全 文 ：林业科学 现代农业科技 2012年第 22期
Trizol 法、硫氰酸胍/酚法、酚/SDS 法、盐酸胍法、硫氰酸
胍法都是提取 RNA 的常用方法，其中 Trizol 法最为常用。
Trizol 使样品匀浆化，细胞裂解，释放细胞内含物，同时因含
有 RNase 抑制剂可防止 RNA 降解，在一定程度上保证了
RNA 的完整性。加入氯仿，样品发生分层。RNA 存在于上层
水相，可用异丙醇沉淀回收；DNA 存在于中间层，可用乙醇
沉淀回收；蛋白质存在于下层有机相，可用异丙醇沉淀回
收。因此，该方法可以同时分离一个样品中的 RNA、DNA 和
蛋白质。Trizol 法在提取动物组织 RNA 时颇为有效，但在多
糖多酚含量较多的植物样品中，因其无法抑制多糖多酚对
DNA 和 RNA 分相的干扰，即可能造成 DNA 或者多糖多酚
次级代谢产物的大量残余，影响抽提的总 RNA 的纯度。直
接裂解过柱子的方法是目前最先进的方法，包括 Qiagen 的
RNeasy plant mini kit 盒子。该试验对 QIAGEN RNeasy Plant
Mini试剂盒法（胍盐法）进行了研究，拟比较其与 Trizol法的
优劣，以探索更好的 RNA 提取方法。
1 材料与方法
1.1 试验材料
植物材料 ：狗尾草新鲜叶片 。试剂与仪器 ：QIAGEN
RNeasy Plant Mini 试剂盒、液氮、研钵、离心机、电泳仪。
1.2 试验方法
称取新鲜狗尾草叶片组织不超过 100 mg，在预冷的研
钵中研磨成细粉，转移到 2 mL EP管中。①待液氮挥发完毕 ，
在样品未解冻状态下加入 450 mL 提取缓冲液 RLT，立
即剧烈震荡，充分涡旋。注意 RLT 应加入 1/100 体积的 14.5
M β-巯基乙醇，该过程也可在 56 ℃温育 1~3 min；②将裂解
液全部转移到淡紫色柱子中，全速离心 2 min，小心吸取上
清至新管中。注意该步中裂解液被均质化，细胞碎片、蛋白
质等大分子物质吸附在柱膜上 ，小分子在上清中，故应小
心吸取上清，勿吸到沉淀；③在新管中加入 1/2 样液体积的
无水乙醇，立即吹打混合 。将混合后的约 650 μL 样液，包
括形成的所有沉淀转移到粉红色管中， 轻柔的盖上离心管
盖子，≥10 000 r/min，离心 15 s，弃掉下清液；④向粉红色管
中加入 350 μL RW1 缓冲液，≥10 000 r/min，离心 15 s，冲洗
离心柱，弃下清；⑤向粉红色管中加入 700 μL RW1 缓冲液，
≥10 000 r/min，离心 15 s，冲洗离心柱，弃下清；⑥将离心柱
转移到一新的 2 mL收集管上，加入 500 μL RPE液，≥10 000
r/min离心 15 s。弃去管内液体，重复使用收集管。注意：试剂盒
提供浓缩的 RPE洗脱液，使用前必须加入 4 倍体积的 96%~
100%乙醇；⑦向柱中加入 500 μLRPE 液，≥10 000 r/min 离
心 2 min，冲洗滤膜，干燥离心柱，弃掉下清液。注意该步需
保证无乙醇残留，否则影响后面的试验；⑧将吸附柱放入
新的 1.5 mL 回收管中，加入 30～50 μL 的 RNase-free water
到柱中，≥10 000 r/min 离心 1 min，释放 RNA。注意若 RNA
产量在 20 μg 以上，用 30~50 μL 无 RNase水再洗脱 1 次 。
RNA 样品存于-20 ℃或-80 ℃冰箱；⑨用高精度无需比色
皿分光光度计测定 RNA 的含量；琼脂糖凝胶电泳检测[1-3]。
2 结果与分析
采用高精度无需比色皿分光光度计测定 RNA 的含量，
QIAGEN RNeasy Plant Mini 试剂盒提取的狗尾草 RNA 含量
为 6 080 ng/μL，Trizol 法提取的狗尾草 RNA 含量为 1 004
ng/μL。由图 1 可以看出，1、2 泳道的条带比后面泳道的条带
要亮，且少有降解。由此表明，用 QIAGEN RNeasy Plant Mini
试剂盒提取简单植物组织 RNA 确实比较有效。
3 结论与讨论
通过对比 2 种方法提取出的 RNA 产量和纯度，发现用
QIAGEN RNeasy Plant Mini 试剂盒提取简单植物组织 RNA
确实比 Trizol 法有效。该方法是通过裂解液裂解细胞，该裂
解液含有 RNase 抑制剂，不含有氯仿、苯酚等有毒物质。通
过离心分离细胞碎片，过淡紫色柱子过滤出多糖及蛋白质，
（下转第 178 页）
狗尾草总 RNA提取方法研究
王 凯 龚秀秀 董 雯 丁建峰
（山东师范大学生命科学学院，山东济南 250014）
摘要 RNA 是由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成的长链状分子。RNA 与 DNA、蛋白质、多糖等物质普遍存在于细胞中。常用的总 RNA
提取的方法是 Trizol 法，该方法可同时分离一个样品的 RNA、DNA 和蛋白质，但由于植物材料中多糖多酚的存在及操作环境的影响，RNA
产量偏低。QIAGEN RNeasy Plant Mini试剂盒法（胍盐法）是通过裂解液（不含苯酚、氯仿）裂解细胞，使 RNA 和 DNA 同时通过柱子，再将其
分离的总 RNA 提取法。该方法既克服了 Trizol 在多糖多酚存在的情况下不能成功分离 RNA 与 DNA 的弊端，又保证在提取过程中不使用
苯酚氯仿等有毒试剂，并且能在一定程度上提高 RNA 的产量和纯度。
关键词 狗尾草；RNA；提取方法；Trizol法；胍盐法
中图分类号 S713 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）22-0156-01
收稿日期 2012-09-11
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林业科学 现代农业科技 2012年第 22期
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分离出 RNA 与 DNA 结合相，继而通过粉红色柱吸附 RNA，
对 RNA 和 DNA 进行分离，达到抽提 RNA 的目的。该方法
添加去多糖多酚代谢产物的成分 ，在一定程度上提高了
RNA 的产量，较 Trizol 法避免在多糖多酚下对 DNA 和 RNA
分离的干扰。另外，由于 DNA 和 RNA 同时结合在柱膜上，
所以除去 DNA 也是一个要点[4-6]。
4 参考文献
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艺，2012（12）：117-119.
（上接第 171页）
2012 年开春后进行精耕细作，施复合肥 750 kg/hm2，然后按
照 3 m 一畦布畦，苗木栽植在畦埂上 。臭椿耐干旱不耐水
湿，长期积水会烂根，严重者会致死，栽植在畦埂上可以避
免积水，预防烂根的情况发生。
4.4 种苗处理
将种苗的种根进行修整 ，剪除过长根、劈裂根和病残
根，然后用灭线灵和多菌灵溶液进行浸根，消毒时间约 30
min，然后用掺有生根粉的泥糊拉泥浆。对苗干进行检查，杀
灭虫卵，剪除侧枝[3]。
4.5 挖穴
按照株行距 3.0 m×1.5 m 进行定穴，用打孔机或人工挖
成 60 cm 见方的穴，穴底施入腐熟的有机肥用土拌匀，然后
填入 20 cm 厚的表土。
4.6 定植
2012 年 3—4 月进行定植，定植时将苗木放入穴中央，
栽植深度以沉淀后根茎和地面相平为好。然后分层封土，踏
实，做到“三踏一提浇足水”。栽植时做到横竖成行，高度一
致。每个品种集中种植，方便以后观察其生长态势。
4.7 管理措施
4.7.1 培土，浇水。除栽植时高要培土外，平时要经常检查，
发现苗木被风刮歪时应立即扶正、培土、踏实。要认真检查
墒情、发现缺墒时应立即补水，要保持湿润但不能积水。
4.7.2 松土除草。结合中耕松土及时进行除草，做到除早、
除小、除了。
4.7.3 病虫害防治。在搞好预测预报的基础上及时有针对
性地喷洒杀虫、杀菌药剂，防止病虫害的发生。尤其注意毛
虫类危害。
4.7.4 雨季排水。臭椿耐旱不太喜水，雨季切忌积水，防止
浸渍根。因此，要求做好雨季排水工作。
4.7.5 微量元素应用。根据苗木生长情况分期施肥。生长前
期及时追施复合肥、尿素等速效性肥料，中期增施含磷钾为
主的肥料，后秋不施肥，整个生长期注意喷施微量元素，进
行叶面喷肥。
4.7.6 抚育管理。根据需要及时修枝、定干、保证一定干型
高度和丰满树冠。立冬以后进行涂白、杀菌消毒、防止树干
受冻[4]。
5 参考文献
[1] 徐珍萍 .臭椿——抗污染能力强的树种 [J].科技情报开发与经济 ，
2006，16（20）；282-283.
[2] 申洁梅，刘占朝，张万钦，等 .臭椿研究综述 [J].河南林业科技，2008
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[3] 马洪海 .臭椿生物特性及栽培技术 [J].吉林农业：学术版，2011（12）：
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[4] 陈金法.臭椿的培育和综合利用[J].中国林副特产，2011（3）：61-63.
（上接第 172页）
长，实现高产稳产[3-4]。
2.5 病虫害防治
褐斑病为丁香的主要病害，高温高湿季节易发病，危害
枝、叶、果实。受害部位褪绿呈水渍状，出现微红斑点，后扩
大成红褐色近圆形斑点，中心变灰白色，严重时枯梢落叶 。
防治方法：①发病前或发病初用 1∶1∶100 波尔多液，或 65%
代森锌可湿性粉剂 500倍液喷防。②清洁田园，消灭病残株。
2.6 采收加工
丁香定植后 5～6年开花结果，20年前后为盛产期，树龄
达 100～130 年，采收期因各地气候不同而异 ，海南地区在
7—8月。一般现花芽后 6个月含苞欲放的花蕾便可采收，剪
下饱满、绿色微带红色的花蕾。晒 4～6 d 至干脆易断即为公
丁香 [1]。经自然授粉，花瓣、花丝、花柱脱落，逐渐膨大成紫红
色的幼果，采收晒干后即是母丁香。
3 参考文献
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[2] 陈伟平，李坚，伍尚丽.丁香[J].中药通报，1987（1）：23.
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（3）：55-56.
[4] 邓运川，董如义.紫丁香栽培管理[J].中国花卉园艺，2011（14）：44-45.
责任书》，明确责任、目标和任务指标。县上成立林改督察
组，加大督查检查力度，并将督察情况在全县范围内通报。
各部门要加强协作，发挥各自的职能作用，形成强大合力，
推进林改工作健康有序进行。要高度重视林改纠纷调处，切
实做好各类林权纠纷的排查化解工作，民政、国土、林业等
部门要按照有关规定切实做好行政界线争议、土地权属争
议、林权争议等各类争议的调查处理工作，把矛盾解决在基
层，化解在萌芽状态。对在林改中不认真履行职责、工作作
风不实、落实政策不到位，造成乱砍滥伐林木、群众集体上
访等严重问题的，要追究有关领导责任 [4]。
4 参考文献
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