全 文 ：同的辅料炮制后药性的改变与黄连物质基础的改变具
有关联性。因此,研究炮制前后黄连物质基础的变化
规律是阐明黄连药性改变的根本。
到目前为止,未有相关文献对 /炙法0的液体辅料
稀释时加水量有明确规定。为保证实验结果的准确性
和可重复性。本文对黄连炙法的操作工艺中加水量进
行规范。依据黄连饮片吸水率测定结果,量化出其闷
润至/药透汁尽0的程度的加水量,以保证水的加入引
起的变化的一致性。同时本文也设计了 /水炙黄连0
的炮制品种,作为研究不同辅料对黄连药性影响的基
准背景,消除水和加热带入的影响。
样品处理方法直接影响了分析结论。本文为此分
别比较了中药饮片全粉粉末和水提物中主要物质基础
的变化。从表 1可以看出:
全粉粉末样品: 同一样品中, 各峰的变化趋势相
同,变化幅度也基本恒定。顺序依次为:胆黄连 >醋黄
连 >酒黄连 >水黄连 >姜黄连 >生黄连 >炒黄连 >萸
黄连 >盐黄连。除去其中水的影响, 可以看出: 醋、胆
汁、酒能促进生物碱类成分的溶出,而姜汁、吴茱萸汁
和盐水则起阻碍作用。可见黄连用不同的辅料炮制
收稿日期: 2009 - 06 - 01
基金项目:国家重点基础研究发展计划 ( 973计划 ) 资助项目
( 2007CB512601)
作者简介:李和光 ( 1985-) ,男,山东济宁人,硕士研究生, 研究方向:天
然药物化学。
通讯作者:周洪雷 ( 1969-) ,男,教授, 硕士研究生导师,从事中药及天然
药物有效成分提取分离与鉴定工作及中药质量控制研究, E
-m ai:l hong leizhou@ yahoo. com. cn。
后,对生物碱类成分的溶出程度影响不同。
水煎膏样品: 同一样品中, 各成分的变化趋势不
同,不同样品中, 相同成分,变化趋势也不同。
同一炮制品全粉粉末和水煎膏相比较,不论生品
还是各炮制品,各成分在水煎膏中的含量都降低。但
降低的幅度不同。其中, 6号峰几乎检测不到,说明其
几乎不溶于水。
可见,样品用不同的方法处理后,得到的结果也不
同。因此,应该根据研究目的, 选择合理的处理方法。
本文认为:研究黄连的炮制原理选择全粉粉末样品为
宜,能够全面分析炮制引起的各成分的变化。而本课
题研究的是物质基础与药性的相关关系研究, 根据中
医几千年来黄连的临床用药经验,黄连大多入汤药,口
服,因此对黄连的处理方法应该选择水煎煮,同时考虑
到样品存放的方便, 综合考虑, 本文选择水煎煮后浓
缩, 80e 以下烘干处理。
参考文献
[ 1 ] 张志梅,马仲金.黄连炮制与应用 [ J ].新中医, 2004, 36 ( 7) : 72.
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建科学技术出版社, 1988: 417.
[6 ] 浙江省卫生厅.浙江省中药炮制规范 [M ].杭州:浙江科学技术出
版社, 1986: 109.
高效毛细管电泳法测定白胡椒中胡椒碱的含量
李和光,周洪雷,蒋海强,杜昊忱,李 飞
(山东中医药大学,山东 济南 250355)
摘 要: 目的:测定中药白胡椒中胡椒碱的含量。方法:采用高效毛细管电泳法, 电泳条件为石英毛细管柱 ( 50Lm @
90cm, 实际长度 811 5cm ), 运行缓冲液为 01 02mo l /L Na2HPO 4: 01 02mo l /L NaH2PO 4= 95: 5( 16e 时 pH = 81 6),分离电压为
28kV, 压力进样 30mbar@ 8s,温度为 25e , 检测波长为 343nm。结果: 胡椒碱在 01 05 ~ 0130mg /mL范围内呈良好的线性
关系 ( r= 019995), 平均回收率分别为 991 82% , 99195% , 1001 20% ; RSD分别为 0130% , 0169% , 0129% ( n= 3)。结论:高
效毛细管电泳法可用于测定白胡椒中胡椒碱的含量。
关键词: 白胡椒;胡椒碱; 高效毛细管电泳
中图分类号: R284. 1 文献标识码: B 文章编号: 1000 - 1719( 2010) 01 -0134 - 02
Determ ination ofP iperine in F ructus p iperis byH igh P er formance Capillary E lectrophoresis
LI He-guang, ZHOU Hong-lei, J IANG Hai-q iang, DU Hao-chen, LI Fei
(Shandong University o f TCM , J inan 250355, Shandong, China )
Abstrac t: Ob jective: To determ ine the con tent o f P iperine in F ruc tus p iperis. M ethods: Apply the m ethods of HPCE, and the
best condition w as using the qua rtz capillary tube ( 50Lm @ 90cm, practica l length is 811 5cm ), 01 02mo l /L Na
2
HPO
4
: 01 02mo l /L
NaH
2
PO
4
= 95: 5 ( pH = 81 6 a t 16e ) bu ffer, pre ssure in jec tion 30m ba r@ 8s, at a constan t vo ltage o f 28kV and temperature a t
25e . It w as de tected on 343nm. Results: P ipe rine had a good linea rity w ithin 0105~ 0130m g /mL ( r= 01 9995), and the average
recovery w e re 991 82% , 991 95% , 1001 20% w ith RSD 0130% , 01 69% , 01 29% ( n = 3). Conclusion: This m e thod is feasible fo r
dete rm ina tion o f P ipe rine in F ruc tus piperis.
K ey words: fruc tus pipe ris; p iperine; H PCE
#134# 辽宁中医杂志 2010年第 37卷第 1期 DOI：10.13192/j.ljtcm.2010.01.139.lihg.060
白胡椒为常用温中散寒的中药, 主治胃寒呕吐、腹
泻等。其主要成分为胡椒碱。药材中胡椒碱的含量测
定有高效液相色谱法 [1], 一阶导数差示脉冲极谱法 [ 2],
紫外扫描法 [3] ,比色法 [4 ],紫外分光光度法 [5 ]等。目前
未见有高效毛细管电泳法的报道, 本文采用高效毛细
管电泳法测定白胡椒中胡椒碱的含量。
1 仪器与试药
Ag ilent高效毛细管电泳仪,石英毛细管 ( 50Lm @
90cm,实际长度 811 5cm, Ag ilent公司 ), KQ - 250E型
超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 )。
胡椒碱对照品 (供含量测定用, 批号为 0775 -
200203), 购自中国药品生物制品鉴定所;白胡椒 F ruc-
tus pipe ris药材购自海南省文昌县, 本校鉴定教研室李
峰教授鉴定为正品。Na2HPO4、NaH2PO4、无水乙醇等
均为国产分析纯。
2 方法与结果
21 1 分离条件
分离电压为 28kV, 极性为从正极到负极; 压力进
样 30mba r @ 8s; 检测波长 343nm; 运行缓冲液为
01 02mol /L N a2HPO 4: 01 02mo l /L N aH2 PO4 = 95: 5( 16e
时 pH= 81 6) ;温度为 25e 。所用溶液均经 01 45Lm纤
维树脂膜过滤。在上述条件下, 白胡椒中胡椒碱的迁
移时间约为 10m in,与其他成分分离较好,见图 1。
图 1 胡椒碱对照品 ( A)、白胡椒药材 ( B )的 HPCE图
21 2 溶液制备
21 21 1 胡椒碱对照品溶液 精密称取胡椒碱对照品
约 10mg, 于 10mL棕色容量瓶中,无水乙醇溶解并定
容至刻度, 然后精密量取 01 25、01 5、01 75、1、11 25、
11 5mL分别至 5mL棕色容量瓶中,无水乙醇定容至刻
度,即得。
21 21 2 白胡椒溶液 药材样品 60e 干燥后粉碎成细
粉, 过 80目筛。精密称取白胡椒粉末 015g,置 100mL棕
色量瓶中,加无水乙醇约 80mL,超声提取 40m in,放置室
温,加无水乙醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
21 3 线性关系考察
分别取 01 05、01 10、0115、01 20、01 25、0130mg /mL
的胡椒碱对照品溶液, 按 21 1项下所述电泳条件分别
进样测定, 以胡椒碱浓度 ( mg /mL)为横坐标, 胡椒碱
峰面积为纵坐标,回归得方程: Y = 4481 97X + 141 28, r
= 01 9995。表明在 01 05 ~ 01 30mg /mL范围内线性关
系良好。
21 4 精密度试验
取 01 15mg /mL的胡椒碱对照品溶液, 按 211项下
所述电泳条件连续进样 6次,记录色谱图,分别计算胡
椒碱的峰面积, RSD为 0165%,表明仪器精密度良好。
21 5 重现性试验
同一白胡椒样品按 21 21 2项下制成 6份, 按 21 1
项下所述电泳条件进样分析, 计算峰面积, RSD为
11 21%。
21 6 稳定性试验
取白胡椒样品溶液,分别在 0、2、4、6、8、12h进样,
测定胡椒碱峰面积, RSD= 21 10% ( n = 6), 表明样品在
4e 棕色量瓶中 12h内稳定。
21 7 加样回收试验
取 9份已测胡椒碱含量的白胡椒样品 01 05g, 分
别加入胡椒碱对照品 115mg, 119mg, 21 2mg, 置 10mL
棕色量瓶中,加入无水乙醇 8mL,按 21 21 2项下制成溶
液,按 211项下色谱条件进样, 测定其回收率 ( n = 3),
见表 1。
表 1 加样回收试验结果
序号 称样量 ( g)
胡椒碱含
量 (m g)
加入量
(m g)
测定量
( mg)
回收率
(% )
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1 0. 0501 1. 9183 1. 50 3. 4112 99. 53
2 0. 0500 1. 9150 1. 51 3. 4270 100. 13 99. 82 0. 30
3 0. 0502 1. 9227 1. 50 3. 4198 99. 81
4 0. 0500 1. 9150 1. 91 3. 8090 99. 16
5 0. 0499 1. 9112 1. 90 3. 8195 100. 44 99. 95 0. 69
6 0. 0498 1. 9073 1. 90 3. 8122 100. 26
7 0. 0499 1. 9112 2. 19 4. 1105 100. 42
8 0. 0502 1. 9227 2. 20 4. 1298 100. 32 100. 20 0. 29
9 0. 0501 1. 9183 2. 20 4. 1157 99. 88
平均回收率分别为 991 82% , 991 95% , 100120%,
RSD分别为 01 30%, 0169%, 01 29% , 表明回收率良
好。
21 8 样品测定
将 21 21 2项下样品溶液按 21 1项下色谱条件进
样, 白胡椒中胡椒碱的峰面积为 10018, 含量为
31 83%。
3 讨 论
药典 [1 ] 中胡椒碱的含量测定的检测波长为
343nm,故本次试验也选择 343nm为检测波长。本次
试验结果表明白胡椒中胡椒碱的含量大于 3% , 符合
药典规定。
本次试验考查了硼砂 -甲醇 (醋酸调 pH = 710 )、
硼酸 ( pH = 51 8)和磷酸盐缓冲体系 ( pH = 81 6) 3种不
同缓冲液,发现后者分析时间短,峰形尖锐。还考查了
pH为 61 2、710、81 6 3种不同的磷酸盐缓冲液, 发现
pH为 81 6的磷酸缓冲液能使胡椒碱峰达到基线分离。
用 HPLC法测定生物碱时, 生物碱中的 - N -基
可与填料上的残余 -S i -OH基结合而造成峰拖尾, 使
分离度变差, 而且还污染色谱柱。HPCE法分离效率
高,以毛细管为通道, 易清洗,不存在污染问题,而且进
样体积小,一般为纳升级, 使用样本量、化学试剂少,降
低分析成本。
参考文献
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#135# 辽宁中医杂志 2010年第 37卷第 1期