全 文 :浙江中医药大学学报 2013年 4月第 37卷第 4期
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基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09502-016)
Fund project: Supported by the National Key New Drugs Initiative Item(2009ZX09502-016)
通讯作者:吕圭源,E-mail:Lv.gy@263.net
石菖蒲与九节菖蒲抗氧化作用的比较研究
郑英 1,2 邹晓华 2 陈素红 3 吕圭源 1
1.浙江中医药大学 杭州 310053 2.解放军第 117医院
3.温州医学院药学院
摘要:[目的]比较石菖蒲与九节菖蒲的抗氧化作用。[方法]通过体外药物对亚油酸的自动抗氧化的抑制作用和体内对小鼠血中谷胱甘肽过氧化物酶
(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)的活性的比较研究。[结果]体外九节菖蒲抗氧化的 IR与维生素 E比较无显著性差异,石菖蒲有一定的抗氧化性。体
内随着给药天数与剂量的增加,石菖蒲、九节菖蒲作用的小鼠血GSH-PX活性与 CAT活性呈上升趋势。九节菖蒲高剂量组在给药 4天、14天均有显
著性差异(P<0.05),石菖蒲高剂量组在给药 14天 GSH-PX活性有显著性差异(P<0.05),CAT活性与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。九节菖蒲
剂量组GSH-PX活性与 CAT活性值明显高于石菖蒲剂量组(P<0.05)。[结论]九节菖蒲抗氧化作用明显优于石菖蒲,为临床合理鉴别使用提供参考。
关键词:石菖蒲;九节菖蒲;抗氧化;亚油酸;谷胱甘肽过氧化物酶;过氧化氢酶
中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:1005-5509(2013)04-0451-04
Comparative Study on Anti-oxidant Effect of Rhizoma Acori Tatarinowii and Rhizoma Anemones Altaicae Zheng Ying1,2, Zhou Xiaohua2,Chen
Suhong3, et al 1.Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou(310053); 2.The 117th Hospital of PLA;3. Wenzhou Medical College
Abstract: [Objective] To compare rhizoma acori tatarinowii with rhizoma anemones altaicae on the anti-oxidant effect. [Methods] The study was on
linoleic acid automatic anti-oxidant inhibition of drug in vitro and glutathione peroxidase(GSH-Px), and catalase activity(CAT) of drug in vivo mouse
blood.[Results] It was found that the anti-oxidant inhibition ratio of rhizoma anemones altaicae had no significant difference, compared with vitamin E,
rhizoma acori tatarinowii had a certain anti-oxidative effect in vitro. With the increasing of days and doses, the blood activity of GSH-Px and CAT in
mouse blood fed on two drugs reactively was on upward trend, the activity of GSH-PX and CAT in mouse blood had a significant difference treated with
a high dose group of rhizoma anemones altaicae in 4 days or 14 days, and the activity of GSH-Px had a great difference treated with a high dose group of
rhizoma acori tatarinowii in 14 days, but the activity of CAT had no significant difference, compared with a control group. The activity of GSH-PX and
CAT in group of rhizoma anemones altaicae was significantly higher than in group of rhizoma acori tatarinowii.[Conclusion] The anti-oxidation of rhi-
zoma anemones altaicae was significantly better than rhizoma acori tatarinowii which provides a reference for the clinical identification of use.
Key words: Rhizoma acori tatarinowii; Rhizoma anemones altaicae; anti-oxidant; Linoleic acid; GSH-PX; CAT
石菖蒲为天南星科植物石菖蒲(Acorus tatarinowii
Schott)的根茎。九节菖蒲一是指石菖蒲中“一寸九节”
这种规格药材,二是指北方习用的毛茛科植物阿尔泰
银莲花(Anemone altaica Fisch.exC.A.Mey.)的根茎。在
临床应用中二者均有化痰开窍的作用,而石菖蒲祛湿
作用大于九节菖蒲[1]。九节菖蒲开窍作用大于石菖蒲,
毒性也大。如病人痰湿过重用石菖蒲为佳;醒脑、安
神、开窍九节菖蒲为优。石菖蒲和九节菖蒲是品种来
源、功效、主治和成份等作用各不相同的两种药材,两
者水煎剂药理作用中能减轻和逆转氧自由基的损伤
或部分抗氧化作用[2],为进一步评价两种药物抗氧化
能力强度,对指导临床安全用药,鉴别和筛选低毒高
效的抗氧化作用的中药在临床应用中有重要意义。
1 材料
1.1 药物
1.1.1 受试药来源 石菖蒲、九节菖蒲、虎掌南星、
甘草药材均购自浙江省中医院,按药典炮制的饮
片。虎掌南星:为天南星科半夏属植物掌叶半夏
Pinellia pedatisecta Schott的干燥块茎(产地:浙江,批号
20081114)。石菖蒲:天南星科植物石菖蒲 Acorus
tatarinowii Schott 的干燥根茎(产地:浙江,批号
20080111)。九节菖蒲:毛莨科阿尔泰银莲花Anemone
JO
U
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O
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G
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O
.4
Apr.
2013
中
药
研
究
451
DOI:10.16466/j.issn1005-5509.2013.04.032
浙江中医药大学学报 2013年 4月第 37卷第 4期
郑
英
,
等
:
石
菖
蒲
与
九
节
菖
蒲
抗
氧
化
作
用
的
比
较
研
究
altaica Fisch.exC.A.Mey.的干燥根茎(产地:河南,批号
20080504)。 甘 草 : 豆 科 植 物 甘 草 Glycyrrhiza
uralensis Fisch的干燥根或根茎(产地:新疆,批号
20080102)。其中虎掌南星与甘草作为体外抗亚油酸
自动氧化作用阳性对照中药。
1.1.2 受试药制备 中药经磨细成粗粉,以 1:10(g:
mL)的比例加入 95%乙醇,浸泡过夜,回流 1h,药渣重
复提取 3次,合并滤液,蒸干得粗提物。
1.1.3 阳性对照药 维生素 E(VitE),国药集团化学试
剂有限公司,批号 20061129,含量 97.0% ~102.0% 。
1.2 试剂 亚油酸为浙江粮油科研所实验厂提供,还
原型谷胱甘肽(GSH)为上海酵母厂产品(中国),叠氮化
钠(NaN3)为 Sigma公司产品(美国)。5,5’- 二硫代双
(2 -硝基苯甲酸 )〔5,5’-dithio -bis(2 -nitrobenzonic
acid),DTNB〕,Fluka chemie 产品。其余试剂均为国产
分析纯。
1.3 动物 ICR小鼠,雄性,体重(24±2)g,由浙江医
学科学院实验动物中心提供(实验动物许可证号:
SCXK(浙)2003-0001)。
1.4 仪器 天津WM-2型无油气体压缩机,HH-2数
显恒温水浴锅(河南巩义市英峪予华仪器厂),721型
分光光度计(上海精密科学仪器有限公司生产),P3 0
电子精密天平(上海梅特勒一托利多仪器有限公司生
产),DU-65 Spectrophotomate 离心机,HY-2 调速多
用震荡器(常州国华电器有限公司生产)。
2 方法
2.1 亚油酸自动氧化抑制率(Inhibit Ratio,IR)测定
2.1.1 受试样品处理 分设空白培育对照组、未培育
对照亚油酸组、中药提取物或阳性药培育亚油酸组。
取一定量的中药提取物(空白不加);溶于少量乙醇
中,添加 5.00mL亚油酸,混合于 d17×170MN试管中,
在 60℃及 500mL·min-1空气流量下,培育 2h。
2.1.2 碘量法过氧化物值 (peroxide value,POV) 测定
精密称取约 1g亚油酸样品,溶于 3:2(V:V)冰醋酸与
氯仿混合溶剂中,加入定量饱和 KI溶液,在暗处放置
10min,加 30mL蒸馏水,近终点加 1mL0.5%淀粉指示
剂,用硫代硫酸钠溶液滴定至终点。计算式:POV
(mmd·kg-1)=1000×M×V/W
V:亚油酸样品耗硫代硫酸钠溶液的毫升数(mL)
W:亚油酸样品重量(g)
M:硫代硫酸钠标准溶液摩尔浓度
2.1.3 抑制率(Inhibit Ratio,IR)计算 中药提取物抗
氧化性能可用直观的 IR表示,IR(%)与抗氧化性能成
正比关系。
计算式:IR(%)=(A-B)×100/(A-C)(%) A: 空白
培育亚油酸样品的 POV
B:添加中药提取物或阳性药亚油酸样品的 POV
C:未培育亚油酸样品的 POV
2.2 小鼠血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧
化氢酶(CAT)酶活力的测定 取 ICR小鼠,雄性健康
小鼠 100只,随机分成 10组。即生理盐水对照组、虎
掌南星、石菖蒲和九节菖蒲高中低剂量组,高中低剂
量组小鼠分别每只灌胃 0.3mL,0.2mL,0.1mL。每天给
药一次,连续给药 4d和 14d。4天尾静脉取血 10μL,
14d摘除眼球,收集眼眶血以测定酶活力。全血中
GSH-Px活力采用 Hafeman等的 DTNB直接法测定[3]。
规定每 1mL全血,每分钟扣除非酶反应的 Log[GSH]降
低 1为一个酶活力单位。小鼠血红细胞中 CAT活力参
照张企兰等文献方法测定[3]。
2.3 数据处理 实验数据均以 x±s 表示,采用
SPSS13.0统计软件进行分析,组间均数比较采用单
因素方差分析,组间采用 t检验比较,P<0.05有统计
学意义。
3 结果
3.1 石菖蒲和九节菖蒲抗氧化性 IR(%)的比较 与
阳性对照组 VitE比较,石菖蒲抗氧化性的 IR值明显
低(P<0.01),九节菖蒲无显著差异。九节菖蒲抗氧化的
IR值较石菖蒲高,与阳性中药组虎掌南星、甘草比较,
无显著差异。
3.2 小鼠血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧
化氢酶酶(CAT)活性的影响
与空白对照组比较,随着给药天数与剂量的增
加,石菖蒲、九节菖蒲、虎掌南星对小鼠血 GSH-Px活
性与 CAT活性有显著影响。九节菖蒲、虎掌南星高剂
量组 GSH-Px 活性在给药 4d、14d 均有显著性差异
(P<0.05),石菖蒲高剂量组 GSH-PX活性在给药 14天
有显著性差异(P<0.05)。与阳性中药对照组虎掌南星
通过组间比较发现,石菖蒲剂量组 GSH-PX活性与
CAT活性值明显低于虎掌南星剂量组(P<0.05),九节
菖蒲剂量组则无显著性变化(P>0.05)。两组间比较显
示,九节菖蒲剂量组 GSH-PX活性与 CAT活性值明
显高于石菖蒲剂量组(P<0.05)。结果见表 2。
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浙江中医药大学学报 2013年 4月第 37卷第 4期
表 1 石菖蒲和九节菖蒲抗氧化性 IR(%)的比较(x±s,n=3)
Tab. 1 Compare Rhizoma Acori Tatarinowii with Rhizoma Anemones Altaicaeon on anti-oxidant inhibit ratio (x±s, n=3)
中药名称 原植物学名 添加物重量(mg) IR(%)
石菖蒲
九节菖蒲
甘草
虎掌南星
VitE
Acorus tatarinowii Schott
Anemone altaica Fisch.exC.A.Mey.
Glycyrrhiza uralensis Fisch
Pinellia pedatisecta Schot
新昌制药厂 20061129
10
10
10
10
10
56.03±5.68**
85.90±6.52
85.60±3.20
92.11±6.56
82.43±2.31
注:与阳性对照组 VitE比较:**P<0.01。
Note: Compared with the positive control group,**P <0.01.
表 2 石菖蒲和九节菖蒲对小鼠GSH-Px及 CAT活性的影响 (x±s)
Tab. 2 Effect on GSH-Px and CAT activity of Rhizoma Acori Tatarinowii and Rhizoma
Anemones Altaicae in mouse (x±s, n=3)
组别 剂量(g·kg-1) n 4d GSH-Px活性 14d GSH-Px活性 CAT活性(k·gHb-1)
空白对照组
虎掌南星
石菖蒲
九节菖蒲
2.50
1.25
2.50
3.75
1.25
2.50
3..75
1.25
2.50
3.75
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
18.31±2.91
23.12±5.03*
24.53±4.77*
25.81±6.47*
20.11±4.53
21.22±5.87
22.92±7.23
21.51±6.62
23.12±7.92
24.12±4.18*
20.12±3.02
27.29±5.09**
29.30±5.45**
29.65±6.16**
22.11±5.52#Δ
23.32±5.70#Δ
25.45±6.62*#Δ
24.32±7.46
25.32±7.45*
27.86±4.22**
26.51±3.02
33.92±9.92
34.04±9.82*
38.33±8.59**
27.03±3.89#Δ
29.35±4.66#Δ
29.63±4.84#Δ
31.69±7.54
32.75±7.95
35.20±7.93*
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与阳性对照中药组比较,#P<0.05;与九节菖蒲组比较,ΔP<0.05。
Note:Compared with the blank control group, *P<0.05,**P<0.01;Compared with the positive control of traditional Chinese medicine group, #P<0.05;
Compared with Rhizoma Anemones Altaicae, ΔP<0.05.
4 讨论
在药房的工作中,发现石菖蒲和九节菖蒲在调剂
过程中非常混乱,处方中甚至有只写菖蒲。调剂过程
中有付石菖蒲,亦有付九节菖蒲。通过本草考证,认为
古代最先使用的药材“菖蒲”和当今的石菖蒲是一致
的,并且认为石菖蒲是药材菖蒲的主要来源。本实验
九节菖蒲为毛莨科阿尔泰银莲花的干燥根茎。
两者抗氧化性通过体内体外实验来证实,体外亚
油酸自动抗氧化抑制作用初步比较了两者水煎剂抗
氧化作用强弱,方法比较简便。结果与阳性药 VitE对
照,九节菖蒲抗氧化的 IR值较石菖蒲高,与阳性维生
素 E及中药组虎掌南星、甘草比较,无显著差异。其中
虎掌南星、甘草据文献报道有很强的抗氧化性[3],实验
中石菖蒲有一定的抗氧化性,抑制亚油酸自动氧化作
用最弱。体内实验通过 GSH-Px及 CAT活性来反映抗
氧化性,结果表明,与空白对照组比较,随着给药天数
与剂量的增加,石菖蒲、九节菖蒲、虎掌南星对小鼠血
GSH-Px活性与 CAT活性呈上升趋势,九节菖蒲、虎
掌南星高剂量组 GSH-Px活性在给药 4天、14天均有
显著性差异,石菖蒲高剂量组在给药 14天有显著性
差异。两药比较抗氧化作用,九节菖蒲明显优于石菖
蒲,九节菖蒲与虎掌南星无显著性差异。
石菖蒲首载于《本经》列为上品,九节菖蒲在古本
草上均无记载,九节菖蒲始见于《药物出产辨》,后来
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在《中国药学大辞典》和《中国药物标本图形》中曾提
及。从药材性状上石菖蒲和九节菖蒲容易区分,《卫生
部药品标准中药材》第 1册收载的九节菖蒲的功效与
2005版国家药典收载石菖蒲的功效基本相同[4]。但是
九节菖蒲不含挥发油,其新鲜叶中与石菖蒲所含挥发
油类成份也不相同,其功效偏于祛痰利湿,药理证实
石菖蒲镇痛作用优于九节菖蒲[5]。石菖蒲,辛、苦,温,
归心、胃经。化湿开胃,开窍豁痰,醒神益智。用于脘痞
不饥,噤口下痢,神昏癫痫,健忘耳聋。石菖蒲水煎剂
有镇静、抗惊厥作用,可促进消化液分泌,制止胃肠的
异常发酵[6]。九节菖蒲,辛,温,归心、胃经。有开窍除
痰、安神醒脾的功能。用于热病昏迷、癫痫、耳鸣耳聋、
胸腹胀闷、食欲不振。外用治痈疽疮癣[7]。有报道石菖
蒲水煎剂可明显降低小鼠的自主活动,并与戊巴比妥
钠有协同作用[8]。实验研究表明,石菖蒲的水提液能明
显延长小鼠跳台潜伏期,减少错误次数,提高小鼠迷
宫试验的正确率[9]。
近年来对石菖蒲的研究不断深入,发现其有良好
的抗氧化活性,在清除自由基方面,作为药物,石菖蒲
较九节菖蒲所产生的毒副作用小,采用 D-半乳糖致
小鼠急性衰老,模拟痴呆模型研究石菖蒲水煎剂对脑
功能衰退等方面的治疗作用,结果表明石菖蒲水煎剂
能减轻和逆转氧自由基的损伤,增强学习记忆能力,
防止脑萎缩[10]。石菖蒲水提液、醇提液与挥发油具有相
反的药理活性,具有镇静安神和醒脑开窍的双向作用
[8、9]。临床常用水煎剂,本文从抗氧化作用进行比较研
究,积极从低毒高效的中草药加强研究其潜在的机
理,为临床合理用药提供依据,但对其有效部位和作
用机理与毒理的研究不足,具体的抗氧化活性物质基
础、抗氧化活性的具体机制还有待进一步的研究。
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(收稿日期:2012-12-29)
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