全 文 ：第 巧卷
1993 年
第 2 期
5 月
吉 林 农 业 大 学 学 报
J ou r
: 1滋 f oJ l i臼、 人即沁 ul tu r吐 U r伽 e t i oy
V LO 15
N 协y
卜沁. 2
1993
红参中田七氨酸的分离及其生物活性的研究
郑毅男 松浦幸永 . 刘大有二 张东明 关谷敬三 “ ` 奥田拓道 ’
( 吉林农业 大学中药材学院 长春 忆0 181 )
摘 要 红参粉末中发现含有田七氨酸(卜N -以目- oL a,卜 dhanj
n叩 r o p j o川 c ac jd) 又名三七素 ,该
物质是应用离子交换凝胶色谱柱 ( CM一 , ph a d cx c一 2 5)和快速蛋白质液相色谱柱 ( P CL
oM、 Q )分离得到的 。 我们检查了田七氨酸对豚鼠主动脉收缩作用的影响 ,在没有组胺或肾上
腺素存在的条件下 ,既无收缩作用也无松弛作用 ,它能增益组胺诱导豚鼠主动脉的收缩 ;但对
于肾上腺素却无作用。 此外 ,田七氨酸通过肾上腺素、 A D p 凝血酶和胶原 ,均无诱导血小板聚
集的作用 。 田七氨酸对于血管紧张索转换酶也无阻抑作用 。
关键词 人参 田七氨酸 组胺 豚鼠 H E p SE
人参的应用在我国已有数千年的历史川 。 现代科学研 究表明 , 人参具有 多种生理活
性 ,诸如 ,抗应激 、促进新陈代谢 、 抗疲劳 、 兴奋中枢神经 、 刺激内分泌 、抗癌 、 治疗糖尿病 、
降低血压等作用 23[ 。
近年关于人参对动物体内的作用机制进行了广泛的研究 ,但大多数研究仅限于人参
皂 贰〔卜 SJ 。 最近从人参中分离得到了一些水溶性的非皂试类活性物质 ,如酸性多糖闭能够
抑制肉瘤一 180 小鼠腹水中癌毒素 L 对脂肪的分解作用 。 红参中还有腺啄吟核昔和焦谷
氨酸 ,可以抑制 肾上腺素诱导的脂肪分解 ,促进胰岛素的脂肪合成作用 73[ 。
小管卓夫 83[ 198 飞年从云南产的三七人参中分离得 到了 田七氨酸 , 证 明具有止血作
用 , 我们从红参中也分离得到了田七氨酸 。 本文从红参粉末中分离得到 了田七氨酸 ,并发
现其新的生理活性 。
1 材料和方法
材料 : 红参 ( aP lat x 娜。 sen g c . A . 五企 ye r )六年生 ,盐酸组氨旧本大阪 w a k o pur e c h em ical
nI d u s tr i es )
, 去甲肾上腺素 (东京 , s a n k y o co . ) , e M一 s e p ri a d e x e 一 2 5 ( P h a r xan e ia , s w e d e n ) 。
化学分析 : 纸层析滤纸 ( A d v -an t e e Z) ,展 开剂 : B u o H / A e o H / H Zo / E t o H ( 4 : 1 : 2 : 1 )
显 色剂 : 命三 酮 。 田 七 氨 酸 fR 值 0 . 20 。 F P L c 应 用 离子 交换 柱 ( M on o Q . H R S5/
p l、 a r m a e ia )
, 洗脱 物 以 2 1 4mn 检 测 。 梯 度洗 脱 , N H ; H e o : , 0
.
01M ~ 0
.
35M ; ’ H一 N M R
( 2 7 0M H :
,
J e o z G s x一 2 7 0光谱仪 , D Z o ) ,化学位移 6p p m , 内标准 H D O ( 6 , 4 . 70 ) 。
动物 : 雄性 H尽r t la y 豚鼠 ( 3 0 0一 3 5 09 ) ,雄性 w is : ar 一 K i n g 大鼠 ( 1 5 0一 2 0 08 ) 。
日本爱袭大学医学部第二生化教研室 , · 长春中医学院 二 ` 日本四国农业试验场
收稿日期 : 19 9 2一 0 ,一 2 1
第 5 1卷 第 2期 郑毅男等 :红参中田七氨酸的分离及其生物活性的研究
动脉收缩的测定 :取雄性豚 鼠胸部主动脉去除附着脂肪及结缔组织 ,制成长 15~ ,宽 1 . 5~ 2~ 的条 (环切 )
,于充气的泰罗德溶液中测定张力强度 。 该溶液保持 37 ℃ , 充气
使生成细胞 。 动脉条的机械反应用等张换能器 ( 日本 K od en S B - IT )记录 。 该动脉条预先
用 1g 张力平衡 h2 ,然后用 1 0一了g /m l 的去甲肾上腺素或 1 oe7 s/ 而 的组氨直至收缩反应达到
一个平衡水平为止 。 田七氨酸的溶液在应用去 甲肾上腺素或组氨 l m in 之前注入溶液中 。
血小板聚集试验 : 取健康人静脉血置试管中 , 配成含有 1门 O体积的 3 . 8%的柠檬酸
钠溶液 。 血液以 1 SOx s 离心 I Om in ,得到富含血小板的血浆 (P R )P 。 观察田七氨酸对血小
板聚集的作用 。 5 0时 田 七氨酸溶液溶解在不含钙离子的泰罗德缓冲液中 , PH 了. 4 ,含有
5l l J吐的 H E p ES , 加人 4 5 0、 lp R P , 3 7℃ , 1 0 0 0r /m ln 述续搅拌 , 同时测定血小板聚集 。 通过加
入各种刺激剂 ,诱导 田七氨酸对血小板的聚集作用 , 40 0时 P R P 加入 50 以 田七氨酸或缓冲
液 (对照 ) , 3m in 后加入同样体积的刺激剂溶液 。 刺激剂如下 : 肾上腺素 (0 . 05林M ) ; A D P (0 .
Zo M )
, 凝血酶 (0 . OI U /m l) 和胶原 (0 . 02 0 9 /m l ) 。 各种刺激剂的浓度均低于血小板凝聚的阂
值 , 在这些浓度的条件下观察透光率 。
阻碍 A C E 活性的测定 : A C E 是从大鼠 (按照 T a ka da 等图的方法 )中分离出来的 ,溶解
在 1 00m M 含有 30 0m M N a C I (p B S , PH S. 弓)的磷酸缓冲液中 。 2 . sm M 马尿酸一组氨酸一亮
氨酸 ( ( 0 . 1 sm l )和 A C E ( 0 . l m l ; A cE 活性 : 6 . 38U / m g 蛋白质 , I U 一 1“ M 马尿酸 /m in / m l 反
应 混合物 )的混合物 3 7℃孵化 30m i n ,反应物最终体积是 0 . 3 5m一。 然后 加入 I N H cl ( 0 ,
25m l) 使反应终止 。 反应物用乙酸 乙酷 (2 . Om l) 萃取 , 乙酸乙醋层 (1 . Om l) 蒸发 ,得残渣溶解
在水中 ( 2 . o m l) ,然后于紫外分光光度计 2 28 n m 处测定游离马尿酸的量 。
(艺à一O口,工之
弓32100 02 结 果
取红参粉末 1005 与 1L 甲醇混合 , 室温
提取 24 h ,然后 100 00 x s 离心 3 0m in , 残渣用
I L 蒸馏水萃取 2 次 ,室温放置 24 h , 10 0 00 X s
离心 3 0m in ,过滤 , 滤液真空减压 浓缩 , 浓缩
液用等体积的水饱和正丁醇萃取 3 次 ,水溶
部分减压蒸发 至干 , 溶解 在少量水中 , 应用
C M 一 S e p l` a d e x c 一 2 5 (柱 , 2 . 2 X 4 0e m ) ,蒸馏
水洗脱 ,洗脱物用纸层析检验 。 将含有田七氨
酸的组分再上离子交换 M on o Q F P L c , 收集
第 23一 23 号试管 ,减压蒸发至干得 和m g ,如
图 1 。
该化合物紫外最大吸收峰在 2 0弘m ;苟
落二“翻栩米
0 TO 2 0 3 0 4 0
试管分码
图 1 红参中田七氨酸的快速
蛋白质层析图谱 ( F p L C )
检 测 : Uv , 214 ,、 m ; 柱 : M o : 、 o Q ; 移 动相 : 0. 01M
N H祖co 。一 .0 SM N H ; H C0 3 ;流速 : 1叹 n/ 血 ,每耐分
取 。 田七氨酸部分为第 23 一 29 号试管 (通过纸层折
检测 ) ,详见材料与方法
三酮反应呈紫色 。 IH 一 N加IR ( D Zo , 27 0 MH z ) , 6 : 3 . 83 ( IH , d , J = 3 . 66 , 7 . 94地 ) , 弓. 72 ( I H ,
“ , J二 3 . 6 6 , 1 4 . 6 4H 乙 ) 和 3 . 5 6 ( I H , d d , J = 7 . 94 , 1 4 . 6 4ZH ) ,这些光谱数据与田七氨酸标准
品相同 。
田七氨酸促进组胺诱导豚鼠主动脉收缩 ,但是对于去甲肾上腺素却无此种作用 ,在无
组氨或去甲肾上腺素的条件下 , 田七氨酸既无收缩也 无松弛作用 (表 1 ) , 田七氨酸对于
吉 林 农 业 大 学 学 报 1 9 9 3年
AE C的活性没有阻抑作用 (图 2), 当田七氨酸的浓度达到 2 00 , s/ m l 时 ,对由于 肾上腺素 、
A
DP 凝血酶和胶原引起的血小板聚集也无作用 (图 3) 。 进而实验表明 , 田七氨酸对于血
小板花生四烯酸代谢也无任何影响 。
表 1 田七氨酸对组胺和去甲肾上腺素
诱导豚鼠主动脉收缩作用的影响
激 动 剂 田七氦酸
( p岁` 111 )
对 照
(% )
组 胺
( 0
.
5 4 pM )
0SOǎ次è刘她巴咬
5 00
1248079一
去甲肾上腺素
( 0
.
5 9林M )
5 浓留 m g / R , 1 0
0110510
0
1 0 0
图 2 田七氨酸对血管紧张素转换酶的作用
对照
(次à哥采用
田七氮酸
洲只(次à并米用
图 3 田七氮酸对血小板聚集的作用
1 缓冲液 2 田七氨酸 3 胶凉 。 胶原 .0 0 2 0 9 /时 b A D p O· 2, M
e 肾上腺素 0 . 0导 M d 凝血酶 0 . 001 u /成 。 凝血酶 0. 01 u /叹
3 讨 论
田七氨酸最初是由 R ao 等人 l[ “〕从山黛豆属植物 ( L at h yr su s at iv su ) 中分离出来的 ,继而
第 1 5卷 第 2期 郑毅男等 :红参中田七氨酸的分离及其生物活性的研究
19 81 年小管卓夫又从三七的根中得到 , 1389年李向高 、郑毅男等从人参 、西洋参根中分离
得到 田七氨酸 。 本篇首次从红参中 , 应用 C M 一 se p h ad ex C一 25 和 M on o Q 色谱分离得到 田
七氨酸 。
本文着重研究了田七氨酸的生物活性 。 田七氨酸对于 A cE 的活性没有阻抑作用 。 据
报道 田七氨酸是三七根中的止血成分 ,但该物质对于由肾上腺素 、 A D P 、凝血酶或胶原对
血小板聚集均无促进作用 ,而且对血小板 内花生四烯酸代谢亦无任何影响 。 因此推测三七
中可能有其他化合物包括田七氨酸的降解产物而引起止血作用 。
在本实验中 , 我们发现田七氨酸能促进组胺诱导豚鼠主动脉收缩 ,但是对于去甲肾上
腺素却无作用 。 众所周知 ,组胺与肾上腺素由于平滑肌细胞中钙离子浓度升高 ,均能使主
动脉收缩 。 因此 , 田七氨酸对组胺诱导主动脉收缩的促进作用不能用一般的钙离子运动机
制的调节来解释 ,而一定是由于组胺在主动脉平滑肌中的某些特殊的作用点变化所至 ,关
于 田七氨酸促进作用的机理正在研究中 。
参 考 文 献
1 翻 iot H , N 治垃 y a am N ct 公 . Pcor . s t匕 Ietr ll a t . G u l s e n s sy : 一I P. ,全。 u l , 1 988 , 92~ 98
2 yH
o
W B
. “
K O r ca
n G公留 n吕, , T b c oK r e n G u 、 s e n g R创沉旧 cr h b l at i t u t e , S刀 u l , 1 978 . 6
3 o uar H an
d H协 i S . P ocr
.
I n ter na t
. 衍m P . , T加 o n t iar R昭 . L 、st . 优上元. of M on or o ly , R ok 门 97 4 , 23一 32
4 1恤k a以 K . P ocr
.
I n t cr na t
. 衍m p . , T加 仓一 t时 R eS . 1 l l s t . C吐f淞 of M o n o囚 ly , OR k . 197 4 , 119~ 127
5 5垃 ba at S . R 仪 . b 、 r e nr at . s卿 p . ,丁b O O 一l t r ia R cs . 加 t . 以 6伪 of M O加因 ly , R O k . 1 97 4 , 6 9~ 76
6 1才出 S D 改 公 . J . M ed . P加犷m . 5 .刃 fo r W a ka n e y a k u 1989 , 6 : 14 1~ 1 4B
7 aT
k欧 u T 耽 时 . P扭 I、at M以五aC 1990 , 5 6 : 27~ 30
8 KOS u助 T d 吐 . Y ak u , 比 u 乙 ,” 址门 98 1 . 107 ( 7 ) : 629一 632
9 T ak a da y et 吐 . 伪m卜 B ioc h e m . Pby s以 . 1 982 , 73B : 189一 194
10 R a o S L N et at
.
B IOC 加 m ist 叮门 964 , 3 : 432~ 436
11 1吐欧 a w a T et ia . M aet b』臼m a dn D场叨 s e , 19 87 , 2 4 : 86 7一 877
V过. 15 No. 2E NG LI SH A叹引飞峨C 田 1 01
S tud yOnT l l eM e is os iO fEM CP o t atoB yS qu s a hT e
c hn iu qe
W an gP jn g
e tl a
·
B ys qu 肠全一 tec 全一n q iu e , t l一e m e i os is e e l ls w i th e h roln o so m e d is ep 巧 ion P I一哪 w e r e o加 e r v ed in
E M C ( E , z zb r y o S a e M
o t l一er e e l l ) o f OP at t o
·
T h e i d e a l le n s tl一 o f OP ta Ot s yt le w韶 2 一 3 n l幻n . T I、 e
yt eP o f l
i l e i u 、 i、 w公 t l l e d ay d 、 f o r `时 d a t t e lo PI以 e 1. I t w as s u g se s tde t alt t it 、 e s q u as ll et e恤 iq u e
h as a 1118 1一 ` Pe e d 。 立l d 15 e o v e zi ie xl t a zi d P r a e ti ae l n l e th o d f o r o b s e r v in s m e i o s is o f EM C in P lan tS
w i ht op ly v a lu e
·
K e y W
o r d s : s q u a s全1 t e e l一n i q u e , Po r a ro , n l e io s i s , E M C
S t u d i es O n D e n e i e h i n e I n R e d G i n s e n g
Z ll e n g Y in a n e t a l
.
邻
I t w 洲 f o u 一l d t li a t R ed G in se 一18 op w d e r e o n at in d e n e ie l飞in e (日一 N 一 o x a lo 一 L一 a ,日一 i a n i i n o -
P iu
J飞ie a e id ) w lz ie l一 w as iso la t e d b y s u e e e 、 s i v e e o l u n l e c l、 r o n 飞a t o 3 r a IP 一ie s 0 1飞 C M 一 s e Ph a d e x C一 2 5
aJ l d h l u j l o Q
.
W e 以 a n z il l e d t tl e e f f e e t o f d e n e ie l飞in e o n t h e e o n t r a e t i明 o f g u i n e a P ig a o r ta . A I-
t l一u u g ! 1 i t d id n o t in d u c e e o n t r a e t io n o r r e la x a t io n i n th e a b se n e e o f ll is at n i i n o r n o r e P i n e P lir i en
,
i t
e一飞11a r z e e d l一is t a l zl i一飞e 一 i 一ld t一e e d e u 一飞 t r a e t io n b u t n o t a 孟l o r e P in e P!一r i n e一 i n d u e e d oJ l e . O n t h e o t l一e r
Il a n d
,
it l一a d 1 10 e f f e e t o 一上 P la te l e t a g g r e s a t io n in d u 亡 ed b y e Pi n e P l zr in e
,
A D P
,
t ll r姗 b in a e o ll -a
S e : 1
.
1〔 a l、 0 d i d 一l u t i ;飞釜l i b i t t h e a n g i o te n s i o n e o n v e r t i n s e n z yl : e ( A C E )
.
K e y W o r d s
: Pa 孟飞a x 8 111 ` e n吕 , d e n e ie h i xl e
S t u d i e s O n C l一e , x垃e al C o m P o n e n st O f 形 i o d i ol a S a e h ia i e sn is
L i X i a n g g a o e t a l
.
T w o n 、 a i l、 a e t i v e e o l l: l>u : : e n t s , Po w d e r 1 a dn e r y s t a l 11 w e r e is o la t e d f r o n i r o o t a dn r li i切m e
u
f R tl
u d沁 la 旅 e ! l a l ie n s i s . A e e o r d in g ot P lzy s i e s a n d c l一e n飞is t r y a an l y s i s a n d I R , H一 N 卜幻又 s Pe e t r a
a P P r a i跟 1 , Po w cfe r 1 w as s a l id r o s i d e a n d e r y s ta l 11 w as B一 s i ot s t e r o l .
K e y W o
r d s : R l
l浏 i o la s a c ! za l主e l巧 15 , sa l id r o s id e