香兰素(分析纯,中国医药上海
化学试剂公司)。
1.2 燕麦皂苷提取条件的单因素实验
1.2.1 乙醇浓度 分别称取 10.0 g燕麦麸皮 7份,置于圆底烧
瓶中,分别加入 30 ml 40%、50%、60%、70%、80%和 90%(体积分
数)乙醇水溶液,50 ℃提取 3次,每次 30 min,合并滤液,定容,
离心,取上清液待测。
1.2.2 液料比 分别称取 10.0 g燕麦麸皮 7份,置于圆底烧瓶
中,分别加入 20、30、40、50、60、70、80 ml 90%(体积分数)乙醇
水溶液,50 ℃提取 3次,每次 30 min,合并滤液,定容,离心,取
上清液待测。
1.2.3 提取次数 分别称取 5.0 g燕麦麸皮 7份,置于圆底烧
瓶中,加入 15 ml 90%(体积分数)乙醇水溶液,50 ℃分别提取
1、2、3、4、5、6次,每次 30 min,合并滤液,定容,离心,取上清液
待测。
1.2.4 提取时间 分别称取 10.0 g燕麦麸皮 7份,置于圆底烧
瓶中,加入 30 ml 90%(体积分数)乙醇水溶液,50 ℃,提取 3次,
每次分别提取 30、50、70、90、110、130 min,合并滤液,定容,离
心,取上清液待测。
1.2.5 提取温度 分别称取 10.0 g燕麦麸皮 7份,置于圆底烧
瓶中,加入 30 ml 90%(体积分数)乙醇水溶液,分别在 40、50、
60、70、80、90、100℃提取三次,每次 30 min,合并滤液,离心,取
上清液待测。
1.3 燕麦皂苷检测方法 参照文献[6]。
1.3.1 标准曲线 精确称取齐墩果酸标准品 1.0 mg于 10 ml容
量瓶中,甲醇溶解并定容,作为标准溶液(100 mg/L)。准确移取
标准液 50、100、150、200、250 μl于具塞试管中,分别补加甲醇
至 250 μl,加入 0.5 ml香草醛,再加入 5.0 ml浓硫酸,摇匀,置于
50 ℃水浴中 20 min,冷却后于 561 nm波长处比色。以标准溶液
浓度对吸光度绘制标准曲线,回归方程相关系数 0.998 9。
1.3.2 样品检测 吸取 0.25 ml上清提取液,加入 0.5 ml香草
醛,再加入 5.0 ml浓硫酸,摇匀,置于 50 ℃水浴中 20 min,冷却
后于 561 nm波长处比色,根据标准曲线计算燕麦皂苷含量。
1.4 正交实验方法 根据单因子实验结果,选择 90%的乙醇溶
液为皂苷提取溶剂。并对液料比、提取次数、温度和提取时间选
取正交实验因素水平表(表 1),做 L16(45)正交实验。
1.5 燕麦皂苷提取实验 取燕麦麸皮 10.000 0 g三份,按正交
实验所确定的提取工艺提取燕麦皂苷,按 1.3.2的方法测定提
取液中的燕麦皂苷浓度(C),并按公式(1)计算燕麦皂苷的提取
得率(以齐墩果酸计):
皂苷提取得率(g/100 g)=皂苷提取液体积×C/10×100 (1)
2 结果与讨论
2.1 乙醇浓度对提取效果的影响 图 1A可见,当乙醇浓度较
低时,燕麦皂苷提取液吸光度随乙醇浓度的增加而上升,当乙
醇浓度为 90%时,吸光度达到峰值。继续提高乙醇浓度,吸光度
略有下降。
2.2 液料比对提取效果的影响 图 1B可见,燕麦皂苷提取液
吸光度随液料比的增加而上升。当液料比大于 6∶1时,吸光度不
再随溶剂量的增加而上升。
【实践与分析】
表 1 正交实验因素水平表
1
2
3
4
液料比
(A,倍)
3
5
4
6
提取次数
(B,次)
6
4
3
5
温度
(C,℃)
50
40
60
70
提取时间
(D, min)
30
120
60
90
水平
920· ·
DOI:10.16241/j.cnki.1001-5914.2011.10.006
环境与健康杂志 2011年 10月第 28卷第 10期 J Environ Health, October 2011, Vol.28, No.10




A)
乙醇体积分数(%)
提取时间 t/min
图 1 不同提取条件对燕麦皂苷提取效果的影响




A)
液料比




A)
提取次数




A)




A)
提取温度 t/℃
A乙醇体积分数 B液料比 C提取次数
D提取时间 E提取温度
2.3 提取次数对提取效果的影响 图 1C可见,燕麦皂苷提取
液吸光度随提取次数的增加而上升。
2.4 提取时间对提取效果的影响 图 1D可见,随着提取时间
的延长,燕麦皂苷提取液吸光度也相应上升。
2.5 提取温度对提取效果的影响 图 1E可见,提取温度由 40℃
增加到 70 ℃时,燕麦皂苷提取液吸光度随温度的上升而上升,
当温度超过 70 ℃以后,继续提高温度,反而不利于燕麦皂苷的
提取。
2.6 燕麦皂苷提取条件正交优化实验结果 燕麦皂苷提取条
件正交优化实验结果见表 2。根据极差分析结果可知,各种因素
对提取效果(吸光度,A561)的影响顺序为 A>B>D>C。
燕麦皂苷提取条件正交优化实验方差分析结果见表 3。根
据正交实验方差分析结果可知,A、B、C、D因子的影响均具有统
计学意义(P<0.05),结合极差分析结果,选择燕麦皂苷提取较佳
条件为 A4B1C4D2,即:提取液料比为 6倍,提取 6次,于 70 ℃下
提取,每次提取 120 min。
2.7 裸燕麦皂苷的提取得率 按正交实验所确定的提取工艺
提取裸燕麦皂苷,提取得率为(0.96±0.07)g/100 g。
参考文献:
[1]陈是宇,方程,孙彦,等.燕麦属牧草根尖组织染色体观察方法的优化
研究〔J〕.草原与草坪,2008,2:23-26.
[2]Wu YV, Doehlert DC. Enrichment of β-glucan in oat bran by fine
grinding and air classification 〔J〕. LWT-Food Science and Technology,
2002,35:30-33.
[3]Svihus B , Gullord M . Effect of chemical content and physical
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〔J〕. Animal Feed Science and Technology, 2002, 102: 71-92.
[4]Givens DI , Davies TW, Laverick RM. Effect of variety , nitrogen
fertilizer and various agronomic factors on the nutritive value of husked
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2004,113:169-181.
[5]毕重铭,曹小红,田惠光,等.裸燕麦皂苷的提取分离及其抗氧化活
性〔J〕.天津科技大学学报,2008,23(4):49-51.
[6]黄进.大豆活性成分的结构与功能评价〔D〕.武汉:华中农业大学,
2003.
(收稿日期:2011-07-02 修回日期:2011-08-20)
(本文编辑:杜宇欣)
表 2 燕麦皂苷提取条件正交实验结果
实验
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
k1
k2
k3
k4
R
液料比
(A)
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
4
4
4
4
0.335 5
0.394 0
0.379 8
0.420 8
0.085 3
次数
(B)
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
0.416 2
0.369 8
0.334 0
0.410 0
0.082 2
温度
(C)
1
2
3
4
2
1
4
3
3
4
1
2
4
3
2
1
0.378 5
0.345 5
0.388 5
0.417 5
0.072 0
提取时间
(D)
1
2
3
4
3
4
1
2
4
3
2
1
2
1
4
3
0.341 5
0.418 2
0.391 8
0.378 5
0.076 7
误差项
(E)
1
2
3
4
4
3
2
1
2
1
4
3
3
4
1
2
0.387 2
0.385 0
0.387 2
0.370 5
0.016 7
0.329
0.324
0.307
0.382
0.388
0.378
0.342
0.468
0.418
0.416
0.351
0.334
0.530
0.361
0.336
0.456
A561
表 3 正交实验方差分析结果
来源
A
B
C
D
误差
平方和
0.015 25
0.017 64
0.010 58
0.012 24
0.000 78
自由度
3
3
3
3
3
均方和
0.005 082
0.005 880
0.003 528
0.004 081
0.000 260
F值
19.51
22.57
13.54
15.67
P值
<0.05
<0.05
<0.05
<0.05
921· ·