全 文 ：西北农业学报　 2005, 14( 3): 127～ 129
Acta Agriculturae Boreali -occidentalis Sinica
九牛造活性成分的提取分离及活性检测
原春兰 , 李宗孝
(宝鸡文理学院化学化工系 ,陕西省植物化学重点实验室 ,陕西宝鸡　 721007)
摘　要: 以九牛造为原料 ,经过回流提取、系统溶剂萃取 ,采用小叶蝶添加法对各供试样品进行检测 ,结果表
明 ,其石油醚和苯萃取物对三龄粘虫具有较高的毒杀活性 ,其 72 h的拒食率和死亡率分别为 100% 、 100%和
80. 0% 、 83. 3% ,表明具有杀虫活性的有效部分属极性较小的物质。 据此用苯提取浓缩 ,经薄层层析和柱层析
后得到 4种分离物 ,它们在浓度为 1‰时对三龄粘虫的毒杀活性测定结果表明 ,除 4# 样外 ,其它各样 72 h拒
食率均高于 50%。
关键词: 九牛造 ; 活性 ; 活性成分 ; 柱层析
中图分类号: Q946. 8　　　　文献标识码: A　　　　　文章编号: 1004-1389( 2005) 03-0127-03
Extracting and Separating Active Parts and Testing the Intoxicating
Activity fromEuphorbia Hylonoma Hand. - Mzt.
YUAN Chun-lan and LI Zong-xiao
( Department of Chem. & Chem. Eng. , The Key Laboratory of Ph ytoch emist ry, Baoji University
of Art s and Science, Baoji Sh aanxi　 721007, China)
Abstract: By means of ref lux abst racting and systemic solv ent sepa ra ting method, this paper re-
searched the activ e pa rts f rom. Euphorbia hylonoma Hand. -M zt. By measured bio activi ty of the sam-
ples using the conventional leaf disk method, a pet roleum ether and benzene ex t racts o f Euphorbia hy-
lonoma Hand. -M zt. have bet ter intoxicating activi ties to 3 rd armyw orm. Their antifeeding ra te and
died ra te of 72 h to 3rd armyw orm were respectiv ely100% , 100% and 80. 0% , 83. 3% . The 4 kinds of
substances w ere obtained from its benzene ex t racts by TLC and column chromatog raphy. Besides of
4# , the anti feeding ra te of oth ers in 72 h w ere all ov er 50% in 1‰ concentra tion. We can draw a con-
clusion tha t the activ e substances of killing insects w ere non-pola r.
Key words: Euphorbia hylonoma Hand-M zt; Bio activi ty; Activ e substance; Column chroma tog raphy
　　植物农药已成为当前农药研究的热点 [1, 2 ]。我
国秦岭山脉蕴藏着大量药用植物。通过对秦岭太
白山区上百种植物的筛选 ,发现蕴藏量丰富的中
草药九牛造对粘虫、蚱蜢、蟋蟀等具有较强的毒杀
作用。
九牛造 ,别名五朵云、翻天印、震天雷 , 为大
戟科大戟属植物湖北大戟 (九牛造 ) Euphorbia
hylonoma Hand. -M zt. 的干燥根皮 ,以根或地上
部分入药。 根具有通便利水、消积破瘀、止痛的功
效 ,用于治疗大便不通 ,肝硬化腹水 ,瘀血作痛等。
地上部分有止血、止痛、生肌之功效 ,适用于外
伤 [3 ]。虽然其入药已久 ,但作为天然农药尚未见研
究 [4 ]。经提取分离及活性测定 ,九牛造的甲醇提取
物对三龄粘虫具有较高的杀虫活性。 为了获得杀
虫活性物质 ,笔者对其进行了研究。
收稿日期: 2004-12-30　　修回日期: 2005-02-16
基金项目:陕西省自然科学基金项目 ( 2002B22) ,陕西省重点实验室重点科研项目 (04 JS37) ,西北农林科技大学无公害农药研究服
务中心开放课题。
作者简介:原春兰 ( 1962- ) ,女 ,副教授 ,主要从事生物振荡及中草药研究。 电话: 0917- 3368932, E-mail: ycl_ 313@ eyou. com
1　材料与方法
1. 1　原料及试剂
九牛造 (采自陕西太白山 ) ,风干 ,磨成粉 ,备
用。 试剂均为分析纯。柱层析硅胶 300～ 400目
(青岛海洋 )。
1. 2　主要仪器及装置
连续回流提取装置 ,旋转蒸发仪 (上海产 ) ,
SHB-B型循环水式多用真空泵 (郑州 )。
1. 3　实验方法
1. 3. 1　九牛造的系统分离　 九牛造粗粉 400 g
, 加入适量甲醇浸泡 24 h后 , 用 10倍量的甲醇
分 3次回流提取 , 抽滤 ,合并滤液 ,出现浅黄色菊
花状结晶 ,放置 16 h,过滤 ,甲醇重结晶 2次 ,得柱
状晶体 A。滤液用旋转蒸发仪蒸去溶剂至 30 mL,
得甲醇提取物 ( 1#样 )。将上述提取物加 230 m L
水悬浮 , 采用系统溶剂分离法 [5 ]进行分离 ,依次
用石油醚、苯、氯仿、正丁醇萃取 3～ 4次 ,每次
150 mL,萃取物挥发掉部分溶剂至 30 mL得 2#
～ 7#样。其提取分离流程见图 1。
图 1　九牛造活性成分的提取分离流程
Fig. 1　 The process of extract ing and separat ing act ive parts fromEuphorbia hy lonoma
1. 3. 2　活性检测方法　采用小叶蝶添加法分别
测定供试样品对三龄粘虫的毒杀活性 ,并用相应
的溶剂作对照。试虫为三龄初期粘虫 ,由西北农林
科技大学无公害农药研究服务中心提供并测试。
将新鲜的面积约 1 cm2的小麦叶片在药液中
浸 1～ 2 s,取出置于室温晾干 ,备用。 每处理重复
3次 ,每重复 10头试虫 ,将各处理试虫置于养虫
室 ( T= 25± 1℃ , RH= 70% ～ 80% , L /D= 12h /
12h)中 ,分别在 24、 48和 72 h检查试虫取食情况
并分级记载 ,同时记载试虫死亡情况 ,以下式计算
拒食率和试虫校正死亡率。 计算公式如下:
取食指数 (% ) = ∑ (为害级别×各级叶蝶
数 ) / (总叶蝶数×最高为害级别×参试总虫数 )×
100% ;拒食率 (% )= [对照取食指数 (% ) - 处理
取食指数 (% ) ] /对照取食指数 (% )× 100% ; ;死
亡率 (% )= 死亡虫数 /参试总虫数× 100% ;校正
死亡率 (% ) = [对照死亡率 (% ) - 处理死亡率
(% ) ] /( 1- 对照死亡率 )× 100% 。
1. 3. 3　薄层层析　九牛造样品的分离采用硅胶
G,鉴别采用紫外灯和碘蒸气显色。将样品点于硅
胶板上 ,分别以环己烷～ 乙酸乙酯、苯～ 乙酸乙
酯、石油醚～ 乙酸乙酯为展开剂 ,改变其体积比进
行展开 ,待溶剂晾干后 ,于紫外灯下观察荧光点并
作标记 ,再用碘蒸气显色 ,观察各展开条件下样品
的分离效果。获得最佳展开条件为环己烷～ 乙酸
乙酯= 25∶ 1。
2　结果与讨论
2. 1　杀虫活性物质的确定
由表 1可以看出 ,采用系统溶剂分离获得的
2
# 和 3# 样对三龄粘虫有较强的拒食和毒杀活性 ,
第三天拒食率和死亡率分别为 100%和 100%及
80%和 83. 3% ; 4# 样对粘虫的活性主要表现为拒
·128· 西　北　农　业　学　报 14卷
食作用 ,毒杀作用较小 ,其第三天拒食率为
87. 2% , 死亡率仅为 30% ; 6# 的拒食率为 0, 死
亡率为 20% 。说明九牛造中活性成分主要为极性
较小的物质。为此特采用石油醚和苯作提取剂 ,再
对它们进行薄层层析 ,发现两种溶剂提取出的主
要物质大致相同 ,故对它的苯提取物进行柱层析。
表 1　九牛造系统溶剂分离物对三龄粘虫的毒杀活性
Table 1　 The intoxicating activity of the extract by solvent partit ion
against 3rd armyworm fromEuphorbia hylonoma Hand. -mzt
样品号
Sample No.
样品
Sample
总虫数 /头
Total amount of 3rd
armyw orm
拒食率 /% Anti feeding rate
24 h 48 h 72 h
死亡率 /% Died rat
24 h 48 h 72 h
1# 甲醇提取物 M ethanol ex t ract 30 71. 0 64. 7 61. 1 0 13. 3 30. 0
CK1 甲醇 Methanol 30 - - - 6. 7 6. 7 6. 7
2# 石油醚萃取物 Pet roleum eth er ex t ract 30 100 100 100 13. 3 23. 3 80. 0
CK2 石油醚 Pet roleum eth er 30 - - - 3. 3 13. 3 13. 3
3# 苯萃取物 Benzene ex t ract 30 100 100 100 0 16. 7 83. 3
CK3 苯 Benzene 30 - - - 3. 3 3. 3 6. 7
4# 氯仿萃取物 Ch loroform ext ract 30 93. 3 92. 6 87. 2 0 10. 0 30. 0
CK4 氯仿 Ch loroform 30 - - - 0 0 0
5# 正丁醇萃取物 n-Bu tanol ex t ract 30 - - - - - -
6# 水相 Water phase 30 0 0 0 3. 3 3. 3 20. 0
CK6 水 Water 30
7# 沉淀物 Precipi tate 30 - - - - - -
2. 2　九牛造苯提取物的柱层析及活性测定
取九牛造粗粉 1. 0 kg , 加入 10倍量的苯提
取回流 3次 , 每次 1. 5 h, 抽滤 ,合并滤液 ,浓缩
至 30 mL,备用。经柱层析 ,分离获得 4种碘蒸气
显色物质 (以 J1、 J2、、 J3及 J4表示 ) ,其中 J1= 0.
031 g, J2= 0. 20 g , J3= 0. 38 g , J4= 0. 27 g。用小
叶蝶添加法测定它们在浓度为 1‰时的生物活
性 ,结果见表 2。
表 2　九牛造苯提取物的分离物活性检测结果
Table 2　 The bioactivity of the benzene extract against
3 rd armyworm fromEuphorbia hylonoma Hand. -mzt
样品号
Sam ple
No.
浓度
Concen
-t ration
总虫数 /头
Total amount
of 3rd
armyw orm
拒食率 /%
An tifeeding rate
24 h 48 h 72 h
72 h后死亡率 /%
Died rat
J1 1‰ 30 63. 1 35. 7 56. 4 0
J2 1‰ 29 46. 9 32. 1 55. 9 0
J3 1‰ 32 62. 6 40. 1 52. 7 0
J4 1‰ 27 38. 0 35. 6 43. 4 0
　　从表 2可以看出 ,在供试剂量下 ,分离获得的
4种样品有 3种都对三龄粘虫有一定的拒食活
性 , 72 h拒食率均高于 50% 。
3　结 论
由上述实验结果可以看出 ,九牛造的甲醇提
取物对三龄粘虫具有较强的毒杀活性 ,杀虫活性
物质主要是极性较小的物质。经柱层析获得 4种
组分 ,它们在浓度为 1‰时对三龄粘虫具有一定
的拒食活性。
参考文献:
[1 ]　刘长令 . 植物杀虫剂前景广阔 [ J ] . 世界农业 , 1998, 5: 36
～ 37.
[2 ]　梁文平 , 郑斐能 , 王　仪 ,等 . 21世纪农药发展的趋势:绿
色农药与绿色农药制剂 [ J ]. 农 药 , 1999, 38( 9): 1～ 2.
[3 ]　宝鸡市卫生局 . 太白山本草志 [M ]. 西安: 陕西科技出版
社 , 1993.
[4 ]　郭增军 ,朱　蓉 ,等 . 九牛造化学成分的研究 [ J] . 中国中药
杂志 , 1995, 12: 744～ 745.
[5 ]　张继杰 . 天然药物化学 [M ] . 北京:人民出版社 , 1997.
·129·3期　　　　　　　　　　　　原春兰等:九牛造活性成分的提取分离及活性检测