全 文 ：工艺·试验
《Technology＆Experiment》
doi:10.3969 /j.issn.1002-154X.2011.01.007
朱砂七总鞣质的提取及抗氧化活性研究
王晓梅 赵立芳 支娟娟 郭进宝
(宝鸡文理学院化学化工系 ,陕西省植物化学重点实验室 ,陕西 宝鸡 721013)
摘 要 考察了朱砂七总鞣质的含量及抗氧化活性。以 60%丙酮为溶媒提取朱砂七鞣质 , 用铁氰化钾还原法测鞣质
的还原能力 , 以 Fenton反应为产生· OH模型 ,以邻苯三酚自氧化反应为产生 O2-· 模型 , 用分光光度法测定鞣质对
模型中产生的· OH和 O2-·的清除作用。结果表明朱砂七鞣质的还原力随浓度的增大而增大 ,朱砂七鞣质对 O2-·
和· OH的最高清除率分别达 69%和 70%。朱砂七总鞣质具有较强的抗氧化作用。
关键词 朱砂七 鞣质 抗氧化
收稿日期:2010-10-22
基金项目:陕西省教育厅重点实验室基金资助项目(08JZ08),宝鸡文理学院院级重点项目(ZK0844)。
作者简介:王晓梅(1962～ ),女 ,博士 ,从事植物药的基础与应用研究。
StudyonExtractionandAntioxidativeActivity
ofTannininPolygonumCilinerve
WangXiaomei ZhaoLifang ZhiJuanjuan GuoJinbao
(DepartmentofChemistryandChemicalEngineering, BaojiUniversityofArtsandSciences,
ShannxiKeyLaboratoryofPhytochemistry, ShanxiBaoji721013)
Abstract AntioxidativeactivityoftannininPolygonumcilinerve(Nakai)Ohwi(TPCO)wasobserved.Tannins
wasextractedfromPolygonumcilinerve(Nakai)Ohwiwith60% acetoneasthesolvent.Thereducingpowerwasde-
terminedbyK3Fe(CN)6 reduction.The·OHandO2 -· wereproducedrespectivelybyFentonreactionandpyrogal-
lolautoxidationsystem.TPCOwasaddedintosystem.Thescavengingefectson· OHandO2-· ofTPCOwere
studiedbyvisiblespectroscopy.TheresultsshowedthatmaximumabsorbanceofTPCOinK3Fe(CN)6 systemwas
0.51.ClearancerateofTPCOforO2-· and·OHwere69%and70%.TPCOhadastrongabilitytoresistanceoxi-
dation.
Keywords polygonumcilinerve tannin antioxidant
朱砂七 ,别名朱砂莲 、红药子 ,为蓼科植物 Polyg-
onumcilinerve(Nakai)Ohwi毛脉蓼的块根 ,为 “太白
七药” [ 1]之一。其味苦性凉 ,具有清热解毒 、活血凉
血 、止血止泻 、去风湿 、抗肿瘤等功能 ,民间广泛用于
治疗胃病 、菌痢 、扁桃体炎及跌打损伤 、风湿腰痛等
症 。鞣质是一类水溶性多酚类化合物 ,广泛存在于植
物界。鞣质具有广泛的生物学活性[ 2, 3] ,包括抑菌作
用 ,抑制脂质分解作用 ,降低胆固醇及转氨酶浓度 ,降
低多种诱变剂的诱变性并有抗病毒以及抗肿瘤作用
等 [ 4] 。因为鞣质具有较多邻位酚羟基的结构 ,所以
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第 25卷第 1期
2011年 1月 化工时刊ChemicalIndustryTimes Vol.25, No.1Jan.1.2011
具有较强的还原性 ,为一种植物性抗氧化剂。本文就
朱砂七鞣质的提取及抗氧化活性进行了探讨。
1 材料与仪器
1.1 仪器
电子分析天平(塞多利斯科学仪器(北京)有限
公司),电热恒温水浴锅(WB-2000,郑州长城工科
股份有限公司),旋转蒸发仪(R-1002,郑州长城工
科股份有限公司),电动离心机(上海安亭科学仪器
厂), UV-2550紫外 -可见分光光度计(日本岛津),
真空干燥箱 DZF-6020型(上海精宏实验设备有限
公司)。
1.2 材料及试剂
朱砂七 ,产于陕西太白山区 ,经陕西中医学院胡
本祥教授鉴定。
所用试剂均为分析纯 。实验用水为双蒸水 。
2 实验方法
2.1 朱砂七鞣质的提取
称取朱砂七 100.0 g, 干燥粉碎 ,用 10倍量的
60%丙酮(W/V)室温浸泡 2d,过滤 ,收集滤液 。滤渣
再用 3倍量的 60%丙酮 ,于 50℃以下回流提取 2h,
过滤 ,合并滤液 ,减压蒸馏 ,将馏分(鞣质水溶液)过
滤得鞣质粗液 ,再先后用乙醚和乙酸乙酯萃取 ,水液
层旋转蒸发浓缩至膏状 , 50℃真空干燥 ,得供试样品 。
2.2 朱砂七中鞣质含量的测定 [ 5 , 6]
准确移取 1 mol· L-1醋酸锌标准液 20 mL于
500mL容量瓶中 ,加 14mL氨水 ,摇匀使白色沉淀完
全溶解 。将制得的朱砂七鞣质提取液用蒸馏水稀释
至 400mL,置于水浴中温热至 35±2℃,然后移入上
述 500mL容量瓶中 ,并不断震荡摇匀 ,再在 35±2℃
的水浴中温热 30 min(间歇振摇数次),取出后冷却
至室温并用蒸馏水稀释至刻度线 ,摇匀后用干滤纸过
滤 ,收集滤液 。
准确移取上述滤液 20mL于锥形瓶中 ,加 30 mL
蒸馏水 , 25 mL氨 -氯化铵缓冲液 ,再加少量铬黑 T
指示剂 ,摇匀后用 0.05 mol· L-1乙二胺四乙酸二钠
(EDTA)标准溶液滴定 ,当溶液由红色变为蓝色即为
滴定终点 ,按公式(1)计算鞣质含量。
鞣质含量(%)=(0.155 6×N)/W×100% (1)
式中:
0.155 6─为配合沉淀剂(Zn2 +)的消耗量与鞣质
含量的关系常数;
N─1mol· L-1醋酸锌标准溶液的配合沉淀消耗
量(mL)=20×C醋酸锌 -25×CEDTA ×VEDTA;
C醋酸锌:醋酸锌标准溶液的摩尔浓度(0.851 0
mol· L-1);
CEDTA:EDTA标准溶液的摩尔浓度(0.043 0 mol
· L-1);
VEDTA:EDTA标准溶液滴定消耗的体积(mL);
W─朱砂七样品重量(g)
测得 60%丙酮提取液中鞣质含量 (%)=
2.69%。
2.3 朱砂七鞣质的抗氧化活性研究
2.3.1 还原力的测定(铁氰化钾还原法)[ 7 ]
向试管中依次加入不同浓度的朱砂七鞣质 1.0
mL、PBS(pH6.6)缓冲液 2.5 mL和 1%K3Fe(CN)6
溶液 2.5 mL, 50℃水浴保温 20 min,流水快速冷却
后 ,加入 10%TCA溶液 2.5mL,混匀 , 3 000r·min-1
离心 10 min,取上清液 2.5mL,依次加入双蒸水 2.5
mL、0.1% FeCl3溶液 0.5 mL, 充分混匀后静置 10
min,以双蒸水作参比 ,在 700 nm测定其吸光值 ,吸光
值越大表示还原能力越强。
2.3.2 清除超氧阴离子自由基的测定(邻苯三酚自
氧化法)[ 8, 9]
取三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCl缓冲溶液 3.6
mL和双蒸水 4mL混匀 ,于 25℃水浴保温 20min后 ,
立即加入经 25℃预热的邻苯三酚溶液 0.2 mL,迅速
摇匀后倒入比色皿 ,在 345nm以 Tris-HCl缓冲溶液
和双蒸水作参比测吸光值 。按上述步骤在加入邻苯
三酚之前 ,分别加入 1mL不同浓度的朱砂七鞣质 ,相
应减少双蒸水的量 ,照前法测定吸光度 。根据式(2)
计算抑制率。
抑制率 =(■A0 /■t-■A/■t)/■A0 /■t×
100% (2)
式中:■A0 /■t为邻苯三酚自氧化反应速率 ,
■A/■t为加样品后邻苯三酚自氧化反应速率 。
2.3.3 清除羟基自由基的测定(Fenton法)[ 10 ]
实验按表 1操作:
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化工时刊 2011.Vol.25, No.1 工艺 ·试验《Technology＆Experiment》
表 1 清除羟自由基的测定
Table1 determinationof· OHclearance
试剂 损伤管/mL
未损管
/mL
样品管
/mL
0.75mmol· L-1邻二氮菲乙醇溶液 1 1 1
PBS缓冲溶液(pH7.4) 2 2 2
双蒸水 1 2 0
0.75 mmol· L-1FeSO4溶液 1 1 1
0.3% H2O2 1 0 1
样品溶液 0 0 1
上述溶液边加边摇匀 ,于 37℃水浴反应 60 min,
以 1∶2(V/V)的缓冲液和双蒸水作参比 ,在 536 nm测
其吸光度 A损和 A未 ,用不同浓度的样品代替双蒸水 ,
以 1∶2∶3(V/V/V)的样品 、缓冲溶液 、双蒸水作参比 ,
在 536nm处测其吸光度值 A样 。按式(3)计算清除
率 。
清除率 =[ (A样 -A损)/(A未 -A损)] ×100% (3)
式中:A样 、A损 和 A未分别为加入样品 、不加样品
及不加样品和 H2O2体系的吸光度值。
3 结果与讨论
3.1 朱砂七鞣质的还原能力
图 1示 ,朱砂七鞣质的还原能力随着鞣质含量的
增加而增大 ,当鞣质浓度为 0.5mg·mL-1时 ,吸光度
最大为 0.51。说明朱砂七鞣质的还原能力与浓度存
在相关关系 。
图 1 朱砂七鞣质的还原力测定
Fig.1 Reducingpoweroftanninin
Polygonumcilinerve
3.2 朱砂七鞣质对超氧阴离子自由基的清除作用
在碱性条件下 ,邻苯三酚迅速发生自氧化 ,生成
红色物质 ,同时释放· O-2 , · O-2对自氧化有催化作
用 ,其自氧化速率与 · O-2浓度有关。实验中观察
到 ,加入样品溶液后 ,体系红色变浅 ,邻苯三酚自氧化
速率降低 。由图 2可知 ,朱砂七鞣质各浓度对 · O-2
均有较高的清除率 ,朱砂七鞣质为 3.0 mg· mL-1时 ,
清除率达 69%。
图 2 朱砂七鞣质对超氧阴离子的清除
Fig.2 · O-2 clearanceoftanninin
Polygonumcilinerve
3.4 朱砂七鞣质对羟自由基的清除
由图 3可知 ,朱砂七鞣质对邻二氮菲 -金属铁离
子 -H2O2体系产生的 · OH有一定的清除作用 ,朱
砂七鞣质为 0.5 mg· mL-1时 ,清除率达 70%。清除
率随鞣质浓度的增加而逐渐上升 。
图 3 朱砂七鞣质对羟自由基的清除
Fig.3 · OHclearanceoftanninin
Polygonumcilinerve
4 结 论
鞣质具有的多方面的生理活性日益引起国内外
的广泛关注。本次实验采用配合滴定法测定鞣质含
量 ,其准确度和精密度均高 。实验测得 60%丙酮提
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王晓梅等 朱砂七总鞣质的提取及抗氧化活性研究 2011.Vol.25, No.1 化工时刊
取液中鞣质含量为 2.69%。体内的 · O-2、· OH等
被称为反应活性氧类 ,其化学性质相当活跃 ,其中以
· OH活性最强 ,在人体内含量过多可引起蛋白质 、
DNA等各种生物大分子的氧化损伤 ,甚至破坏细胞
的正常结构和功能 ,从而促进衰老进程和导致多种疾
病 。本文通过化学模拟体系研究了朱砂七鞣质对活
性氧类的清除作用 ,结果表明 ,朱砂七鞣质具有较好
的抗氧化作用。研究结果为朱砂七生物活性的进一
步研究及药材的开发提供了理论参考 。
参考文献
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H2O2 /Fe2+产生的羟自由基 [ J] .生物化学与生物物理
进展 , 1996, 23(6):553 ～ 555
简 讯
硫酸硝酸工业排放标准同时发布
2011年 1月 12日 ,环保部和国家质检总局联合对外发布《硫酸工业污染物排放标准》 、《硝酸工业污染物排放标准》,自 2011
年 3月 1日起正式实施。这两项国家标准均是首次发布 , 分别对硫酸 、硝酸工业企业废水和大气污染物排放限值 、监测和监控提
出了具体要求。
《硫酸工业污染物排放标准》对硫酸生产企业(不包括冶炼烟气制酸和硫化氢制酸企业)二氧化硫 、硫酸雾 、颗粒物等大气污
染物排放作了严格规定 ,其中对二氧化硫的严格限制是对企业最大的挑战。该《标准》规定 , 对于已经建成的硫酸企业 , 自 2011
年 10月 1日起至 2013年 9月 30日止 , 二氧化硫排放浓度限值为 860 mg/m3 ,自 2013年 10月 1日起排放浓度限值为 400 mg/
m3。新建企业自 2011年 3月 1日起执行排放浓度限值 400 mg/m3。与之前的报批稿相比 ,正式发布的标准中执行日期有所延
迟 , 这给了企业更多时间进行改造。
《硝酸工业污染物排放标准》要求现有企业自 2013年 4月 1日起 、新建企业自 2011年 3月 1日起 , 大气污染物中氮氧化物
排放限值为 300 mg/m3 ,单位产品基准排气量为 3 400 m3 /t。 《标准》对废水中的氨氮 、总氨 、总磷等指标也进行了具体规定。其
中 , 氨氮和氮氧化物排放标准的亮相 , 与 “十二五”国家增加这两项约束性指标相契合。
两项标准的主要起草人之一 、青岛科技大学环境保护研究所所长杨波教授告诉记者 , 硫酸和硝酸工业是化工行业中较大的
排放源。其中仅硫酸行业二氧化硫年排放约 10万 t,占化工行业排放量的 9%,我国硫酸工业每年因二氧化硫排放造成经济损失
20亿元。新标准将强制规范企业的排污行为 ,对于促进生产工艺和污染治理技术的进步具有重要意义。 此外 , 两标准规定了水
和大气污染物特别排放限值 ,为部分地区未来执行更严格的排放标准提供了依据。
中国硫酸工业协会理事长齐焉认为 ,为应对新标准 , 硫酸企业应全面采取提高催化剂性能 、增加尾气吸收装置等措施 , 同时
加快高品质国产催化剂的研发和超重力设备替代高塔提高脱吸率等技术的推广 , 保证尾气排放等指标达标。
来源于:中国化工信息网
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化工时刊 2011.Vol.25, No.1 工艺 ·试验《Technology＆Experiment》