全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2015)01 － 0329 － 04 DOI:10． 16213 / j． cnki． scjas． 2015． 01． 061
收稿日期:2014 － 03 － 30
基金项目:云南省热带作物科技创新体系建设专项资金
(ＲF2014-19);云南省应用基础研究计划项目(2013FZ168);景
洪市科技三项费项目(2013． 46);西双版纳州科技项目
(YX201204)
作者简介:张春霞(1981 －)，女，山西人，硕士，助理研究员，主
要从事食用菌栽培及外生菌根研究，E-mail:zhangchunxia7084@
163． com。
印度块菌和思茅松菌根合成的研究
张春霞，何明霞，高 锋，刘 静，曹 旸，许欣景，王文兵，王 云
(云南省热带作物科学研究所，云南 景洪 666100)
摘 要:在天然思茅松林下，尚未发现印度块菌的生长。在温室条件下，用印度块菌孢子悬浮液对思茅松和云南松树苗进行菌根
接种试验，接种 5 个月印度块菌和思茅松、云南松均可以形成典型的块菌外生菌根。形成的外生菌根呈二叉分枝状或单支棒状，
初为浅褐色，后变为黑褐色;菌丝套及外延菌丝结构明显，菌丝套内部迷宫状，外延菌丝直角分支;哈蒂氏网明显。同时，在含有自
然石灰土和腐殖质的基质 1 中，思茅松的菌根感染率为 100 %。在 pH值 6． 5、7． 0、7． 5 的条件下，印度块菌均能侵染思茅松，且菌
根感染率均为 100 %。本研究为印度块菌的培养提供了一种新方法。
关键词:印度块菌;思茅松;菌根合成;人工接种
中图分类号:S646 文献标识码:A
Study on Mycorrhizal Synthesis of Tuber indicum
with Pinus kesiya var． langbianensis
ZHANG Chun-xia，HE Ming-xia，GAO Feng，LIU Jing，CAO Yang，XU Xin-jing，WANG Wen-bing，WANG Yun
(Yunnan Tropical Crops Ｒesearch Institute，Yunnan Jinghong 666100，China)
Abstract:Pinus kesiya var． langbianensis is not a natural host plant，but it can be mycorrhized by Tuber indicum under greenhouse condi-
tions． The seedlings of P． kesiya var． langbianensis and P． yunnanensis could get mycorrhizal synthesis with Tuber indicum after inoculating
5 months． The ectomycorrhizae，binary branching or single rod，was light brown at first and became dark brown later． The mantle and ema-
nating hyphae were obvious，and the inner of mantle was like a maze，and emanating hyphae had right branch． The hartig net was obvious．
The matrixes 1 which included lime-stone soil and organic matters produced more mycorrhgizal formation，and the seedlings of P． kesiya var．
langbianensis and P． yunnanensis were mycorrhized by 100 % ． The mycorrhizal synthesis also could be got at the pH value of 6． 5，7． 0 and
7． 5 and the infection rate was 100 % ． The results of this research have opened a new way to cultivation of T． indicum．
Key words:Tuber indicum;Pinus kesiya var． langbianensis;Mycorrhizal synthesis;Artificial inoculation
印度块菌(Tuber indicum Cooke ＆ Massee)，属
于子囊菌纲 Ascomycetes，块菌科 Tuberaceae，块菌属
Tuber的大型真菌。成熟时香味浓郁，是一种经济和
食用价值都较高的名贵菌根食用菌，在国内外食用
菌市场上都有重要的地位［1］。由于其市场价格高，
市场需求日益增强，导致人们超强度采挖，使其资源
也日益减少，供需矛盾突出。因此块菌的人工栽培
研究一直是人们热衷的方向。
印度块菌同其它名贵食用菌，如松茸(Tricholo-
ma matsutake)、美味牛肝菌(Boletus edulis)及鸡油
菌(Cantharellus cibarius)等一样，都属于营共生生活
的菌根真菌，在它们的生活史中其菌丝体必须与适
合的树木营养根生长在一起，形成一种特殊的共生
体———菌根，之后才能进一步发展并长出子实体，完
成生活史，没有完成这一过程，子实体无法形成［2］。
外生菌根对林木具有:扩大根系的吸收面;增加林木
的抗逆性等功能，能使苗木茁壮成长，提高造林成活
率，促进林木生长，对林业的发展起着十分重要的作
用［3 ～ 4］。在云南、四川的野生印度块菌常与云南松
(Pinus yunnanensis)、华山松(Pinus armandii)、滇油
杉 (Keteleeria evelyniana)和 锥 连 栎 (Quercus
franchetii)等植物形成外生菌根［5］。所以，印度块菌
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2015 年 28 卷 1 期
Vol. 28 No. 1
西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
的分布范围大致和这些树种的分布范围是一致的。
思茅松(Pinus kesiya var． langbianensis)是和云南松
很近似的树种，是云南普洱及周边地区的乡土树种，
它具有速生、丰产、适应性强等特点，也是普洱的主
要用材树种和采脂树种，其经济价值极高［6］。但
是，迄今还没有在思茅松林下找到印度块菌。用思
茅松作为印度块菌的共生树种进行菌根合成研究也
未见过报道。笔者于 2011 年至 2012 年用思茅松做
共生树种和印度块菌进行菌根合成的试验，并用云
南松作为对照，探讨形成菌根苗的基质等条件，以及
印度块菌和思茅松、云南松的共生的契合能力。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试菌种 来自印度块菌成熟子实体，印度
块菌购自四川攀枝花块菌市场。
1． 1． 2 供试树种 思茅松(P． kesiya var． langbi-
anensis)和云南松(P． yunnanensis Faranch)种子购
自云南省种苗站。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 接种菌种 取印度块菌子囊果用清水刷洗
干净，75 %酒精表面消毒，削去表皮，切成碎片，加
入无菌水用搅拌机搅拌，配成浓度为 6 × 106 的孢子
悬浮液，待用。
1． 2． 2 无菌苗培养 组培瓶底铺一层滤纸，用自来
水浸湿，封口膜封好。放置高压锅灭菌，待用。种子
用自来水冲洗 1 h，30 % H2O2 浸泡 15 min，同时不
断摇动，然后用无菌水清洗干净，放入组培瓶里。26
℃黑暗培养。每天检测 2 次，剔除污染的种子。珍
珠岩用水预湿后 121 ℃高压灭菌。装入花盆(直径
30 cm，高 27 cm)，移入萌发的思茅松种子，温室自
然条件下育苗。育苗基质经 121 ℃高压灭菌 2 h，装
入花盆(直径 15 cm，高 12 cm)，待思茅松长至 3 ～ 5
根侧根时移栽到各基质的花盆中，每盆 1 株。
1． 2． 3 接种 待思茅松或云南松长出侧根 5 ～ 6
条，每条小根有吸收小根时，将孢子悬浮液分别接种
至思茅松和云南松根系，每盆接种 10 mL。
1． 2． 4 试验设计 (1)不同栽培基质:设基质 1 和
基质 2 两个处理，基质 1:腐殖质(鸡粪)∶石灰土∶蛭
石 = 3∶ 5∶ 6(v /v /v)，基质 2:生红土∶河沙∶粉末状的
椰子树皮 = 2∶ 2∶ 1(w /w /w);pH值 7． 0，以思茅松为
树种，每处理接种 10 盆。
(2)不同树种:设云南松和思茅松两个处理，pH
值 7． 0，选用基质 1，每处理接种 10 盆，以不接种为
对照。
(3)不同 pH:选用基质 1，以思茅松为树种，pH
值用石灰或草炭调成 6． 5、7． 0、7． 5 三个处理，每处
理接种 10 盆。
1． 2． 5 菌根合成结果和苗木生长的调查 所有试
验在云南省热带作物科学研究所大棚温室内进行，
自然光照，温度 25 ～ 28 ℃。苗木接种 5 个月后调
查，每个处理逐一检查，从花盆中小心取出苗木，稍
加清洗，先检查有无菌根形成，有菌根形成的进行冷
冻切片，然后在 40 倍 Leica 显微镜下观察菌根的形
态结构。接种 8 个月后测量思茅松和云南松的株高
和冠径，并用 DPSv6． 05 统计软件进行分析。
1． 2． 6 菌根分子检测 取印度块菌接种思茅松 8
个月后形成的菌根 5 ～ 10 个，在体视镜下用毛刷刷
掉泥土清洗干净，用 Qiagen 公司植物微量 DNA 提
取试剂盒(DNeasy Plant Mini Kit)提取 DNA，通过
ITS 序列分析方法鉴定菌根上的真菌，ITS 序列 PCＲ
扩增引物为 ITS1 (5’-ATCCGTAGGTGAACCTGCGG-
3’)和 ITS4 (5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)，
扩增片段经纯化后测序，测序结果与接种用的印度
块菌 ITS序列比较，以确定形成菌根菌的是否为印
度块菌。
2 结果与分析
2． 1 外生菌根形态特征
试验结果表明，在温室条件下，不同基质中，接
种 5 个月后，印度块菌可和思茅松形成典型的块菌
外生菌根。外生菌根二叉分支状或单支棒状，膨大，
初为浅褐色(图 1)，后期为黑褐色;菌丝套及外延菌
丝结构明显(图 2)，菌丝套内部迷宫状(图 3)，有外
延菌丝，外延菌丝有直角分枝(图 4);哈蒂氏网明显
(图 5)。而且发现很有趣的一个现象，印度块菌的
菌丝紧密地缠绕在在思茅松的根毛上，这种菌丝感
染根毛的特殊现象以前没有报道过(图 6)。在同样
条件下，印度块菌和云南松也形成了典型的块菌菌
根(图 7)。
图 1 印度块菌与思茅松形成菌根
Fig． 1 P． kesiya var． langbianensis mycorrhized by Tuber indicum
033 西 南 农 业 学 报 28 卷
图 2 菌丝套及外延菌丝
Fig． 2 Mantle and emanating hyphae
图 3 菌丝套内部结构迷宫状
Fig． 3 The inner of mantle like a maze
图 4 外延菌丝直角分枝
Fig． 4 Ｒight branching emanating hyphae
2． 2 不同栽培基质对形成菌根的影响
试验结果表明，在温室条件下，接种 5 个月后，
印度块菌对思茅松在基质 1 中的菌根感染率为 100
%，在基质 2 中的菌根感染率为 50 %。
2． 3 印度块菌对不同树种苗木的感染情况
2． 3． 1 印度块菌与苗木形成菌根情况 在基质 1
中，思茅松与云南松均能与印度块菌形成典型的块
菌菌根，菌根感染率均为 100 %;对照无菌根形成。
2． 3． 2 印度块菌对苗木生长的影响 接种与不接
种印度块菌的思茅松株高平均值分别为 23． 06、11．
25 cm;冠径平均值分别为 10． 16、4． 16 cm;经
student t检验法分析，接种与不接种印度块菌的思
茅松株高和冠径均有显著差异(P = 0． 0001)。印度
块菌能显著促进思茅松的生长。
图 5 哈蒂氏网
Fig． 5 Hartig net
图 6 根毛上有菌丝缠绕
Fig． 6 Ｒoot hairs winded by T． indicum hyphae
图 7 云南松与印度块菌形成菌根，示菌丝套
Fig． 7 P． yunnanensis mycorrhized by Tuber indicum，showing the
mantle
接种与不接种印度块菌的云南松株高平均值分
别为 12． 50、6． 18 cm;冠径平均值分别为 9． 57、4． 50
cm;经 t检验法分析，接种与不接种印度块菌的云南
松株高和冠径均有显著差异(P = 0． 0001)。印度块
菌能显著促进云南松的生长。
2． 4 不同 pH值的基质对印度块菌的侵染影响
不同 pH 值的基质对印度块菌的侵染结果表
明，在 pH值 6． 5、7． 0、7． 5 的条件下，印度块菌对思
茅松均可形成侵染，菌根感染率均为 100 %。
2． 5 菌根分子检测
PCＲ 扩增结果见图 8，结果表明，接种用印度块
菌、菌根样品 1 和菌根样品 2 均能扩增得到 750 bp
左右的条带。通过测序表明，与思茅松形成菌根的
1331 期 张春霞等:印度块菌和思茅松菌根合成的研究
2000 bp
1000 bp
750 bp
500 bp
250 bp
100 bp
图 8 ITS序列琼脂糖凝胶电泳检测结果
Fig． 8 The results of agarose gel electrophoresis of ITS fragments
真菌为印度块菌，ITS序列同源性为 100 %。
3 讨 论
在基质 1 和基质 2 中，印度块菌均能侵染思茅
松，形成典型的外生菌根。基质 1 菌根感染率为
100 %，基质 2 菌根感染率仅为 50 %。基质 1 含有
腐殖质(鸡粪)和石灰土，含有丰富的活性钙和有益
于块菌菌根发育的微生物，而基质 2 无论在活性钙
的含量上和有益于块菌菌根发育的微生物种群的数
量上都远不如基质 1，这可能是基质 2 的感染率较
低的原因。基质 1 可以作为将来生产思茅松块菌苗
的备选基质。
印度块菌能侵染思茅松、云南松，并形成典型的
外生菌根。胡炳福等报道印度块菌能侵染马尾松、
华山松、云南松、青冈栎、麻栎、槲栎和榛子，形成典
型的外生菌根［7 ～ 8］。柳成益等报道印度块菌能侵染
云南松、华山松和板栗，形成典型的外生菌根［9］。
张小雷等报道印度块菌能与园叶杨形成外生菌
根［10］。苏开美等报道印度块菌能与化香树形成外
生菌根［1］。这说明，印度块菌的共生树种专化性并
不强，宿主范围较广。虽然在天然环境中，思茅松下
尚无发现印度块菌，但是在人工条件下，思茅松很容
易和印度块菌合成菌根，共生的亲和力很好。这是
首次成功用思茅松作为印度块菌的寄主，合成菌根
苗的研究报道。本研究为印度块菌的人工栽培提供
了新的寄主，在思茅松天然分布地区发展块菌生产
上有重要意义。
思茅松、云南松接种印度块菌形成菌根后能促
进植物生长，而且对思茅松、云南松的株高、冠径均
有显著的促进作用。在 pH值 6． 5、7． 0、7． 5 的条件
下，印度块菌均能侵染思茅松，且菌根感染率均为
100 %。说明印度块菌生态适应范围比法国黑孢块
菌要广得多，更易于人工种植。这在进行荒山植被
恢复的工作中意义重大。
用印度块菌接种思茅松合成菌根成功，为在思
茅松地区发展印度块菌的栽培走出了第一步，但这
仅仅是开始，因为还无法生产出块菌产品，只有将菌
根苗移到合适的地方造林，并经多年精心培育长出
子实体，才能算是印度块菌半人工栽培成功。今后
还要选择适宜的地方建立思茅松印度块菌种植基
地，进一步开展林间管理等技术问题的研究探索。
印度块菌半人工接种工作中，选择适宜的接种
苗龄、接种液浓度和用量，不仅可提高菌根感染率，
还能大大减少块菌的用量，节省接种费用。筛选最
适宜的接种苗龄、接种液浓度和用量，尚待进一步研
究探索。
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(责任编辑 王家银)
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