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刺五加叶中的主要活性成分分析



全 文 :Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第15卷 第7期
Vol.15 No. 7
2009年 7月
July.2009
刺五加叶中的主要活性成分分析
刘伟玲
(娄底中心医院,湖南 娄底 417000)
[摘要] 目的:分析刺五加叶中的主要活性成分。方法:采用多种试剂及仪器对刺五加叶的氨基酸、无机元素、总糖、黄酮进
行了含量测定。结果:刺五加叶中含有16种氨基酸,其中7种为人体所必需的,以谷氨酸和天门冬氨酸的含量最高。并含有22种无
机元素,其中宏量元素3种,微量元素10余种;测得刺五加叶中总糖含量为1.85%,总黄酮含量为2.61%。结论:成分的明确为刺五
加质量控制新模式提供了依据。
[关键词] 刺五加叶;氨基酸;微量元素;总糖;黄酮
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2009)07-0087-02
Analysis of Main Active Components in the Leaves of Acanthopanax Senticosus
LIU Wei-ling
Loudi City Central Hospital, Loudi, Hunan,China, 417000
[Abstract] Objective:To analyze main active components in the leaves of acanthopanax senticosus.Methods:The paper
adopted various kinds of reagents and mistruments todetermine the content of Amino acids, element, total carbohydrat,
flavonoids from the leaves and stems of Acanthopanax senticosus. Results:The content determinations are as follows: It con-
tains 16 kinds of Amino acids, seven of them are essential to human body,highly with Glu and Asp. Also,22 kinds of ele-
ments, with 3 kinds of macroelelement and more than 10 kinds of microelement are contained. The content of total carbohy-
drates is 1.51% and total flavonoids is 0.755%.Conclusion:This method supplied the foundation for the new model of the qual-
ities controlling in Acanthopanax senticosus.
[Key words] Acanthopanax senticosus; Amino acids; Microelement; Total carbohydrat,Flavonoids
刺五加[Acanthopanax senticosus(Rupr et Maxim) Harms]
系五加科植物,是我国北方地区特产药材之一。其根、根茎
(五加参)、叶、花及果均可入药。刺五加是一种很好的补益强
壮药用植物,具有扶正固本、益智安神和补肾健脾等功效,其
资源较为丰富。现代临床已用于治疗心脑血管类疾病、白细
胞减少症、低血压、风湿性关节炎和肿瘤等。
刺五加中含有苷类、黄酮类等成分。近年来,国内外学者
经过大量的研究和实验,证实刺五加含有多种活性成分。而
对叶的研究报道相对较少。笔者对刺五加叶中微量元素、氨
基酸、总糖及黄酮进行了综合分析并进行了含量测定。其中
黄酮类化合物是刺五加中重要的药理活性成分。
1 仪器及试药
1.1 仪器和设备 日立氨基酸全自动分析仪、等离子直读光
谱仪、原子吸收分光光度计、分析天平、2100分光光度计、索
氏提取器。
1.2 试剂和材料 所有溶剂均为分析纯,刺五加叶从吉林省
长白山地区采集。
2 实验步骤
2.1 氨基酸含量测定
2.1.1 材料处理 将干燥恒重的样品粉碎,过60目筛;在分
析天平上称取样品50 mg,分别放置于安瓿底部,用注射器注
入6 mol/L盐酸20 mL,然后接通真空泵,抽至真空,迅速在酒
精喷灯火焰上封口,置沸水浴锅中水解。取出放冷至室温,打
开管口,将水解液过滤至50 mL容量瓶中,用盐酸冲洗水解管
及滤纸,并定容至刻度,取此稀释的水解液2 mL置小蒸发皿
中,在水浴上蒸干,残渣用蒸馏水溶解并蒸干。然后精确加入
0.05 mol/L盐酸2 mL,使每毫升含相当0.15 g左右粗蛋白(样品
中粗蛋白按12%-15%计算),准备上机测定。
2.1.2 上机测定 将上述已处理好的试样,用氨基酸全自动
分析仪进行测定,结果见表4。
2.2 微量无机元素分析
2.2.1 原料的处理和样品溶液的制备:(1)玻璃器皿预先在
热硝酸中浸渍,用去离子水充分洗涤。(2)选取刺五加叶样
品,刷净泥土,再用去离子水淋洗干净置烘箱内干燥,精密称
取其恒重的干燥细粉0.5 g置于50 mL锥形瓶中,加入10 mL浓
硝酸,浸泡,于200 ℃-300 ℃电热板上加热30 min后取下,冷
却,加10 mL硝酸-高氯酸(1∶1)混合液,继续煮至没有浓白烟
产生,即消煮完毕,加热蒸去过量硝酸,取下冷却后用0.1 mol/L
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2009.07.042
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July.2009Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
HNO3洗至50 mL容量瓶中备用。
2.3 平行调制全过程的空白试验溶液
2.4 样品分析 将上述样品于等离子直读光谱仪和原子吸
收分光光度计上进行测定,结果见表5。
3 刺五加叶总糖的测定
3.1 葡萄糖标准曲线的绘制 将以分析天平精密称取干燥
恒重的无水葡萄糖100 mg置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水溶
解并定容至刻度,混匀,使成1 mg/mL,取9支25 mm×250 mm试
管,按表1加试剂,将各管混合均匀,在沸水浴中加热5 min,取
出后立即在冷水中冷却,再向各管加入21.5 mL蒸馏水,混匀,
于520 nm处测定吸收值,并以葡萄糖mg数为横坐标,以吸收
值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为Y =0.0715 +
2.3092X,r=0.9997。
表1 各试剂加入量 (mL)
管号项目数量 0 1 2 3 4 5 6 7 8
葡萄糖标准液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.8
蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.2
3,5-二硝基水杨酸 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
3.2 样品溶液的制备 分析天平上精密称取样品1000 mg,
放入锥形瓶中,加蒸馏水30 mL、6 mol/L HCl 20 mL,于沸水浴
中加热水解40 min,取一滴水解液于白瓷板上,以碘-碘化钾
试剂检查,水解液不呈蓝色为水解完全,冷后加1滴酚酞指示
剂,以6 mol/L NaOH中和并滤至200 mL容量瓶中,残渣以蒸馏
水冲洗,然后定容至刻度,混匀,备用。
3.3 样品的测定 取25 mm×250 mm试管按表2加入试剂进
行测定,计算公式如下:总糖%=(样品水解后葡萄糖毫克数×
样品稀释体积)/样品重量。
表2 各试剂加入量 (mL)
管号项目数量 0 1 2 3
样品测定液 0 1.0 1.0 1.0
蒸馏水 2.0 1.0 1.0 1.0
3,5-二硝基水杨酸 1.5 1.5 1.5 1.5
4 刺五加叶中黄酮总含量测定
4.1 比色法测定总黄酮 标准曲线的制作:精密称取芦丁对
照品3.4 mg,用无水乙醇溶解并稀释至50 mL定容,作为对照
溶液,取7支25 mm×250 mm试管,各取对照品溶液0.5,1.0,2.0,
3.0,4.0,5.0 mL,分别按表3加乙醇至5 mL,摇匀,再各精确加
入0.1 mol/L三氯化铝溶液3.0 mL及1 mol/L醋酸钠溶液5.0 mL,
摇匀,静置40 min,于波长420 nm处测定吸收度,绘制标准曲
线,得标准曲线的回归方程为Y=0.085X-0.00926,r=0.9987。
表3 各试剂加入量 (mL)
管号项目数量 0 1 2 3 4 5 6
芦丁对照品溶液 0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
乙醇 5 4.5 4 3 2 1 0
三氯化铝溶液 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
醋酸钠溶液 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
4.2 样品测定 取刺五加叶粗粉5.00 g,用石油醚回流脱色,
至无色,取出干燥。再用无水乙醇加热回流至提取液无色,滤
液加0.16 g活性炭,80℃水浴脱色10 min,抽滤,滤液再脱色一
次,抽滤回收乙醇,浓缩物加一定量水。再加活性炭脱色,抽
滤,滤液回收乙醇,浓缩物蒸干,再用无水乙醇定容于100 mL,
精密量取溶液5 mL,按表3再加入其他试剂依法测定吸收度,
计算含量。
4.3 结果 见表4-5。
表4 刺五加叶中氨基酸检查结果 (%)
项目名称 实验数据 项目名称 实验数据
天门冬氨酸 1.492 苏氨酸 0.242
丝氨酸 0.580 谷氨酸 1.500
干氨酸 0.652 丙氨酸 0.600
缬氨酸 0.680 蛋氨酸 0.038
异亮氨酸 0.340 亮氨酸 0.377
酪氨酸 0.535 苯丙氨酸 0.805
赖氨酸 0.145 组氨酸 0.395
精氨酸 0.343 脯氨酸 0.554
合 计 9.178
注:检测依据,参照GB/T14965-1994。
表5 刺五加叶微量元素分析结果 (ω(B)/10-6)
元素符号 Al Fe Ca Mg B Ba Cd Co
含 量 300.2 65.8 20000 2778 35.4 240.8 0.39 <0.01
元素符号 Cr Cu La Mn Mo Ni P Pb
含 量 2.98 10.00 0.35 160.5 0.66 0.22 52.03 4.05
元素符号 Sr Ti V Y Zn Be
含 量 60.22 <0.01 3.5 <0.01 52.01 <0.01
结果表明:刺五加叶中含有16种氨基酸,其中7种为人体
必需,其中谷氨酸和天门冬氨酸含量较高。并含有10多种微
量元素,其中Ca含量最多。测得刺五加叶中总糖含量为
1.85%,总黄酮含量为2.61%。
5 讨 论
刺五加作为我国传统中药,临床应用广泛。随着对刺五
加活性成分及药理作用的不断深入研究,使其临床用药范围
不断扩大。本文对刺五加叶的活性成分进行了综合分析及含
量测定,叶中黄酮类成分含量最高。其黄酮类成分具有广泛
的药理活性,能扩张血管,增加冠状动脉血流量,降低心肌耗
氧量,抗心肌缺血,改善心电图,抗异位心律,降低血压,镇静
安神。本实验为开发刺五加叶功能保健食品提供了理论依据
及物质基础,同时可以扩大药源及其应用范围,有效的利用
资源。可以开发刺五加叶茶、食物添加剂等,应用于食品工
业。
(收稿日期:2008-12-20 编辑:朱民)
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