全 文 ：第1 6卷 第 6 期
1 9 90年 白 求 恩
医 科 大 学 Vo l . 1 6 N o . 5
JO F N O R M AN B E T H U N E U N I V舔 报 ME DC I S1 9 9 0
生晒参多肤的提取分离 `
有机化学教研室 魏俊杰 李平亚 曾向东 徐景达
扭 典 本文首次从生晒参中用R p ;。一H p L C 法 分离出两 种人参多肤( Gi ns e ng P e P ti d s e,
G )P
, 分别是分子量 1 0 0 0的n 肤和分子量 1 3 0 0的 12 肤 。 它们具有降低 ZB S细胞 内多糖的含量和
增强 ZB S 细 胞 内唬均 酸脱氮酶的活力作用 。
关 . 何 人参 多肤 H P L C Z B S细胞
人参具有奇妙的药用价值这早已是 中外
人士所共知 。 对其有效化学成分的研究要属
人参皂试的研究最为突出 。 人参多肤的研究
从本世纪 60 年代初开始 〔 1 〕 直到 1 9 8 0年 日本
A n do 等 〔幻从人鸯中分离出具有胰岛素样 1 4
肤 , 这个领域才逐渐活跃起来 。 近 10 年来国
外未见有新的报道 , 仅 1 9 8 5年和 1 0 88年我国
张今等人〔 3 , 4 〕从人参花蕾中分离出两 个 酸
性多肤 , 从鲜人参及边条参中分离出一种 14
肤 。 植物多肤具有亲水性 、 含量低 、分离纯化
难等特点 , 同时也具有较强的生物活性 , 因
此 , 我们有理由推断人参多肤也会是一类潜
在的活性成分 。
5 3 8 型 , 透 析 袋 ( 1 0 00 0 道 ) 美国 y i s k . 。 。 公司
D E A E ( D E 3 : ) 瑞典W h a 卜m a n公 司 , C H 3 C N 色
谱用 , T F A 西德M E R C K
.
2 生晒参多肤的提取 、 分离
1 实验部分
1
.
1 材料和仪器
人参 ( p a n “ ` g i n e n g C . A . M e y . ) 吉 林省抚
松第二参场 , 低 温 层 析 拒 Zo 2 0M T N CI O L L A B
型 , L K B公司 , 超速离心机 日本 K U B O T A K R
一
20 的。 T , 冷 动干燥机 日本 E Y E L A , 自动邵分
收集器 B S 一 10 A型 , 上海市上海县东风五金厂 ,
U V / V i
s大型分光光度计 p H IL I p S p U s s 00 型 -
荷兰 P H ILI P公司 , 高效液相 色谱 仪 W at e r s 公
司 , Y w G 一 C : 。 1 0林m ( 8 x 2 5 0nt 。 ) 柱 , 大 连色
谱技术开发中心 , Y w G 一 C i 。 10协二 ( 5 x 2 00 o m )
柱 , 大连色谱技术开发中心 , 氨基酸分析仪 日立
命国家自然科学基金资助项目 1 9 89一 07 一窃收稿
将吉林省抚松产六年生鲜参用水洗净 , 阴干后
取 2 k g , 粉成 20 目。 用 9 倍蒸馏水 , 在 4 ℃ 下境
拌浸提 2 4 h , 过滤。 滤液在 4 ℃下加 0 0Dr P m , 离心
15 m i
n 。 上清液冻干 。 取干样分批 装入 1 0 0 0 0道的
透析袋 , 4 ℃下用去离子水振荡下透析 , 直至透析
外液呈淡黄色为止 (约 24h) 。 外透液冻干成黄色
粉末 。 取干粉 6 . 6 9过 2 . s x g o o m的 D E A E柱 ,用去离
子水以流速 0 . 3m l/ nI in 洗 脱 , 收 集 液 先 后 经黄
色 、 混浊直至无色 。 用 T r i “ 一 H lC p H . 8 . 5 的 洗脱
液以流速 0 . 6 m l/ m比洗脱 , 用苗三酮检测 , 共 收集
1 64二 l , 19 0一 3 00 n m 紫 外 扫 描在 21 O n m 和 2 5凌n m
处有强吸收峰 (见图 1 ) 。 再用 T r is ~ H lC p `比
8
.
9的洗脱液以流速 0 . 6m r /。 比洗脱 , 用布三 酮俭
测 , 共收 集 l s o m l , 1 9 0一 3 o o n m 紫 外 扫 描 , 在
2 l o n m和 2 6 4 n m处仍有强吸收峰 (见图 2 ) , 只 是
峰高有差别 , 分别冻干 。
取冻干样用适量经滤膜处理过的水溶解 , 用反
相高效液相色谱法进行分离 (图 3 ) 。
色谱条件 : ( H P L C W a t e r s公司 )
色谱柱 Y W G一C 、 。 1。卜m ( 5 x 2 5 0m m ) 半制备
柱 ,进样量 1 0 0协 l ; 柱压 6 00 p . ; ; 流动相 A :
C H 3 C N Zo %
,
B : T F A ( 0
.
1 , 0 1 / L ) 1 5%
,
C ’ H : 0
6弓% , 流 速 2 . 0二 l/ m比 , 检 测 波长 ZO6n 二 。
分别收集 5 个组分峰 , 1 ( 2 5 m l) , 2 化勃 二 l) ,
s ( 2 00 0 1 )
,
4 ( i 50 ut t )
, 6 ( 35二 1) 。 6 个 组
. 才3 6
DOI : 10. 13481 /j . 1671 -587x. 1990. 05. 007
分的缩二取反应均呈阳性 , 以组分 3 最为明显。 分
别冻干 。
将组分 8 冻千样 , 再经 F P L C纯化 (见图 4 )
F 19
.
1 U V
s p e e t r u m o f e r u d
e
G i
n s e n g p e p
`
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( T
r i s一 H C I b u f f e r s o l u t l o n ,
p F S
.
5 ) F 1 9
.
2 U V s v e e t r u m o f
t三d e s ( T r i s 一 H C I
p H S
.
9 )
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G 呈n 、 e n g P e p -
b
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F 1 9
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4 C
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o ” e n t 8 o f
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e G i o s e 。 ` p e p -
t i d e s b 了 p盯 i f i e a t i o n ( H P L C )
, 屏界了
色谱条件 : (l不 P L CWa tr es公司 )
色谱柱 YW G一 C;。 1 0林 m (5 x2 0 0m m )分析
柱 , 进样量 1 0协 1 , 柱 压 i 4 4 o p 。 , , 流 动 相 A :
C H 3 C N 1 0% , B
: 0
.
0 5% T F A一 H 2 0 ( p H = 3 )
9 0% , 流速 0 . 9 nr l加 i n , 检测波长 2 1 4 n m 。
收集组分 I ( 2 5 nt l ) 为 G p l , 组分 11 ( s o m l ) 为
G lP l分别冻干 。
T a b l e 1 A m i n o a e i d
e o m p o ; i t i o 且
o f G P 1 a u d G P 11
2 讨论
人 m i n o
a e i d
s
G P 1 N
u m b e r G P 11 N
u m b e r
A s p 0
.
1 5 2 0
.
1 0 2
S e r o
。
1 6 2 0
.
1 0 2
G 1 u 0
.
2 1 3 0
.
1 7 3
G 1 y 0
.
2 0 3 0
.
13 2
A l a 0
.
08 1 0
.
0 5 1
L y s o
,
08 1
P r o 0
.
0 5 1
用凝胶色谱法 〔 5 ~ 7 〕测定G PI 分子量为1 30。 ,
G p l l分子量为1 000 (见表 2 ) 。
测定条件月
室温 1 5 ℃ , S e p h a d e x G一 2 5 (瑞典 P h a r m a e i a
公司 )胶板 ,展开剂o . o 2 5 m o l / L T r i卜 于J C I缓冲 液
p H = 7
.
2
, 含 0 . 05 m o l的 N a e l
T a b l e 2 D e t e r m i n a t i o n o f m o l e e u l a r
w e i g h t o f G P 1
a n d G P 1 1
。 ; . , 二 , 、 , 。 , 、 1
5 t a n d a r a M I g M S ( e 。 ) 瑞一一 - - 一 一 - - - 一 - - 一 。 - · - 一 、 - 一 , R f
B e t a
一
L P IJ 1 0
B 5 13 1
.
54
I n s u l i n 5 7 00 3
.
77 9
. 弓2 2 . 10
B a e i t r a e 玉n 1 2 00 3 .乃8 8 . 0 6 2 . 4 8
G l
u t a t h i o 皿 e 3 07 2
.
49 7
.
63 2
.
62
T y r o s i 习 e 1 81 2
.
62 6
.
9 9 2
.
8 6
G P 1 1 3 18 3
.
12 8
.
2 0 2
.
4 4
G P 1 1 1 0 00 3
.
0 0 8
.
0 0 2
. 沁
蓝葡聚糖前沿Zo e 。 , 板 2 4 e m x 1 8 c m
用半制备柱制得的组分 3 进行生物活性实验表
明 , 生硒参多肤有降低 Z B S细胞内多糖含量和增强
Z B S细胞内珑拍酸脱氢酶活力的作用 . , .
本研究所得的人参 n 肤和人参 12 肤是首
次从生晒参分离出来的 。 与曾报道的人参多
肤相 比较其特点是不含苏氨酸 。 人参多肤亲
水性强 、 含量低 、 分离困难 , 本 文 采 用 了
R P : 。一 H P L C法有效 、 快速的达到了分离纯
化 的目的 。 为了提高样品纯化度反复进行高
效液相分离是必要的 。
实验证明人参多肤是深入认识人参药用
价值的有效成分 , 是表征新的生物活性的重
要 物质基础 。 应不断拓宽人参多肤的研究领
域 , 运用近代的分离技术 , 为扩大生物活性
研究打开人参药用新途径 , 提供更加雄厚可
靠 的物质条件 。
参 考 文 献
G
s t i r n e r F
, e t 吕 l . A r e ll R l: a r m , 1 9 6 6 , 2。。
( 1 1 ) 9 3 4
A n d
o
T
, e t a l
.
P la n t a M e d i e a
, 1 0 5 0 ; 3 a
( 1 )
: 1 8
张今 , 等 . 吉林大学高等学校化学学报 , ! 9 8 5 ;
6 ( 4 )
: 3了6
张今 , 等 . 科学通报 , 1 9 8 8 ; 1 2 : 6 5 2
o f f m
a n n
R
.
C h
r o m a t o ` r a五y ; 2 97 5 , 3 5 4
C il
u 皿 ` H o H u n g , e t a l . A 几 a l B i o e il e m ,
19 7 7 ; 3 0 : 90
林永齐 , 等 . 吉林大学 自然科 学学报 , 1 9 ? 幻
4 : 14 7
4 3 8
.