全 文 ：云 南 中 医 中 药 杂 志
* 基金项目:新疆维吾尔自治区科技支撑计划项目(NO:201133128)。
作者简介:兰卫(1969 －)，男，江苏泰兴人，教授，研究方向:中维药研究，E － mail:lanwei516@ sina. com.
△通信作者:倪健，E － mail:njtcm@ 263. net;耿直，E － mail:gengzhi001@ 163. com.
维药洋甘菊体外抑制宫颈癌 Hela细胞增殖作用研究*
兰 卫1、2，郭玉婷3，陈 阳2，段沐含2，耿 直2△，倪 健1△
(1. 北京中医药大学中药学院，北京 100029;2. 新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 830011;
3. 新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 研究洋甘菊提取物对宫颈癌 Hela细胞体外增值抑制的作用。方法 洋甘菊提取物 95%乙醇提取并纯化，得到
澄清的药物溶液后，进行细胞体外给药实验。采用 CCK － 8 法测定不同浓度不同时间下洋甘菊提取物作用后 Hela 细胞存活率。
结果 药物浓度为 670μg /mL时，Hela细胞抑制率为 29. 35%。当最高药物浓度达到 1500μg /mL时，Hela细胞抑制率为 82. 18%。
随着药物浓度的增加，Hela细胞抑制率呈明显上升趋势。结论 维药洋甘菊提取物对宫颈癌 Hela 细胞的增殖有明显的抑制
作用。
关键词:洋甘菊;宫颈癌;Hela细胞;细胞增殖;抑制
中图分类号:Ｒ285. 6 文献标志码:A 文章编号:1007 － 2349(2016)05 － 0054 － 02
德国洋甘菊(Matricaria chamomilia)又称母菊，维吾尔语
称“巴木乃”，是新疆特色地产药材［1］。根据近年来的药理学
研究表明，发现它有镇静、止痛及改善癌症病人症状等
作用［2］。
宫颈癌是一种严重危害妇女健康和生命的恶性肿瘤［3］。
本实验组采用人宫颈癌 Hela细胞作为实验模型，研究洋甘菊
提取物体外抗宫颈癌的抑制活性，扩展洋甘菊的临床用途。
1 材料
1. 1 药材 洋甘菊于 2015 年采集自新疆和田地区策勒县策
勒乡，经新疆医科大学中医学院中药系中药资源教研室盛萍
教授鉴定为德国洋甘菊(Matricaria chamomilia)的头状花序。
1. 2 仪器 酶标仪;显微镜，离心机，移液枪，超净工作台
(BCM －1300A);CO2 培养箱(HEＲAcell 150i)。
1. 3 试剂 0. 25%胰酶(批号:140609，北京协和细胞资源中
心);胎牛血清(批号:20130511，兰州百灵生物技术有限公
司);DMEM培养液(批号:201305，Thermo Fisher 公司);CCK
－ 8(批号:JA611，DOJINDO laboratories)。
1. 4 细胞 人宫颈癌 Hela细胞株由中国医学科学院药物研
究所赠予。
2 方法
2. 1 洋甘菊提取物的提取 洋甘菊干燥花序 2. 0kg，加 10 倍
量 95 %乙醇浸泡 30 min，加热回流 2 次，每次 60 min，过滤，合
并两次滤液，干燥，得到洋甘菊提取物。
2. 2 洋甘菊提取物药物溶液的配制 洋甘菊提取物为粗提
物，以 DMSO助溶，用完全培养液稀释(DMSO 含量≤0. 5%)，
配制成每 mL含 2 mg洋甘菊提取物的溶液，完全溶解后于离
心机中离心，转速 12000 rpm，离心时间 5 min，上清液经
0. 22 μm无菌滤膜过滤，即得用于细胞给药的澄清药物溶液。
2. 3 细胞抑制率测定 采用参考文献的方法［4］，选择处于对
数生长期的细胞，在 96 孔细胞培养板中每孔接种 3000 个 /
100 μL细胞悬液，24 h 后给药，根据前期预试结果，分别设 9
个浓度受试组(能反映浓度与疗效的量 －效关系)、阳性对照
组、细胞对照组和正常组，阳性对照组加入顺铂(浓度为
20 μg /mL)。同时，考察细胞毒性试验，加入上述不含药物的
DMSO溶液，作为细胞对照组;加入正常培养基，作为正常组。
再培养 72 h，然后在细胞培养板中每孔加入 100 μL CCK － 8，
在 37℃环境中孵育 4 h，然后测定其 450 nm吸光度，获取受试
药物对肿瘤细胞抑制率和 IC50
［5］。
2. 4 Hela细胞形态学观察 根据上述细胞增殖抑制实验，取
12 孔板，加入浓度为 890、670 μg /mL的药物，观察药物对细胞
形态的影响。参照相关文献［6］，取对数生长期的 Hela 细胞接
种于 12 孔细胞培养板内，每孔接种50000 个 /2 mL，培养 24 h，
实验组分别加入加入浓度为 890、670 μg /mL的洋甘菊提取
物，对照组加入空白培养液，培养 72 h后在倒置显微镜下观察
细胞的形态变化。
3 结果
3. 1 洋甘菊提取物对 Hela 细胞的增殖抑制作用 采用
CCK － 8 法测定分别加入 1500、1200、1000、890、670、460、330、
180、95 μg /mL不同浓度药物溶液作用 72 h后 Hela细胞的存
活率，见图 1。与对照组未经处理的 Hela细胞相比，药物浓度
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DOI:10.16254/j.cnki.53-1120/r.2016.05.028
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为为 890 μg /mL时，Hela细胞抑制率为 51. 16%。当最高药物
浓度达到 1500 μg /mL 时，Hela 细胞抑制率为 82. 18%。相同
作用时间增加给药浓度，细胞抑制率明显上升。结果表明，洋
甘菊提取物对 Hela 细胞的增殖有显著抑制作用。其中，IC50
为 890 μg /mL，对 Hela 细胞抑制率为 51. 16%。同时，将 DM-
SO以完全培养液稀释后，DMSO 的含量同给药组，经实验观
察，DMSO对照组各浓度对细胞无明显抑制作用，并与正常组
接近。
图 1 24 h后各药物浓度下 Hela细胞的抑制率
3. 2 Hela细胞形态学观察 参照相关文献［6］，观察细胞的形
态变化，见图 2。
图 2 对照组和实验组形态图
(A. 对照组(10X);B. 670μg /mL实验组(10X);C. 890μg /mL实
验组 (10X);D. 对照组 (40X);E. 670μg /mL 实验组 (40X);
F. 890μg /mL实验组(40X);G. 阳性组(10X);H:阳性组(40X);
I. 正常组(10X);J. 正常组(40X))
4 讨论
本研究采用 CCK － 8 法测定细胞存活率，结果表明，洋甘
菊提取物可明显抑制人宫颈癌 Hela 细胞的增殖。本实验对
Hela细胞的活性进行检测，结果显示，Hela细胞的存活率随洋
甘菊提取物给药浓度的增加而减小;综上所述，洋甘菊提取物
能够抑制人宫颈癌 Hela细胞的增殖。
洋甘菊中含多种活性成分，最为重要成分的是黄酮类成
分及其苷类成分，主要有芹菜素、木犀草素和槲皮素、木犀草
苷等［7 － 8］，兰卫等［9 － 10］测定了芹苷元 － 7 －葡萄糖苷和总皂苷
的含量。
胡继松等［11］研究了芹菜中五种成分对肝癌细胞株
HepG2、白血病细胞株 HL － 60 的抑制效果。结果表明，芹菜
素(98%)和芹菜醇提物(黄酮含量 40%)样品对 HepG2 和 HL
－ 60 有一定的抑制作用，而试验中芹菜粗黄酮(黄酮含量
70%)、芹菜苷(98%)、3’－甲氧基芹菜苷(98%)对 HepG2 和
HL － 60 这两种肿瘤细胞均无明显抑制效果。
天然药物通过多种途径对肿瘤进行预防和治疗，抗氧化
作用是途径之一［12］。韩松林等报道了洋甘菊具有抗氧化作
用［13］。夏娜等报道了洋甘菊中多糖与黄酮粗提物抗氧化及
抑制亚硝化作用［14］。由于洋甘菊多成分，多靶点的特点，其
提取物抗肿瘤作用机制广泛，洋甘菊抑制宫颈癌 Hela 细胞增
殖作用的物质基础和可能的作用机制还有待进一步研究，其
抑制宫颈癌 Hela 细胞增殖作用的“药—效”对应关系有待进
一步明确。
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(收稿日期:2016 － 03 － 21)
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