全 文 ：2012 年 12 月 1 日 第 12 期
No． 12 1 Dec． 2012
中 医 学 报
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 27 卷 总第 175 期
Vol． 27 Serial No． 175
水红花子总提取物及各化学部位体外抗肿瘤活性研究
Study on Antitumor Activity in Vitro of Polygonum Orientale L Total Extraction and Its Chemical Fractions
谢周涛 Xie Zhoutao1，田连起 Tian Liangqi2
1．湖北省新华医院，湖北 武汉 430015
Xinhua Hospital of Hubei Province，Wuhan，Hubei，China 430015
2．河南中医学院，河南 郑州 450046
Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou，Henan，China 450046
摘要:目的: 研究水红花子乙醇总提取物( SH1) 及各化学部位对人肺高转移细胞株 95D 增殖的抑制作用，筛选水红花子抗肿
瘤主要活性部位。方法:以人肺高转移细胞株 95D作为实验用细胞株，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比象( MTT) 法对水红
花子总提取物( SH1) 、石油醚部位( SH2) 、乙酸乙酯部位( SH3) 、丙酮部位( SH4) 和甲醇部位( SH5) 进行抗肿瘤活性研究。结
果:水红花子各化学部位对人肺高转移细胞株 95D有明显的抑制作用，水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位的半数抑制浓度分
别为 199． 1 mg·L －1、261． 2 mg·L －1。结论:水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位对人肺高转移细胞株 95D细胞增殖的抑制作
用较强，为水红花子主要活性部位。
Abstract: Objective: To study the inhibitory effects of Polygonum orientale L total extraction ( SH1) and its chemical fractions on the
proliferation of human pulmonary carcinoma cell line 95D，so as to screen the main antitumor activity fraction． Methods: The human pul-
monary carcinoma cell line 95D was adopted as the experimental cell strain，the total extract of Polygonum orientale L( SH1) ，petroleum
ether fraction ( SH2) ，ethyl acetate fraction( SH3) ，acetone fraction( SH4) and methanol fraction( SH5) were carried out for the antitu-
mor activity study by using MTT method． Results: The results showed that every chemical fraction of Polygonum orientale L could obvi-
ously prevent the growth of human pulmonary carcinoma cell line 95D; half inhibition concentration of acetate fraction and acetone frac-
tion part were 199． 1 mg·L －1，261． 2 mg·L －1 respectively． Conclusion: SH3 and SH4 fractions as the main active parts of Polygonum
orientale L have stronger inhibitory function in preventing the proliferation of human pulmonary carcinoma cell line 95D．
关键词:水红花子; 抗肿瘤活性;化学部位; 人肺高转移细胞株 95D
Key words: polygonum orientale L; anti-tumor activity; chemical fraction; human pulmonary carcinoma cell line 95D
中图分类号 CLC number:R273 文献标识码 Document code:A 文章编号 Article ID:1674 － 8999(2012)12 － 1550 － 02
水红花子为蓼科植物红蓼(Polygonum orientale L．)的成
熟果实，具有活血消积、健脾利湿、清热解毒、明目之功，主治
胁腹癥积、水臌、胃烷痛、食少腹胀、火眼、疮肿、瘰疠［1］。但
有关水红花子生物活性的研究却少见报道，本研究采用体外
抗肿瘤筛选，以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT
法)［2］，观察水红花子乙醇总提取物及 4 个化学部位对人肺
高转移细胞株 95D增殖的抑制作用，为深入研究与开发水红
花子药用价值奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 仪器与试剂
ELX-800型酶标分析仪(美国 BIOTEK公司产品) ;CO2 培
养箱(美国 FORMA公司) ;倒置显微镜(德国 Leica) ;四甲基
偶氮唑盐(Sigma公司) ;超净工作台(苏州安泰空气设备厂) ;
96孔板(加拿大 BIOFIL公司) ;二甲基亚砜(博大泰克) ;胎牛
血清、RPMI1640培养基(GIBCO公司) ;顺铂(齐鲁制药，批号:
701003CF，规格 10 mg) ，其余试剂均为国产分析纯。
1． 2 药材
水红花子购于武汉市医药公司，经湖北中医药大学药学
院吴和珍教授鉴定为蓼科植物红蓼的成熟果实。
1． 3 细胞株
人肺高转移细胞株 95D，由华中科技大学同济医学院药
学院实验室传代培养。
1． 4 实验方法
1． 4． 1 总提取物的制备 取 5． 3 kg水红花子，粉碎成 20 目
粗粉，用体积分数 95%乙醇加热回流提取，滤过，继续用体积
分数 75%乙醇加热回流提取 2 次，合并提取液，减压浓缩成
浸膏，得水红花子总提取物(SH1)260 g。
1． 4． 2 水红花子各化学部位的制备 取水红花子总提取物
(SH1)240 g 用硅藻土拌样，自然风干后，装硅胶柱色谱分
离，依次用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脱，分别回收溶
剂，得石油醚部位(SH2)、乙酸乙酯部位(SH3)、丙酮部位
(SH4)和甲醇部位(SH5)。
1． 4． 3 样品溶液的制备 取 SH1、SH2、SH3、SH4 、SH5 浸
膏适量，水浴蒸干后，真空抽干至干粉。分别加 2 倍量 PVP，
无水乙醇适量研成包合物，水浴蒸干并真空抽至干粉，加生
理盐水配 4 个剂量组，浓度(生药)分别为 62． 5 mg·L －1、125
mg·L －1、250 mg·L －1、500 mg·L －1备用。
·0551·
DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2012.12.054
2012 年 12 月 1 日 第 12 期
No． 12 1 Dec． 2012
中 医 学 报
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 27 卷 总第 175 期
Vol． 27 Serial No． 175
1． 4． 4 MTT法检测 将肿瘤细胞接种到 96 孔板，每孔加
入细胞悬液 100 μL，另设细胞对照组，只加完全培养基 200
μL，不加细胞。将培养板置于 37 ℃、体积分数 5% CO2 培养
箱中培养 24 h。吸取培养基，将 SH1、SH2、SH3、SH4、SH5 5
个部位 4 个剂量组，分别每孔加入 100 μL;每组浓度设 3 个
复孔。同时设置空白对照组和顺铂阳性对照组，空白对照组
每孔加入 20 μL的 PBS，阳性对照组则加入 10 mg·L －1的顺
铂 20 μL。随后置于体积分数 5%的 CO2，37 ℃培养箱中连
续培养 48 h，然后每孔中加入 5 g·L －1 MTT 工作液 10 μL，
继续培养 4 h。取出培养板，轻吸去每孔的上清液，加入 100
μL DMSO，振荡 10 min，在酶标仪主波长为 492 nm，参比波长
为 630 nm处测量光密度值(OD 值) ，计算细胞增殖抑制率。
抑制率 =(1 －样品 OD值 /对照组 OD值)× 100%。
1． 5 统计学方法
采用 SPSS 17． 0 统计学软件进行统计分析，计量资料用
均数 ±标准差(珋x ± s)表示，采用 t检验，P ＜ 0． 05 为差异有统
计学意义。
2 结果
水红花子总提取物和各部位对人肺高转移细胞株 95D
细胞增 殖 的 抑 制 作 用 见 表 1 － 表 5。抗 癌 药 顺 铂
(10 mg·L －1)为阳性组，抑制率为 96． 2%。SH2、SH3、SH4
的半数抑制浓度分别为 466． 7 mg·L －1、199． 1 mg·L －1、
261． 2 mg·L －1，可见水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位对
人肺高转移细胞株 95D细胞增殖的抑制作用较强，其中水红
花子乙酸乙酯部位对该肿瘤细胞抑制作用最强。水红花子
总提取物 SH1、SH5 的低浓度组具有一定程度的促进作用，
高浓度组具有抑制作用。
表 1 水红花子总提取物(SH1)对人肺高转移
细胞株 95D增殖的抑制作用 (珋x ± s)
组别 浓度(ρ /mg·L － 1) 光密度值 抑制率(/%)
化学部位 SH1 62． 5 1． 123 ± 0． 015 － 16． 6
125． 0 1． 065 ± 0． 032 － 10． 6
250． 0 0． 954 ± 0． 026 0． 9
500． 0 0． 369 ± 0． 017＊＊ 61． 6
注:与细胞对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
表 2 水红花子石油醚部位(SH2)对人肺高转移
细胞株 95D增殖的抑制作用 (珋x ± s)
组别 浓度(ρ /mg·L － 1) 光密度值 抑制率(/%)
化学部位 SH2 62． 5 0． 934 ± 0． 035 3． 0
125． 0 0． 875 ± 0． 091 9． 1
250． 0 0． 785 ± 0． 043* 18． 5
500． 0 0． 551 ± 0． 010＊＊ 42． 8
注:与细胞对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
表 3 水红花子乙酸乙酯部位(SH3)对人肺高转移
细胞株 95D增殖的抑制作用 (珋x ± s)
组别 浓度(ρ /mg·L － 1) 光密度值 抑制率(/%)
化学部位 SH3 62． 5 0． 913 ± 0． 046 5． 2
125． 0 0． 367 ± 0． 025＊＊ 61． 8
250． 0 0． 525 ± 0． 021＊＊ 45． 5
500． 0 0． 239 ± 0． 031＊＊ 75． 2
注:与细胞对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
表 4 水红花子丙酮部位(SH4)对人肺高转移
细胞株 95D增殖的抑制作用 (珋x ± s)
组别 浓度(ρ /mg·L － 1) 光密度值 抑制率(/%)
化学部位 SH4 62． 5 0． 827 ± 0． 076* 14． 1
125． 0 0． 707 ± 0． 076* 26． 6
250． 0 0． 653 ± 0． 003＊＊ 32． 2
500． 0 0． 252 ± 0． 001＊＊ 73． 8
注:与细胞对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
表 5 水红花子甲醇部位(SH5)对人肺高转移
细胞株 95D增殖的抑制作用 (珋x ± s)
组别 浓度(ρ /mg·L － 1) 光密度值 抑制率(/%)
化学部位 SH5 62． 5 0． 991 ± 0． 228 － 2． 9
125． 0 0． 980 ± 0． 101 － 1． 8
250． 0 0． 619 ± 0． 202* 35． 7
500． 0 0． 612 ± 0． 123* 36． 4
注:与细胞对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01
3 讨论
癌症是当今严重威胁人类健康的常见病、多发病，在各
类死因中，癌症死亡已跃居第二位，仅次于心脑血管疾病。
目前肿瘤的治疗手段不良反应较大，患者的生存质量差，因
此寻找有效、不良反应低的抗癌药物是当务之急。而天然植
物资源具有生物活性高、毒性低、不易产生耐药性等天然优
势，因此，开发探索抗肿瘤药物的植物新资源受到人们的关
注［3］。
本研究采用 MTT法观察水红花子总提取物和各化学部
位对人肺高转移细胞株 95D的抑制作用。结果显示，水红花
子石油醚部位、乙酸乙酯部位和丙酮部位对肿瘤细胞株的生
长均有抑制作用，且呈剂量依赖关系。水红花子乙酸乙酯部
位的化学成分主要为黄酮类化合物［4］。据文献报道，许多黄
酮类化合物都具有抗肿瘤作用［5］，此结果与文献报道相符。
本研究从水红花子各部位中筛选出抗肿瘤有效部位，为下一
步寻找和发现强抗肿瘤活性成分提供研究基础。
参考文献:
［1］国家中医药管理局．中华本草［M］．上海:上海科技出版社，1999:
683．
［2］张均田．现代药理学实验方法［M］．北京:北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社，1998:819．
［3］今国梁．防癌抗癌中药［M］．上海:上海科学技术出版社，2001:2．
［4］谢周涛，胡进． 水红花子乙酸乙酯部位化学成分研究［J］． 中药
材，2009，17(9) :1397 － 1400．
［5］张秀莉，王春明，雷旭东．黄酮类化合物的抗肿瘤活性及其机制研
究进展［J］．甘肃医药，2011，30(4) :205 － 206．
收稿日期:2012 － 08 － 05
作者简介:谢周涛( 1978 － ) ，男，湖北黄冈人，医学硕士，主管
药师，研究方向: 临床药学。Email: tianlianqi@ sina． com． cn;
Tel: 13114364719
编辑:蒋士卿
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