全 文 ：［收稿日期］ 20150505(011)
［基金项目］ 国家自然科学基金地区基金项目(81260646) ;贵州省科学技术基金项目(黔科合 J字［2012］2066 号) ;贵州省中医药管理
局中医药、民族医药科学技术研究课题(QZYY2011-58) ;贵阳中医学院博士基金项目(ZYY2011005)
［第一作者］ 吴玉梅，在读硕士，从事中药、民族药药物新制剂及新剂型研究，Tel:15285135654，E-mail:335910887@ qq． com
［通讯作者］ * 陈晓兰，博士，教授，从事中药、民族药药物新制剂及新剂型研究，Tel:0851-5652704，E-mail:chenxiaolan76@ 126. com
雪上一枝蒿总生物碱微乳的研制与质量评价
吴玉梅1，陈晓兰1* ，林亚平2，刘文1，唐红艳1，戴雅洁1
(1. 贵阳中医学院 药学院，贵阳 550002;2. 贵州省食品药品监督管理局，贵阳 550003)
［摘要］ 目的:制备质量稳定的雪上一枝蒿总生物碱微乳，为该制剂的深入研究与开发提供参考。方法:选用不同的油
相、乳化剂及助乳化剂，采用伪三元相图法进行雪上一枝蒿总碱微乳的处方筛选与制备，考察该制剂的稳定性及理化性质。
采用 HPLC测定雪上一枝蒿甲素的含量，流动相乙腈-pH 7. 3 磷酸盐缓冲溶液(20∶ 80) ，检测波长 199 nm。结果:雪上一枝蒿
总生物碱微乳最佳配比为雪上一枝蒿总生物碱、肉豆蔻酸异丙酯、聚氧乙烯 35 蓖麻油、无水乙醇、水质量分数分别为 2%，
3. 3%，19. 8%，9. 9%，65. 0%。载药微乳澄清透明，呈圆球形，粒径均在 10 ～ 100 nm。于 4，25 ℃下放置 6 个月内质量稳定。
雪上一枝蒿甲素的质量分数 2. 28 mg·g －1。结论:优化的雪上一枝蒿总生物碱微乳处方达到了预期的要求，为该制剂的后期
研究提供实验基础。
［关键词］ 雪上一枝蒿;总生物碱;微乳;粒径;伪三元相图;雪上一枝蒿甲素
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)23-0007-05
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015230007
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20151022． 1422． 050． html
［网络出版时间］ 2015-10-22 14:22
Preparation and Quality Evaluation of Shortstalk Monkshood Ｒoot Total Alkaloids Microemulsion
WU Yu-mei1，CHEN Xiao-lan1* ，LIN Ya-ping2，LIU Wen1，TANG Hong-yan1，DAI Ya-jie1 (1. School of
Pharmacy，Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China;2. Food and Drug
Administration of Guizhou Province，Guiyang 550003，China)
［Abstract］ Objective:To prepare shortstalk monkshood root total alkaloids microemulsion． Method:
Formulation of shortstalk monkshood root total alkaloids microemulsion was selected and prepared by pseudo-ternary
phase diagram method with different oil phase，emulsifier and co-emulsifier，and preliminarily study its stability
and physicochemical properties． HPLC was adopted to determine the content of bullatine A． Ｒesult:The best
prescription was total alkaloids in Aconitum brachypodum of 2%，isopropyl myristate of 3. 3%，polyoxylethylene
castor oil ether 35 of 19. 8%，absolute ethanol of 9. 9%，water of 65. 0% ． The microemulsion was clear，
transparent and spherical with particle size among 10-100 nm． Storage at 4 ℃ and 25 ℃ for six months is stable．
The content of bullatine A was 2. 28 mg·g －1 ． Conclusion:The optimized microemulsion formulation can achieve
expected requirements． It can lay a foundation for further study of shortstalk monkshood root total alkaloids
microemulsion．
［Key words］ Aconitum brachypodum; total alkaloids;microemulsion;particle size;pseudo-ternary
phase diagram;bullatine A
雪上一枝蒿性温，味苦、辛，有大毒，功效祛风除
湿、通利关节、消肿止痛。其生物碱类成分具有活
血、镇痛、抗炎等药理作用［1-2］。但雪上一枝蒿的治
疗量与中毒量十分接近，使用不当可能导致中毒、心
律失常乃至休克等［3］。毒性中药采用经皮给药是
中医外治法的一大特色，较其他给药途径，在治疗痛
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风、类风湿性关节炎和风湿关节炎等疾病方面更具
显著的疗效优势。雪上一枝蒿主要有效成分为生物
碱类，经皮给药时，该类成分的透皮性能较差，处方
中常加入大量促渗剂以增加其透过量，但可能导致
剂量控制不准确及中毒等副作用。微乳作为载体透
皮给药，与其他剂型相比具有独特优势，能提高药物
的透皮能力，可在角质层和真皮形成药物储库，明显
缓释药物，获得长时间高剂量的释放［4］，从而提高
药物的生物利用度，达到增效减毒的目的。本实验
研究雪上一枝蒿总生物碱微乳的处方工艺并对其进
行质量评价，为该制剂的深入研究与开发提供参考。
1 材料
1260 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ，
JEM-2100 型透射电子显微镜(日本电子株式会社) ，
Zetasizer Nano ZS型激光粒度测定仪(英国马尔文仪
器有限公司) ，AE /240 型电子分析天平［梅特勒-托
利多仪器(上海)有限公司］。雪上一枝蒿甲素对照
品(纯度≥98%，中国食品药品检定研究院，批号
110895-200404) ，雪上一枝蒿总生物碱(自制，纯度
60%) ，肉豆蔻酸异丙酯(IPM，Alfa Aesar 公司) ，辛
酸癸酸三甘油酯(GTCC，英国禾大公司) ，聚山梨酯
80(tween-80，成都市科龙化工试剂厂) ，甲醇、乙腈为
色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。
聚氧乙烯 35 蓖麻油(EL35) ，聚氧乙烯氢化蓖麻油
(ＲH40)和泊洛沙姆 188(P188)均购于德国 BASF 公
司。雪上一枝蒿药材购自昆明市宇斯药业有限责任
公司，经贵阳中医学院王祥培教授鉴定为毛茛科植物
短柄乌头 Aconitum brachypodum的干燥块根。
2 方法与结果
2. 1 油相的选择
2. 1. 1 油相乳化能力考察 取玉米油，IPM，GTCC
各 0. 6 g，置于 5 mL 离心管中，以 tween-80 为乳化
剂，固定油相与乳化剂比例为 6∶ 4，采用高速分散器
于 8 000 r·min －1搅拌，使其充分混匀，加入水 2 mL，
高速搅拌乳化 2 min，得乳白均一乳剂。取制备好的
乳剂在 3 000 r·min －1离心 20 min，观察分层现象。
采用紫外分光光度法考察乳剂的稳定性，按 KE =
(A0 － A)/A0 测定乳剂的物理稳定性参数(KE)。式
中 A0 为原乳剂的稀释液在某一波长的吸光度，A 为
原乳剂离心后离心管下层液经同倍稀释后在同一波
长的吸光度。在相同条件下，KE 越小，乳剂越稳定，
检测波长 550 nm。结果玉米油和 GTCC 制备的乳
剂经离心后均发生明显分层，以合成油相 IPM 制备
的乳剂较稳定;采用玉米油，GTCC 及 IPM制备的乳
剂的 KE 分别为 17. 9，10. 1，8. 9。表明由 GTCC 和
IPM制备的乳液稳定性更好。
2. 1. 2 不同油相对总生物碱溶解度的测定 分别
称取过量雪上一枝蒿总生物碱于西林瓶中，分别加
入 IPM，GTCC 各 1 mL，于磁力搅拌器上室温搅拌
12 h，使溶解达平衡后，于 1 万 r·min －1离心10 min，
取上清液，适当稀释后经 0. 45 μm 微孔滤膜滤过，
取续滤液，测定雪上一枝蒿甲素的含量。结果显示
总生物碱在 IPM 和 GTCC 中的平衡溶解度分别为
2. 40，2. 45 g·L －1，两者平衡溶解度相当。结合
2. 1. 1 项下乳化能力考察结果，故选择 IPM 作为微
乳的油相。
2. 2 乳化剂的选择
2. 2. 1 乳化剂稳定性考察 选择 IPM 为油相，以
EL35，ＲH40，P188 为乳化剂，固定油相与乳化剂质
量比 6∶ 4，乳化剂与油相进行混合后，恒温 37 ℃，
350 r·min －1搅拌，加 100 倍量水，从加水即刻计时，
分别于 30，60，90，120，180，240 s取样 2 mL，采用紫
外分光光度法在 550 nm 处测定吸光度 A，考察乳化
剂的乳化性能，结果发现 P188会形成油水混合物，几
乎不能乳化，不能测定 A;EL35，ＲH40 能形成乳白均
一乳剂，以 EL35的 A最小，推测其形成的乳剂粒径最
小，故选择这 2种乳化剂进行微乳的相图研究。
2. 2. 2 伪三元相图筛选乳化剂［5］ 精密称取
ＲH40，EL35 分别作为乳化剂，乙醇作为助乳化剂，
乳化剂和助乳化剂按质量比 2∶ 1制备混合乳化剂，2
种混合乳化剂分别与 IPM 按质量比 9∶ 1，8∶ 2，7∶ 3，
6∶ 4，5∶ 5，4∶ 6，3∶ 7，2∶ 8，1∶ 9的比例精确称量，置于西
林瓶中，25 ℃恒温水浴，于 300 r·min －1磁力搅拌混
合均匀，加水滴定，观察液体的形态变化，同时以
600 nm入射光照射，观察是否有丁达尔现象，记录
体系的临界变化点。计算临界变化点时每个组分在
微乳体系中的质量分数，用等边三角形的 1 个边表
示乳化剂和助乳化剂的混合物(S) ，其余 2 个边分
别表示油相和水相，借助 Origin 7. 5 软件绘制微乳
的伪三元相图，确定 O /W 型微乳区，见图 1。结果
显示 ＲH40 所形成的微乳区最大，但 ＲH40 在温度
较低时不易流动，且结合其稳定性考察项目的结果，
故选用 EL35 为乳化剂。
2. 3 助乳化剂的选择 精密称取 EL35 作为乳化
剂，考察不同助表面活性剂(无水乙醇，1，2-丙二醇，
异丙醇，丙三醇，乙醇与 1，2 丙二醇比例 1 ∶ 1)对微
乳体系的影响，固定乳化剂与助乳化剂质量比 2∶ 1，
按照2. 2. 2项下水滴定法操作，滴定过程中不断观
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ME． O /W型微乳区;G．凝胶区;E．普通乳剂区
图 1 不同乳化剂形成雪上一枝蒿总生物碱微乳的伪三元相
Fig． 1 Pseudo-ternary phase diagrams of shortstalk monkshood root
total alkaloids microemulsion formed by different emulsifiers
ME． O /W型微乳区;G．凝胶区;E．普通乳剂区
图 2 不同助乳化剂形成雪上一枝蒿总生物碱微乳的伪三元相
Fig． 2 Pseudo-ternary phase diagrams of shortstalk monkshood root total alkaloids microemulsion formed by various co-emulsifier
察体系变化和是否出现丁达尔现象，记录临界点并
绘制伪三元相图，见图 2。结果显示丙三醇所形成
的微乳区域面积最大，但所形成的微乳放置后有絮
状物产生且凝胶区也较大。无水乙醇所形成的微乳
区域面积较小，但其微乳稳定且凝胶区也小，故选用
无水乙醇为助乳化剂。
2. 4 乳化剂与助乳化剂的质量比(Km)对微乳形成
的影响 以 EL35 为乳化剂，无水乙醇为助乳化剂，
二者 Km 分别按 1∶ 1，2∶ 1，3∶ 1混合均匀，继而分别与
IPM按质量比 9∶ 1，8∶ 2，7∶ 3，6∶ 4，5∶ 5，4∶ 6，3∶ 7，2∶ 8，
1∶ 9混合均匀，按 2. 2. 2 项下水滴定法操作，滴定过
程中不断观察体系变化和是否出现丁达尔现象，记
录临界点并绘制伪三元相图，见图 3。结果显示当
Km 为 2∶ 1和 3 ∶ 1时所形成的空白微乳区域面积较
大，但 Km 为 3∶ 1时，形成的微乳放置后会变混浊，不
稳定，故选用 Km = 2∶ 1。混合乳化剂与 IPM 质量比
为 9∶ 1，8∶ 2时能形成微乳，但质量比为 8∶ 2所制备的
微乳不稳定，故确定混合乳化剂与 IPM质量比 9∶ 1。
2. 5 空白微乳处方的确定 由以上筛选结果确定
IPM为油相，EL35 为乳化剂，无水乙醇为助乳化
剂，Km = 2∶ 1，混合乳化剂与 IPM 质量比 9∶ 1。微乳
处方为 IPM-EL35-无水乙醇-水(3. 3% ∶ 19. 8% ∶
9. 9% ∶ 67. 0%)。
2. 6 雪上一枝蒿微乳处方的确定 称取适量雪上
一枝蒿总生物碱，加入 IPM 中，按比例加入混合乳
化剂，超声使分散溶解。将水相逐滴滴加到混合物
中，搅拌直至形成透明的微乳系统。制备含雪上一
枝蒿总生物碱 0. 5%，1%，2% 的微乳，于 12 000
r·min －1离心 10 min，测定离心前后微乳中雪上一枝
蒿的含量变化。结果表明雪上一枝蒿微乳中雪上一
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ME． O /W型微乳区
图 3 不同乳化剂 /助乳化剂的质量比所形成雪上一枝蒿总生物碱微
乳的伪三元相
Fig． 3 Pseudo-ternary phase diagrams of shortstalk monkshood root
total alkaloids microemulsion formed by different quality ratio of
emulsifier to co-emulsifier
枝蒿甲素的含量在离心前后无明显变化。表明制备
的雪上一枝蒿微乳稳定性良好。因此，确定雪上一
枝蒿微乳处方为雪上一枝蒿总生物碱-IPM-EL35-无
水乙醇-水(2. 0% ∶ 3. 3% ∶ 19. 8% ∶ 9. 9% ∶ 65. 0%)。
2. 7 质量评价
2. 7. 1 微乳性状 空白微乳为无色透明、低黏度液
体;雪上一枝蒿总生物碱微乳为棕黄色透明、低黏度
液体。空白微乳和雪上一枝蒿微乳用 650 nm 激光
入射，两者都具有明显丁达尔现象。
2. 7. 2 形态观察 取 3 批雪上一枝蒿总生物碱微
乳(批号 20150323，20150325，20150327)适量，用水
稀释 20 倍，滴在覆有支持膜的铜网上，静置 10 min
后用滤纸片吸干，滴加 2%磷钨酸(pH 7. 4)溶液于
铜网上负染 3 min，自然挥干，采用透射电子显微镜
观察并摄制照片，见图 4。结果显示该微乳多呈圆
球形，分散较好，且大小较均匀。
图 4 3 批雪上一枝蒿总生物碱微乳透射电镜(× 120 000)
Fig． 4 TEM of three batches of shortstalk monkshood root total
alkaloids microemulsion (× 120 000)
2. 7. 3 粒径分布 采用 Zetasizer Nano ZS 型激光
粒度测定仪测定雪上一枝蒿总生物碱微乳的粒子大
小及分布范围，结果显示 3 批样品的平均粒径分别
为 18. 41，17. 98，19. 70 nm，多分散指数(PDI)分别
为 0. 196，0. 183，0. 221。PDI 反映颗粒粒径均一的
程度，其值介于 0 ～ 1，数值越小，表示颗粒的单分散
性越好，粒径分布越窄。
2. 7. 4 微乳的鉴别 取 3 批雪上一枝蒿总生物碱
微乳，于 4 000 r·min －1离心 15 min，结果 3 批样品都
呈均一澄明状态，没有分层，可判断为已形成微乳。
能被水稀释的微乳为 O /W 型微乳，能被大量油稀
释的为 W/O型微乳。取 3 批雪上一枝蒿总生物碱
微乳适量，分别加水和油稀释，结果表明 3 批样品可
被水稀释，而不能被油稀释，加入大量油后分层，故
判断该微乳为 O /W型微乳。
2. 7. 5 pH测定 分别取 3 批微乳 0. 5 g，加水稀释
100 倍，利用酸度计测定样品的平均 pH 5. 92。
2. 7. 6 微乳的稳定性 参考 2010 年版《中国药
典》二部附录，将雪上一枝蒿总生物碱微乳以
10 000 r·min －1离心 15 min，微乳澄清透明，无分层
现象，符合微乳稳定性要求。采用留样观察法考察，
取适量雪上一枝蒿总生物碱微乳，密封于试管内，分
别放置于 4，25 ℃条件下贮藏 6 个月，定期进行观
察，结果表明微乳透明度及雪上一枝蒿甲素含量均
无明显变化。
2. 8 雪上一枝蒿甲素的含量测定［6-7］
2. 8. 1 对照品溶液的制备 精密称取雪上一枝蒿
甲素对照品适量，加甲醇溶液溶解并制成 1. 004
g·L －1的溶液。
2. 8. 2 供试品溶液的制备 分别精密称取空白微
乳与雪上一枝蒿总生物碱微乳 0. 5 g 置于 10 mL量
瓶中，加入甲醇超声 10 min，取出，放至室温，加甲醇
定容。精密移取 2 mL于 25 mL量瓶中，加入甲醇超
声 5 min，取出，放至室温后，加甲醇稀释至刻度，摇
匀，经 0. 45 μm微孔滤膜滤过，收集续滤液，即得。
2. 8. 3 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm ×
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150 mm，5 μm) ，流动相乙腈-磷酸盐缓冲溶液(pH
7. 3) (20 ∶ 80) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长
199 nm，柱温 30 ℃，进样量 20 μL。见图 5。
A．甲醇;B．空白微乳;C．对照品;D．供试品;1. 雪上一枝蒿甲素
图 5 雪上一枝蒿总生物碱微乳 HPLC
Fig． 5 HPLC chromatograms of shortstalk monkshood root total
alkaloids microemulsion
2. 8. 4 标准曲线的制备 精密吸取适量对照品溶
液于量瓶中，加甲醇分别制成质量浓度为 2. 008，
4. 016，8. 032，12. 048，16. 064，20. 08 mg·L －1的系列
对照品溶液。按 2. 8. 3 项下色谱条件测定。以雪上
一枝蒿甲素质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐
标，得回归方程 Y = 21. 32X + 1. 075(r = 0. 999 9) ，线
性范围 2. 008 ～ 20. 08 mg·L －1。
2. 8. 5 精密度考察 取 8. 032 mg·L －1雪上一枝蒿
甲素对照品溶液，按 2. 8. 3 项下色谱条件连续进样
6 次，计算雪上一枝蒿甲素峰面积的 ＲSD 1. 7%。
2. 8. 6 稳定性考察 取同一样品溶液，按 2. 8. 3 项
下色谱条件分别于 0，2，4，6，8，10，12，18，24 h 进样
分析，计算雪上一枝蒿甲素峰面积在 24 h 内的 ＲSD
1. 9%，表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 8. 7 重复性试验 精密称取雪上一枝蒿总生物
碱微乳 6 份，按 2. 8. 2 项下方法制备供试品溶液，按
2. 8. 3 项下色谱条件测定，结果微乳中雪上一枝蒿
甲素质量分数 2. 19 mg·g －1，重复性的 ＲSD 1. 5%。
2. 8. 8 加样回收率考察 精密称取已知雪上一枝
蒿甲素含量的雪上一枝蒿微乳 6 份，每份 0. 25 g，各
加入雪上一枝蒿甲素对照品 0. 502 mg，按 2. 8. 2 项
下方法制备供试品溶液，按 2. 8. 3 项下色谱条件测
定，结果平均加样回收率 99. 6%，ＲSD 2. 7%。
2. 8. 9 样品测定 取 3 批雪上一枝蒿总生物碱微
乳，每批 3 份，每份约 0. 5 g，精密称定，按 2. 8. 2 项
下方法制备供试品溶液，按 2. 8. 3 项下色谱条件测
定，结果雪上一枝蒿甲素的质量分数分别为 2. 28，
2. 23，2. 34 mg·g －1。
3 讨论
雪上一枝蒿总生物碱有明确的祛风除湿、通利
关节、消肿止痛等作用。目前，雪上一枝蒿相关制剂
的研究主要有片剂、涂膜剂、巴布剂等［8-10］，但片剂
存在口服吸收有首过效应，涂膜剂载药量小、含有大
量有机溶剂且不易储藏，巴布剂透皮速率低、不适合
大分子药物的透皮等缺点。由于微乳载药量大，具
有较好的透皮效果，且可在角质层和真皮形成药物
储库，能明显起到缓释药物的作用。因此，本文对雪
上一枝蒿总生物碱微乳的处方进行研究并对其进行
质量评价，对该制剂的进一步开发具有重要意义。
本文通过平衡溶解度选择了适宜的油相，采用
伪三元相图法优化了表面活性剂、助表面活性剂的
种类及其各自在处方中的比例。采用优选的处方所
制备的雪上一枝蒿总生物碱微乳外观澄清透明，粒
径在 10 ～ 100 nm，稳定性好。
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［责任编辑 刘德文］
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