全 文 ：上海中医药大学学报 第 26卷 第 3期 2012年 5 月
三七花总皂苷对内皮素诱导的人主动脉血管
平滑肌细胞 c-myc、c-fos表达的影响
苑素云1 王佑华1 曹 敏1 周 莉2 周 端1
1．上海中医药大学附属龙华医院 ICU (上海 200032)
2．上海中医药大学 (上海 201203)
【摘 要】 目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对内皮素(ET-1)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)
癌基因 c-myc、c-fos表达的影响。方法:采用 ET-1 诱导 HASMC 异常增殖，应用 RT-PCR 方法检测 PNFS 对
c-myc、c-fos mRNA表达的影响。结果:PNFS 能明显抑制 HASMC 原癌基因 c-myc mRNA 表达(P ＜ 0． 05) ，
而对 c-fos mRNA表达影响不明显。结论:PNFS可影响癌基因 c-myc mRNA表达以抑制 HASMC异常增殖。
【关键词】 三七花总皂苷;人主动脉血管平滑肌细胞;c-myc;c-fos
【中图分类号】 R285 【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X(2012)03-0095-03
［基金项目］ 上海市经委高新技术产业项目(沪创新 J-58)
［作者简介］ 苑素云，女，博士，副主任医师，主要从事中医
药防治高血压病临床与基础研究。
［通讯作者］ 周端，教授、主任医师，博士生导师。
E-mail:zhouduan@ 126． com
癌基因是一类编码关键性调控蛋白的细胞基
因，未活化的细胞癌基因称原癌基因，其主要功能是
调节细胞的增殖与分化。原癌基因 c-myc、c-fos 在
高血压血管重构过程中起着重要作用［1］。三七花
总皂苷(PNFS)是三七花的有效提取物［2］，能有效抑
制高血压血管平滑肌细胞异常增殖，但其作用机制
尚不清楚。本研究旨在通过观察三七花总皂苷对人
主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)癌基因 c-myc、c-
fos表达的影响，探讨其抑制 HVSMC 异常增殖的机
制。
1 材料与方法
1． 1 药品、试剂与仪器 三七花总皂苷由上海中医
药大学中药学院制备，以高效液相色谱分析法测得
其含量为 95%以上，临用前用双蒸水配制，0． 22 μm
滤膜过滤;硝苯地平片由上海长征制药厂提供，5%
乙醇、超声波助溶，0． 22 μm滤膜过滤，4℃保存。牛
血清白蛋白(BSA) ，购自 Sigma 公司(MO，USA) ;
DMEM(低糖) ，购自 Gibco(NY，USA) ;胰蛋白酶
AMRESCO、DMSO，购自中国医药集团上海化学试剂
公司，分析纯。其他试剂均为市售分析纯。原癌基
因 c-myc、c-fos 引物，由上海生物工程有限公司合
成。
1． 2 人原代主动脉血管平滑肌细胞培养 人原代
主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)株，购于美国
CASCADE 公司，用含 10% 小牛血清的 DMEM 在
37℃、5%CO2 湿热培养箱中培养。
1． 3 细胞分组及药物干预 培养 2 d 的单层
HASMC经 0． 125%胰蛋白酶消化液消化后，种在 12
孔板(5 × 105 cells /well)上。细胞培养 12 h后，随机
分为 6 组并分别加入相应浓度的药物。正常对照
组:加等量 0． 9%生理盐水;ET-1 模型组:ET-1 浓度
为 2 × 10-8 mmol /L;硝苯地平组:硝苯地平浓度为
50 μg /ml，ET-1 浓度为 2 × 10-8 mmol /L;PNFS 组:
PNFS浓度分别为 200、400、600 μg /ml，ET-1 浓度为
2 × 10-8 mmol /L。继续培养 12 h，进行 RNA抽提。
1． 4 VSMC RNA 抽提 应用 QIAGEN 公司的
Rneasy Midi试剂盒抽提总 RNA。各组 VSMC细胞，
PBS洗 1 次，加入 1 ml Trizol 试剂，吸管吹打数次，
匀浆液移至 1． 5 ml EP管充分混匀，室温静置5 min;
加入 200 ～ 400 μl氯仿摇匀，室温静置 2 ～ 3 min，冰
浴 15 min。4 ℃下 12 000 r /min离心 15 min;取上层
至新 EP 管中，加 0． 5 ml 异丙醇振荡，室温静置
10 min;4 ℃下 12 000 r /min 离心 10 min。弃上清，
加入 1 ml 70% 乙醇，4 ℃ 下 12 000 r /min 离心
5 min。弃上清，空气干燥 RNA 沉淀 5 ～ 10 min。用
20 μl DEPC 水溶解 RNA，电泳检测 RNA 的条带，
-70 ℃保存备用。
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DOI:10.16306/j.1008-861x.2012.03.030
ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI Vol． 26 No． 3 May，2012
1． 5 c-myc、c-fos mRNA 表达检测 c-fos 引物序
列:上游 5’CTTCCTTTGTCTTCACCTACCC 3’，下游
5’GGCTCACATGCTACTAACTACC 3’，扩增长度为
439 bp;c-myc 引物序列:上游 5’-TCTGGATCACCT-
TCTGCTGG-3’，下游 5’-GATTGCTCAGGACATTTCTG-
3;β-actin引物序列:上游 5’CATGTACGTTGCTATC-
CAGGC 3’，下游 5’CTCCTTAATGTCACGCACGAT
3’，扩增长度为 250 bp。94 ℃变性 45 s，58 ℃退火
1 min，72 ℃延伸 45 s，最后 72 ℃延伸 10 min。扩增
产物于 1． 5%琼脂糖凝胶(含0． 5 μg /ml溴化乙锭)进
行电泳，电泳结果于紫外灯下观察。采用美国
KODAK公司 ID数码成像分析系统软件对 RT-PCR图
片扫描，检测各组目的基因及其 β-actin 的密度积分
值，计算两者的比值即相对积分(A)值，以此作为
c-fos、c-myc mRNA的相对表达量，进行半定量分析。
1． 6 统计学方法 实验数据用 x ± s 表示，组间比
较采用 t检验。
2 结果
与正常对照组比较，ET-1 模型组 HASMC c-
myc、c-fos mRNA 表达均明显升高(P ＜ 0． 01)。与
ET-1 模型组比较，PNFS中、高剂量组和硝苯地平组
c-myc mRNA表达降低(P ＜ 0． 05) ，但三组之间比较
无显著性差异(P ＞ 0． 05) ;PNFS 低剂量组 c-myc
mRNA表达无明显变化(P ＞ 0． 05)。各干预组 c-fos
mRNA表达与 ET-1 模型组比较无显著差异(P ＞
0． 05)。见表 1。
表 1 各组HASMC c-myc、c-fos mRNA表达比较(x ± s)
组 别 c-myc /β-actin c-fos /β-actin
正常对照组 0． 39 ± 0． 09 0． 64 ± 0． 12
ET-1 模型组 1． 40 ± 0． 11* 1． 22 ± 0． 12*
硝苯地平组 1． 20 ± 0． 08# 1． 25 ± 0． 11
PNFS低剂量组 1． 37 ± 0． 13 1． 23 ± 0． 10
PNFS中剂量组 1． 22 ± 0． 10# 1． 21 ± 0． 14
PNFS高剂量组 1． 21 ± 0． 11# 1． 24 ± 0． 12
注:与正常对照组比较，* P ＜ 0． 01;与 ET-1 模型组比较，#P ＜ 0． 05。
3 讨论
myc、fos属于核内癌基因。核内癌基因多数是
即刻早期反应基因［3-4］，它的激活引起受刺激的细
胞从非增殖、静止的 G0 状态向 G1 期转变。人的 c-
myc由 3 个外显子组成，是表达相对分子量为 49 的
蛋白质，具有 DNA结合能力;c-fos 基因含有 5 个外
显子，编码 p55 c-myc，能与许多基因上的 API 位点
结合而激活转录过程，从而促进与细胞增殖有关基
因的开放，产生细胞的增殖效应。
在高血压血管损伤后，c-myc 和 c-fos 基因表达
明显增高。c-myc和 c-fos基因激活是 VSMC增殖的
始动因素，细胞增殖的刺激因素首先引起 c-myc 和
c-fos 基因的高表达，随后出现细胞迅速增生、DNA
合成增加、肌动蛋白含量升高而导致细胞表型改变，
最终形成血管重构。在此过程中，myc 基因对
VSMC增殖的调控可能发生。
三七花为五加科植物人参三七的花蕾，治疗高
血压病有一定疗效，其主要成分三七花总皂苷能明
显抑制血管平滑肌细胞的异常增殖［5-8］。本实验观
察到，三七花总皂苷能够明显抑制 HASMC 原癌基
因 c-myc mRNA 表达。中、高剂量组与硝苯地平比
较无显著差异性，低剂量组作用不明显。但本实验
中三七花总皂苷及硝苯地平均未明显影响 c-fos
mRNA表达，提示三七花总皂苷抑制血管平滑肌细
胞增殖的作用可能是通过抑制原癌基因 c-myc mR-
NA表达发挥作用，而与 c-fos基因途径无关。
参考文献:
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hypertrophy in virtue［J］． Biochemical J，2000，347(Pt 1) :275-
284．
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modeling，restenosis，and plaque rupture［J］． Circ Res，2000，87
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滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响［J］． 上海中医药大
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30(12) :1172-1175．
［7］苑素云，周端，顾仁樾． 三七花提取物对自发性高血压大鼠 ET-
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［8］曹敏，周端，王佑华，等．三七花对高血压患者血压和血浆 t-PA、
PAI、v WF的影响［J］． 上海中医药杂志，2012，46(3) :47-49．
编辑:肖元春
收稿日期:2012-03-10
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上海中医药大学学报 第 26卷 第 3期 2012年 5 月
Influence of Panax Notoginseng Flower Saponins on c-myc and c-fos
Expressions in ET-1-induced Human Aortic Vascular Smooth Muscle Cells
YUAN Su-yun1 WANG You-hua1 CAO Min1 ZHOU Li2 ZHOU Duan1
1． Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
2． Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
ABSTRACT Objective:To observe the influence of panax notoginseng flower saponins(PNFS)on c-myc and c-fos expres-
sions in ET-1-induced human aortic vascular smooth muscle cells(HAVSC)． Methods:Endothelin-1(ET-1)was used to in-
duce HAVSC proliferation，and RT-PCR was employed to detect the c-myc and c-fos mRNA expressions． Results:PNFS could
significantly inhibit HASMC c-myc mRNA expression(P ＜ 0． 05) ，and could not influence c-fos mRNA expression． Conclu-
sion:PNFS can suppress c-myc mRNA expression to inhibit HAVSC proliferation．
KEY WORDS Panax notoginseng flower saponins;human aortic vascular smooth muscle cell;c-myc;
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
c-fos
·征稿启事·
《上海中医药杂志》“脉案精选”专栏征稿启事
本着“立足中医临床，指导临床实践，报道学术前沿，传承中医精髓”的办刊宗旨，我刊特开设“脉案精
选”专栏。期望通过对病案治疗经过的详细介绍，反映主诊医家在临证中体现中医特色的诊疗方法，为读者
提供颇有疗效的中医临证经验。现诚向从事中医临床的有关专家征稿，具体选题、体例等要求如下:
1．选题范围:选择亲自诊治且印象深刻的少见病、疑难或急重病，经中医或中西医结合诊治，取得良好治
疗效果的成功案例。
2．体例与主要内容:可采用医案与医话相结合的形式情况。①病例介绍:包括主诉、简单现病史以及重
要的实验室检查结果，中医辨证、西医诊断，治疗经过(包括中西医治疗) ，其中具有特色的中医治疗部分宜
详细写明用药或治疗方法，并记录治疗后患者主要症状体征及实验指标变化情况;②按语:结合中西医理论
对病例进行讨论，具有特色的诊断及治疗部分宜适当分析;③字数:2 000 ～ 4 000 字;④文字要求:真实记录，
突出重点，特色鲜明。
3．文章相关链接:①专家介绍:对专家的主要研究方向及工作成绩进行简要介绍，约为 200 字(初稿资
料宜详细)。②诊余感言:专家或执笔者在本次诊病过程中的体验或感悟之言。要求:有感而发，1 ～ 2 句话
即可。③经验点滴:介绍专家感悟的诊断或处方用药的经验(与文章无直接联系者亦可) ，如问诊技巧、脉诊
经验、某一药物或方剂临床运用要点等。
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